• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    BMPR-IB、BMP15、ESR、GDF9與ADAMTS1基因多態(tài)性與杜泊羊繁殖性狀的關(guān)聯(lián)性分析

    2022-01-20 03:51:04孫新穎李美玉朱新遠董煥聲潘慶杰
    中國畜牧雜志 2022年1期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)羔湖羊綿羊

    孫新穎,李美玉,孫 鵬,顏 碩,朱新遠,董煥聲*,潘慶杰*

    (1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東青島 266109;2.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山東濰坊 261061)

    目前國內(nèi)外對影響綿羊多胎性狀的基因已有大量研究?;蚴且呀?jīng)確定的能夠影響綿羊多胎的基因。、和也相繼被證實為影響綿羊多胎性狀的相關(guān)基因。但在國內(nèi)綿羊品種中存在并發(fā)現(xiàn)的高繁殖力基因突變較少。狄冉等利用PCR-SSCP技術(shù)在8個品種的山羊、綿羊中并未檢測到FecXR突變。金慧慧等通過測序法與PCR-RFLP技術(shù)在綿羊與山羊中檢測G7和FecGV突變情況,結(jié)果均不存在突變。王金鑫等利用PCR-RFLP技術(shù)在17個綿羊品種中檢測到基因FecTT位點無突變。

    杜泊羊以長勢快、肉質(zhì)嫩而聞名國內(nèi)外,其遺傳性較其他綿羊品種更穩(wěn)定,在純繁或是改良后代性狀方面,都表現(xiàn)出優(yōu)良的生產(chǎn)繁殖性能。然而,杜泊羊的產(chǎn)羔數(shù)較少、產(chǎn)羔率低,極大影響了其作為肉羊的經(jīng)濟性狀。因此,尋找與杜泊羊產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)的候選基因尤為重要。湖羊因其高產(chǎn)而舉世聞名,是中國優(yōu)良的綿羊品種,這些年來由湖羊生產(chǎn)的羊肉在中國羊肉市場占比較大。但是直到現(xiàn)在,湖羊多胎基因研究通常僅限于檢測單個突變,關(guān)于湖羊其他基因位點多態(tài)性的信息很少。因此,開展綿羊多羔性狀相關(guān)基因的研究,對比高繁殖力與低繁殖力羊品種突變位點多態(tài)性異同對于揭示綿羊高繁殖力的機制、利用分子標記輔助選擇來迅速提高杜泊羊等產(chǎn)羔數(shù)少的綿羊種類的繁殖性能具有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 本實驗所用60只黑頭杜泊羊均來自山東省濰坊市某種羊場;47只湖羊均來自山東省聊城市某種羊場,杜泊羊與湖羊分別處于同一飼養(yǎng)環(huán)境,健康狀況良好。用75%酒精棉球?qū)⒍挪囱蚨壉砻鎻氐紫?,稱取耳組織10 g,放入裝有無水乙醇的2 mL離心管中,標好序號,并與羊耳號一一對應(yīng);帶回實驗室放置-20℃保存。湖羊與杜泊羊產(chǎn)仔記錄參照各羊場中產(chǎn)仔數(shù)記錄,統(tǒng)計母羊每胎平均產(chǎn)羔數(shù)。

    1.2 實驗試劑和儀器 組織基因組DNA提取試劑盒(天根);DL2000 DNA Marker、2×Pro Taq預(yù)混液(含染料)由TaKaRa公司提供;核酸染料(生工);恒溫搖床;離心機;電泳儀。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 引物設(shè)計與合成 根據(jù)所研究的基因位點上下游約200 bp序列設(shè)計引物,引物由北京擎科生物科技有限公司合成,引物序列見表1。

    表1 引物序列信息

    1.3.2 PCR擴增 PCR擴增以綿羊基因組DNA為模板。PCR反應(yīng)體系20 μL:PCR預(yù)混液10 μL,上下游引物(10 mol/L)各0.5 μL,DNA模板為1 μL,Rnase free HO為8 μL。PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性30 s,98℃變性10 s,退火30 s,72℃延伸1 min,共25個循環(huán);72℃最終延伸2 min;4℃保存。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

    1.3.3 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測 利用DNAStar軟件中的EditSeq翻譯測序得到的基因序列,使用protean預(yù)測蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)。

    1.3.4 遺傳變異分析 統(tǒng)計基因頻率、基因型頻率、Hardy-Weinberg平衡,并分析群體純合度(Ho)、雜合度(He)、有效等位基因數(shù)(Ne)和多態(tài)信息含量(PIC)。

    1.3.5 基因位點多態(tài)性與綿產(chǎn)羔數(shù)關(guān)聯(lián)性分析 利用GraphPad Prism 6軟件將杜泊羊基因位點多態(tài)性與產(chǎn)羔數(shù)之間進行關(guān)聯(lián)性分析,結(jié)果以“平均值±標準誤”表示,以<0.05為差異顯著性判斷標準。

    2 結(jié)果分析

    2.1 DNA檢測結(jié)果 綿羊基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳條帶清晰且明亮,如圖1所示。利用核酸蛋白儀檢測DNA濃度,A260/A280比值在1.8~2.0區(qū)間內(nèi)。DNA質(zhì)量與濃度均符合后續(xù)實驗的要求。稀釋DNA使DNA范圍處于30~60 μg/mL。

    “哼哼嘰嘰”、“唱唱咧咧”這兩個詞中的“哼”和“唱”是可以單獨成詞的,而“嘰”和“咧”不可以。重疊后也是一樣,AA式“哼哼”和“唱唱”是可以獨立使用的,而BB式“嘰嘰”和“咧咧”一般不能單獨使用。但“嘰嘰”作為疊音詞時改變聲調(diào),音為“jìji”時變成動詞是可以單獨成詞的,當然,這種情況是比較少見的。

    圖1 綿羊基因組DNA質(zhì)量檢測結(jié)果

    2.2 PCR產(chǎn)物檢測結(jié)果基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,分別在343、358 bp處有清晰明亮的條帶;基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,在421 bp處有清晰條帶;基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,分別在167、516 bp處有清晰條帶;基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,分別在354、361 bp處有清晰條帶;基因PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測,分別在208、496 bp處有清晰條帶。以上所有條帶均與預(yù)期片段大小一致。

    圖2 PCR擴增產(chǎn)物

    2.3基因測序結(jié)果 由圖3可知,基因RS42 8438934位點處發(fā)生T→C的突變,此突變?yōu)殄e義突變,導(dǎo)致了氨基酸改變。

    圖3 ESR2基因測序結(jié)果

    2.4基因蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測基因RS4284 38934位點TT與CT、CC與CT基因型序列的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比對結(jié)果如圖4所示,TT基因型氨基酸序列與CT基因型相比較發(fā)現(xiàn):在區(qū)域和區(qū)域分別缺少一個氨基酸,且在兩性區(qū)上氨基酸存在部分缺失情況,位于蛋白質(zhì)表面的可能性和抗原決定簇比例也不同。CC基因型氨基酸序列與CT基因型氨基酸序列相比在兩性區(qū)上存在較大不同,且在區(qū)域也存在著差異。TT、CC與CT相比較來說,TT、CC都在氨基酸位置5~10區(qū)間內(nèi)缺少螺旋結(jié)構(gòu)。綜上,TT與CT、CC與CT基因型的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比較差異均較大。

    圖4 ESR2基因CT、TT與CC基因型的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比對

    2.5 遺傳多態(tài)性分析 2個綿羊群體、、、、基因多態(tài)位點基因型頻率、基因頻率結(jié)果見表2。由表2可知,實驗所研究的基因中的RS603752979位點在杜泊羊與湖羊中均呈現(xiàn)1種相同的基因型GG,無突變類型,處于平衡狀態(tài)。RS418841713在杜泊羊中存在2種基因型GG、AA,在湖羊中存在AA、GG、GA3種基因型,均處于不平衡狀態(tài)。RS398521635、RS402413016、G7、G8、RS417060437、RS604746425在杜泊羊與湖羊中均只有1種基因型,無突變類型,處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。RS428438934在杜泊羊中存在3種基因型CC、TT、CT,處于不平衡狀態(tài)。

    表2 綿羊群體BMPR-IB、BMP15、GDF9、ESR2、ADAMTS1基因位點基因型頻率、等位基因頻率、MAF

    2.6 綿羊群體遺傳變異分析結(jié)果 由表3可知,不同基因不同群體的遺傳Ho均較高,湖羊群體中、基因中的位點均為中度多態(tài)(0.25<PIC<0.5);在杜泊綿羊群體中,RS418841713、RS422930632、G1為低度多態(tài)(PIC<0.25),RS428438934、RS405617034為中度多態(tài)(0.25<PIC<0.5)。

    表3 綿羊群體不同位點遺傳變異分析

    2.7不同基因型與綿羊產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性分析 由表4可知,杜泊羊基因3種基因型群體的平均產(chǎn)羔數(shù)分別為1.408、1.015、1.336只,CC與CT、TT與CT基因型之間產(chǎn)羔數(shù)相比差異顯著。湖羊基因2種基因型群體的平均產(chǎn)羔數(shù)分別為2.041、2.035只,TT與CT基因型之間產(chǎn)羔數(shù)相比差異不顯著。

    表4 ESR2基因不同基因型與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性分析

    3 討 論

    目前研究發(fā)現(xiàn)在新吉細毛羊、小尾寒羊、蒙古羊以及甘肅現(xiàn)代肉羊群體中基因存在與多胎性狀相關(guān)的突變位點。前人研究發(fā)現(xiàn),RS599417043、RS109219782、RS402413016和RS398 521635位點在小尾寒羊、灘寒雜交羊、杜泊羊和灘羊群體中都分別只有一種相同的基因型且處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài),這與本實驗結(jié)果一致。本實驗在黑頭杜泊羊與湖羊群體中均未檢測到相應(yīng)位置上的位點具有多態(tài)性,說明這4個位點不是影響杜泊羊與湖羊產(chǎn)羔數(shù)差異的原因,由此推測并不是影響杜泊羊與湖羊群體多胎性狀的主效基因。

    基因和基因?qū)儆谕粋€家族,其在卵泡的生長分化過程中發(fā)揮極為重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),在Cambridge羊中存在G8突變,此突變與Cambridge羊和Belclare高排卵數(shù)(突變雜合體)和不育(純合體)都密切相關(guān)。劉永斌等蒙古羊群體中未檢測到G8位點具有多態(tài)性。金慧慧等通過測序法與RFLP-PCR在綿羊與山羊中檢測G7和FecGV突變情況,結(jié)果均不存在突變。此結(jié)果與本實驗結(jié)果一致,本實驗結(jié)果顯示G7在杜泊羊與湖羊中都只有1種基因型。

    是卵母細胞中的一種轉(zhuǎn)化生長因子,是與綿羊多胎性狀相關(guān)的主效基因。FecB就是基因突變導(dǎo)致第249位置上的谷氨酸突變成精氨酸的結(jié)果。本實驗在杜泊羊與湖羊中均未檢測到相應(yīng)位置上的多態(tài)性位點,這與張坤研究結(jié)果一致。RS418841713位點在杜泊羊中無突變情況,只有AA 1種基因型,但是在湖羊中具有GG、GA、AA 3種基因型,處于不平衡狀態(tài),猜測原因可能是樣本數(shù)量較少所致。

    雖然研究較其他基因時間較晚但受到越來越多的關(guān)注。何小龍等在單羔與雙羔蒙古羊的卵巢中發(fā)現(xiàn)存在表達差異推測基因可能是影響蒙古羊多胎性狀的基因。蔡倩方等發(fā)現(xiàn)排卵時在卵巢顆粒細胞層中的轉(zhuǎn)錄活性顯著增強,而孕激素受體基因敲除小鼠卵巢局部后表達顯著下降,有明顯的排卵障礙。本實驗研究結(jié)果顯示在杜泊羊與湖羊中只存在1種基因型,顯示位于外顯子2與外顯子8上的位點并不是影響杜泊羊與湖羊多胎的位點。且烏吉斯古楞研究也證實在蒙古羊中基因外顯子3的位點不是影響產(chǎn)羔性狀的主效基因。

    ESR在生殖生物學(xué)中起著重要作用。研究表明在魯中肉羊品種選育中基因g.73324006C>T位點具有可靠的標記作用。儲明星等利用PCR-SSCP技術(shù)研究表明基因可能是控制小尾寒羊多胎性狀的主效基因之一。張坤發(fā)現(xiàn)RS405617034、RS428438934位點具有多態(tài)性,RS405617034、RS428438934在小尾寒羊、灘寒羊和杜泊羊中突變極顯著高于灘羊。以上研究結(jié)果說明基因中位點與多胎性狀密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)在杜泊羊中在RS428438934位點處存在的TT、CT、CC 3種基因型相對應(yīng)的產(chǎn)羔數(shù)分別是1.336、1.015、1.408,CC基因型比CT基因型平均產(chǎn)羔數(shù)多0.393只,TT基因型比CT基因型平均產(chǎn)羔數(shù)多0.321只。CC與CT、TT與CT基因型之間產(chǎn)羔數(shù)相比差異顯著。另外RS428438934位點在杜泊羊與湖羊中相同位置都出現(xiàn)了TT、CT基因型,但發(fā)現(xiàn)只有在杜泊羊中出現(xiàn)CC基因型,猜測此位點或許是影響杜泊羊多胎的原因。在對突變序列的蛋白質(zhì)二級的預(yù)測中,發(fā)現(xiàn)RS428438934位點CC與CT之間、TT與CT之間,RS405617034位點AA與GG基因型之間的二級結(jié)構(gòu)均存在差異。這進一步說明這2個突變位點存在著一定的生物學(xué)意義。

    4 結(jié) 論

    本實驗利用測序法對60只黑頭杜泊羊進行位點多態(tài)性檢測,以46只湖羊做對照,研究發(fā)現(xiàn):

    1)RS428438934位點處CC與CT、TT與CT基因型之間產(chǎn)羔數(shù)相比差異顯著,可以作為杜泊羊多胎標記位點。

    2)RS405617034位點處AA與GG基因型之間產(chǎn)羔數(shù)相比無顯著差異,不能作為杜泊羊多胎標記位點。

    3)RS603752979、RS402413016、RS418841713、RS417060437、RS422930632、RS604746425、RS55628000、RS398521635、G1、G7、G8并不能作為杜泊羊多胎標記位點。

    猜你喜歡
    產(chǎn)羔湖羊綿羊
    非遺傳因素對云上黑山羊產(chǎn)羔性狀影響分析
    黃淮山羊產(chǎn)羔數(shù)與胎次的關(guān)聯(lián)性分析
    5G助力“智慧畜牧” 湖羊有了“健康碼”
    湖羊“地位”及“后時代”應(yīng)對策略
    湖羊的養(yǎng)殖探究——以金昌湖羊養(yǎng)殖為例
    云上黑山羊黃體數(shù)與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性初步研究
    數(shù)綿羊
    數(shù)綿羊
    奔跑的綿羊
    幼兒畫刊(2018年7期)2018-07-24 08:26:10
    絨山羊兩年三產(chǎn)的優(yōu)點及措施
    男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲四区av| 国产精品一二三区在线看| 精品亚洲成国产av| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品一区二区性色av| 插逼视频在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 桃花免费在线播放| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲国产最新在线播放| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久国产欧美日韩av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 免费人成在线观看视频色| 国产成人freesex在线| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲精品乱久久久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 内地一区二区视频在线| 久久国产精品大桥未久av | 免费少妇av软件| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品成人在线| 久久久久久久精品精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产成人一区二区在线| 精华霜和精华液先用哪个| 成人漫画全彩无遮挡| 最近2019中文字幕mv第一页| 免费看不卡的av| 国产成人精品一,二区| 国产一级毛片在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲精品自拍成人| 成人影院久久| 如何舔出高潮| 国产精品一区二区在线观看99| 午夜av观看不卡| 成人特级av手机在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚州av有码| videossex国产| 国产一级毛片在线| 日本黄色日本黄色录像| 久久精品久久久久久噜噜老黄| av国产精品久久久久影院| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品酒店卫生间| 欧美日韩精品成人综合77777| 天美传媒精品一区二区| 欧美成人午夜免费资源| 欧美区成人在线视频| 国产一区二区在线观看av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久精品国产a三级三级三级| www.av在线官网国产| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜老司机福利剧场| 十八禁高潮呻吟视频 | 国模一区二区三区四区视频| 成人美女网站在线观看视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 18禁动态无遮挡网站| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲综合精品二区| av网站免费在线观看视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲成人手机| 一个人免费看片子| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产一区二区在线观看日韩| 成人无遮挡网站| 中文在线观看免费www的网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 人妻人人澡人人爽人人| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久精品94久久精品| 亚洲成人一二三区av| 久久久久久久久久成人| 人人妻人人澡人人看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 色网站视频免费| 女人精品久久久久毛片| 老司机亚洲免费影院| h视频一区二区三区| 国产永久视频网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 成年av动漫网址| 久久女婷五月综合色啪小说| 七月丁香在线播放| 水蜜桃什么品种好| 亚洲在久久综合| 最黄视频免费看| 久久韩国三级中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产亚洲欧美精品永久| 最近的中文字幕免费完整| a级片在线免费高清观看视频| 欧美日韩在线观看h| 久久青草综合色| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 成人国产av品久久久| 乱人伦中国视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 在线观看免费日韩欧美大片 | 最近手机中文字幕大全| 18+在线观看网站| 国产精品无大码| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品一二三| 日韩欧美 国产精品| 成人特级av手机在线观看| 亚洲av综合色区一区| 九草在线视频观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 国产毛片在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲无线观看免费| 成人国产av品久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产精品.久久久| 国产一区二区在线观看av| 亚洲欧美清纯卡通| 在线播放无遮挡| 国产一区二区三区av在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 热re99久久国产66热| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 综合色丁香网| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品自拍成人| videossex国产| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 嫩草影院入口| 人人妻人人看人人澡| 亚洲精品视频女| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 丝袜喷水一区| 又爽又黄a免费视频| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品不卡视频一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩制服骚丝袜av| 综合色丁香网| 成人无遮挡网站| 亚洲av综合色区一区| 九草在线视频观看| 久久久精品94久久精品| 新久久久久国产一级毛片| 伊人亚洲综合成人网| 国产综合精华液| 乱人伦中国视频| 伊人亚洲综合成人网| 日本爱情动作片www.在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久99精品国语久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 中文资源天堂在线| 97超视频在线观看视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 久久午夜福利片| 免费人成在线观看视频色| 国产 一区精品| 性色avwww在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| av免费在线看不卡| 91精品国产九色| 国产av码专区亚洲av| 有码 亚洲区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产成人精品婷婷| 亚洲精品国产av蜜桃| videossex国产| 国产淫语在线视频| 一区二区av电影网| 久久精品久久久久久久性| 老司机影院毛片| 久久久精品94久久精品| tube8黄色片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产成人a∨麻豆精品| 成人综合一区亚洲| 亚洲av成人精品一二三区| 曰老女人黄片| 亚洲成人av在线免费| 夫妻午夜视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美精品一区二区大全| 好男人视频免费观看在线| 久久这里有精品视频免费| 日韩伦理黄色片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 各种免费的搞黄视频| 国产视频内射| 成人毛片60女人毛片免费| 久久6这里有精品| 秋霞伦理黄片| 黑人高潮一二区| 下体分泌物呈黄色| 精品国产露脸久久av麻豆| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲四区av| 伊人久久精品亚洲午夜| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一区二区av电影网| 国产精品久久久久久久久免| 这个男人来自地球电影免费观看 | 又爽又黄a免费视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品一区二区在线观看99| 91久久精品国产一区二区三区| 久久久久久人妻| 久久免费观看电影| 亚洲av免费高清在线观看| 国产欧美亚洲国产| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品久久久久成人av| 日本黄色日本黄色录像| 一级二级三级毛片免费看| 国产色爽女视频免费观看| 69精品国产乱码久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 尾随美女入室| 高清av免费在线| av线在线观看网站| 最黄视频免费看| 最近的中文字幕免费完整| 插逼视频在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲欧洲日产国产| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲综合色惰| 高清毛片免费看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 人妻人人澡人人爽人人| 波野结衣二区三区在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产探花极品一区二区| 成人影院久久| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲欧美日韩东京热| 国产亚洲5aaaaa淫片| 青青草视频在线视频观看| 一级爰片在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲成人一二三区av| 美女大奶头黄色视频| 好男人视频免费观看在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av不卡在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 人妻人人澡人人爽人人| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 午夜视频国产福利| 国产亚洲欧美精品永久| 黄色欧美视频在线观看| 大码成人一级视频| 一级爰片在线观看| 黑人高潮一二区| 乱人伦中国视频| 亚洲天堂av无毛| 午夜激情福利司机影院| 欧美精品一区二区大全| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久6这里有精品| 亚洲性久久影院| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av男天堂| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日本色播在线视频| 美女视频免费永久观看网站| 国产一区二区三区av在线| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本-黄色视频高清免费观看| av卡一久久| 欧美日本中文国产一区发布| 天堂8中文在线网| 免费看不卡的av| 一级a做视频免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美精品一区二区免费开放| 成人二区视频| 观看av在线不卡| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久久久久久久久久久大奶| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日韩亚洲欧美综合| 国产免费一级a男人的天堂| 美女cb高潮喷水在线观看| 老司机影院毛片| 美女福利国产在线| 看十八女毛片水多多多| 国产成人免费无遮挡视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 免费少妇av软件| 久久久久久伊人网av| 九九爱精品视频在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产熟女午夜一区二区三区 | 一个人看视频在线观看www免费| 久久久精品94久久精品| 97超碰精品成人国产| 激情五月婷婷亚洲| 熟女av电影| 国产亚洲最大av| h视频一区二区三区| 亚洲av福利一区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 我的女老师完整版在线观看| 国产高清三级在线| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 夜夜爽夜夜爽视频| 国国产精品蜜臀av免费| kizo精华| 天美传媒精品一区二区| av有码第一页| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产熟女欧美一区二区| 热99国产精品久久久久久7| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲国产色片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 99热这里只有是精品在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| av卡一久久| 女人精品久久久久毛片| 国产爽快片一区二区三区| 日韩中字成人| 久热久热在线精品观看| 一区在线观看完整版| 极品教师在线视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 新久久久久国产一级毛片| 女人精品久久久久毛片| 国产免费又黄又爽又色| 一级a做视频免费观看| 久热这里只有精品99| 日韩av免费高清视频| 中文字幕久久专区| 男女国产视频网站| 熟女av电影| 久久影院123| 亚洲无线观看免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 黑丝袜美女国产一区| 插阴视频在线观看视频| 国产成人精品无人区| a 毛片基地| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久精品久久久久久久性| 亚洲熟女精品中文字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www | 看非洲黑人一级黄片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 涩涩av久久男人的天堂| 九色成人免费人妻av| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲欧美日韩东京热| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲成色77777| 美女福利国产在线| 欧美三级亚洲精品| 国产精品一区www在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品伦人一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产高清三级在线| 久久久精品94久久精品| 高清视频免费观看一区二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 五月伊人婷婷丁香| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产色婷婷99| 中国国产av一级| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 高清午夜精品一区二区三区| 简卡轻食公司| 黄片无遮挡物在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 色吧在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 丰满乱子伦码专区| 国产精品人妻久久久久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久国产精品麻豆| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲一区二区三区欧美精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩大片免费观看网站| h视频一区二区三区| 在线观看国产h片| 内射极品少妇av片p| av在线播放精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 波野结衣二区三区在线| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产熟女欧美一区二区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美精品一区二区免费开放| 九九爱精品视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 免费高清在线观看视频在线观看| 婷婷色av中文字幕| 亚洲伊人久久精品综合| 日韩电影二区| 一级二级三级毛片免费看| 女人久久www免费人成看片| 春色校园在线视频观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 岛国毛片在线播放| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 91久久精品电影网| 在线观看www视频免费| 搡女人真爽免费视频火全软件| 观看免费一级毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 九草在线视频观看| 国内精品宾馆在线| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 欧美高清成人免费视频www| av在线播放精品| 全区人妻精品视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 日本欧美视频一区| 国产综合精华液| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲天堂av无毛| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲欧洲日产国产| 黄色一级大片看看| 大香蕉97超碰在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 97超视频在线观看视频| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区三区免费毛片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产亚洲91精品色在线| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 一本久久精品| 只有这里有精品99| 新久久久久国产一级毛片| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产欧美亚洲国产| 久久久久网色| 观看av在线不卡| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产成人精品福利久久| 日本欧美国产在线视频| 欧美日韩视频精品一区| 观看免费一级毛片| 偷拍熟女少妇极品色| 国产av精品麻豆| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩中字成人| 国产淫语在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日本黄大片高清| 天堂俺去俺来也www色官网| 99热网站在线观看| 国产精品国产av在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美精品一区二区大全| 三上悠亚av全集在线观看 | 一个人看视频在线观看www免费| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日日啪夜夜爽| 中国国产av一级| 国产av精品麻豆| 久久精品国产亚洲网站| 桃花免费在线播放| 人妻一区二区av| 亚洲国产最新在线播放| 免费高清在线观看视频在线观看| av在线app专区| 国产高清国产精品国产三级| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲精品成人av观看孕妇| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 黑人猛操日本美女一级片| h日本视频在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜免费男女啪啪视频观看| 能在线免费看毛片的网站| 国产亚洲5aaaaa淫片| 老女人水多毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品乱久久久久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日韩伦理黄色片| 两个人免费观看高清视频 | 成年美女黄网站色视频大全免费 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲人与动物交配视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 尾随美女入室| 一本一本综合久久| 婷婷色综合大香蕉| a级一级毛片免费在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| av在线观看视频网站免费| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久久久精品精品| 边亲边吃奶的免费视频| av线在线观看网站| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久久久久久人人人人人人| 性色av一级| xxx大片免费视频| 国产精品.久久久| 久久人人爽人人片av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 成年av动漫网址| 黑人猛操日本美女一级片| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲av综合色区一区| 亚洲内射少妇av| av福利片在线观看| 亚洲av综合色区一区| 精品久久国产蜜桃| 九九在线视频观看精品| 欧美 日韩 精品 国产| 多毛熟女@视频| 最近中文字幕2019免费版| 欧美3d第一页| 一级a做视频免费观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产精品久久久久久精品古装| 有码 亚洲区| 99精国产麻豆久久婷婷| 嘟嘟电影网在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲av综合色区一区| 夫妻午夜视频| 日本免费在线观看一区| 亚洲精品国产av蜜桃| 青春草亚洲视频在线观看| 我的老师免费观看完整版| 日日啪夜夜爽| 久久青草综合色| 最新的欧美精品一区二区| 欧美97在线视频| 日韩欧美精品免费久久| 精华霜和精华液先用哪个|