2019～2020 年攀枝花市縣（區(qū)）獸醫(yī)實驗室檢測能力比對分析

張昕彤，熊 杰，梁易曉，蒲楊柳，陳富忠，胡生富

（四川省攀枝花市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 攀枝花 617000）

獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室是指隸屬于各級獸醫(yī)主管部門，承擔(dān)動物疫病檢測、診斷和監(jiān)測等工作的獸醫(yī)實驗室。開展實驗室檢測能力比對是加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理的主要抓手，也是評價和提高實驗室管理水平和檢測能力的重要手段［1］。檢測能力比對結(jié)果客觀地反映了全市縣（區(qū)）獸醫(yī)實驗室的檢測能力，提示獸醫(yī)主管部門進一步加強實驗室建設(shè)，加大資金投入，提升技術(shù)人員業(yè)務(wù)能力，規(guī)范實驗室檢測流程，保證檢測結(jié)果的正確率［2］。

1 材料與方法

1.1 比對項目 2019 年攀枝花市各縣（區(qū)）實驗室因人員及設(shè)施設(shè)備等原因無法開展病原學(xué)檢測，所以此次比對試驗所設(shè)項目均為血清學(xué)檢測。分別設(shè)有豬瘟抗體、小反芻獸疫抗體和H5亞型禽流感抗體（H5-AI Ab）3 個檢測項目，各縣（區(qū)）實驗室從中抽取2個項目進行比對檢測。2020 年全市共設(shè)H5-AI Ab、O 型口蹄疫抗體（O-FMD Ab）和非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸檢測3 個比對項目。為適應(yīng)非洲豬瘟防控需要，攀枝花市首次將ASFV核酸檢測納入比對項目。除一個縣（區(qū)）實驗室不具備ASFV 核酸檢測能力外，其余縣（區(qū)）均參加了此次3個項目比對。

1.2 比對方法 H5-AI Ab 檢測采用HA-HI 方法，豬瘟抗體檢測采用阻斷ELISA 方法，小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab 檢測采用ELISA 方法，ASFV 核酸檢測采用熒光定量PCR 方法，具體操作均參照試劑盒說明書進行。

1.3 比對材料

1.3.1 比對試劑 由攀枝花市動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一提供禽流感病毒H5亞型（Re-11株）血凝抑制試驗抗原（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司出品）和標準陰性、陽性血清；豬瘟、小反芻獸疫和口蹄疫病毒O 型ELISA 抗體檢測試劑盒（無錫優(yōu)聯(lián)出品）；非洲豬瘟病毒熒光PCR 檢測試劑盒（青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心出品）；DNA提取試劑由各實驗室自備。

1.3.2 比對樣品 每個項目每個縣（區(qū)）準備比對樣品5份，并設(shè)置重復(fù)樣品。其中H5-AI Ab檢測比對樣品的抗體滴度設(shè)置＜1 log2、4 log2和7 log2 3 個參考值（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司制備）；豬瘟、小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab及ASFV 核酸檢測比對樣品設(shè)置陰性、陽性2 個參考值。隨機抽取，驗證后制備盲樣，分裝、編號和保存，由各縣（區(qū)）自行領(lǐng)取。

1.3.3 評判標準 H5-AI Ab檢測：檢測結(jié)果與參考值一致或±1；豬瘟、小反芻獸疫抗體和OFMD Ab 及ASFV 核酸檢測：陽性樣品檢測結(jié)果為“陽性”，陰性樣品檢測結(jié)果為“陰性”。

2 結(jié)果

2.1 總體結(jié)果 2019 年全市各縣（區(qū)）檢測準確率平均為94%，其中H5-AI Ab 檢測準確率為88%，豬瘟和小反芻獸疫抗體檢測準確率為100%；2020 年全市各縣（區(qū)）檢測準確率平均為95.7%，其中H5-AI Ab 檢測準確率為96%，OFMD Ab 檢測準確率為100%，ASFV 核酸檢測準確率為90%。具體見表1和表2。

表1 2019年全市各縣（區(qū)）實驗室比對結(jié)果匯總表

表2 2020年全市各縣（區(qū)）實驗室比對結(jié)果匯總表

2.2 豬瘟、小反芻獸疫抗體和O-FMD Ab檢測結(jié)果 2019 年有2 個縣（區(qū)）抽到豬瘟抗體檢測，3 個縣（區(qū)）抽到小反芻獸疫抗體檢測，檢測準確率均為100%；2020 年5 個縣（區(qū)）檢測O-FMD Ab的準確率均為100%。

2.3 H5-AI Ab 檢測結(jié)果 2019 年有3 個縣（區(qū)）檢測準確率為100%，有2個縣（區(qū)）檢測準確率分別為60%和80%，其中參考值為7 log2 的樣品，有2個實驗室的檢測結(jié)果相差2個滴度，參考值為4 log2 的樣品，有1 個實驗室的檢測結(jié)果相差2個滴度。2020年有4個縣（區(qū)）檢測準確率為100%，有1 個縣（區(qū)）檢測準確率為80%，其中參考值為4 log2 的樣品，該實驗室檢測結(jié)果相差2個滴度。

2.4 ASFV 核酸檢測結(jié)果 2019 年未開展此比對項目，2020 年首次納入比對，其中有3 個縣（區(qū)）檢測準確率為100%，1個縣（區(qū)）檢測準確率為60%（有2 個陽性樣品未檢出），還有1 個縣（區(qū)）不滿足條件，未參加此項目檢測。

3 分析

3.1 檢測能力對比 從總體比對結(jié)果來看，攀枝花市各縣（區(qū)）獸醫(yī)實驗室的整體檢測水平穩(wěn)步提升。檢測準確率從2019 年的94%上升到2020年的95.7%，說明全市縣（區(qū)）級獸醫(yī)實驗室具備檢測相應(yīng)動物疫病的能力，但個別實驗室對個別項目的檢測結(jié)果仍有偏差，還需查找原因并加以改進。

3.2 檢測方法的準確率對比 從不同檢測項目的比對結(jié)果來看，三種檢測方法的準確率依次為ELISA＞HA-HI＞PCR（圖1）。

圖1 2019～2020年不同檢測方法的準確率對比

ELISA 檢測方法的準確率最高，均為100%，可能與ELISA 作為最常用的血清學(xué)檢測方法，采用成品檢測試劑盒，操作過程較為簡單［3］，試驗不易受主觀因素影響有關(guān)。HA-HI 檢測方法的準確率從2019 年的88%上升到2020 年的96%，說明全市部分縣（區(qū)）實驗室運用HA-HI 試驗檢測的能力有一定提高，但HA-HI 試驗易受儀器設(shè)備、抗原、紅細胞、人員操作及主觀判讀等因素的影響，試驗結(jié)果易出現(xiàn)偏差。PCR檢測方法作為病原學(xué)檢測常用的方法，從樣品處理、核酸提取、擴增到結(jié)果判定，操作過程比較復(fù)雜，對儀器設(shè)備和操作人員技術(shù)的要求較高。從比對結(jié)果可以看出，全市還有一個實驗室因不滿足條件而未開展此項目檢測，另外一個實驗室則是未檢出陽性樣品，原因可能有以下幾點：一是與實驗室購置的簡易PCR 檢測儀器靈敏度及提取試劑盒有關(guān)；二是與移液器等儀器設(shè)備未定期進行質(zhì)量檢定有關(guān)；三是病毒核酸檢測技術(shù)剛在縣級實驗室普及，人員操作尚不熟練［4］。

4 結(jié)語

實驗室檢測工作是做好動物疫病防控的技術(shù)支撐，檢測水平的高低、檢測結(jié)果的準確與否直接關(guān)系到動物疫病防控工作的推進和各項防控措施的實施［5］。通過能力比對可以看出全市縣級實驗室檢測能力仍需加強，具體可從以下幾方面著手：一是加強組織領(lǐng)導(dǎo)，強化實驗室建設(shè)，加大實驗室資金投入，配置精良儀器設(shè)備并定期檢定更新；二是定期開展實驗室人員操作技能培訓(xùn)，提升人員素養(yǎng)，穩(wěn)定人員隊伍；三是完善實驗室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，嚴格操作程序，規(guī)范實驗活動，保證實驗室檢測工作常態(tài)化，提高實驗室檢測工作的規(guī)范性和科學(xué)性?！?/p>