胃癌患者血清miR-135與miR-601水平變化及臨床意義*

趙艷云，趙淑穎，宮向良，于大中，劉 征

1.河北省唐山市第三醫(yī)院腫瘤科,河北唐山 063100；2.河北省唐山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北唐山 063000

胃癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和病死率，嚴(yán)重威脅人們的生命健康[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年全球新發(fā)胃癌患者超過10萬例，其中死亡例數(shù)約為7.8萬[2]。目前，胃癌的治療仍然以手術(shù)為主，但晚期胃癌的生存率普遍較低[3]，且胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移已成為胃癌患者死亡的主要原因[4]。病理活檢是診斷胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但也存在患者不耐受檢查的弊端[5]。血清標(biāo)志物對(duì)于腫瘤的早期篩選具有微創(chuàng)、高效等優(yōu)點(diǎn)，尋找可以用于胃癌患者早期診斷和預(yù)后評(píng)估的血清標(biāo)志物具有重要的臨床意義。糖類抗原72-4(CA72-4)和糖類抗原19-9(CA19-9)是臨床常用的腫瘤標(biāo)志物[5]，但用于胃癌診斷的靈敏度和特異度較低[6]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，微小核糖核酸(miRNA)的表達(dá)水平與胃癌的發(fā)病密切相關(guān)[7]，有望成為診斷胃癌和評(píng)估胃癌預(yù)后的新型標(biāo)志物。血清miR-135和miR-601作為miRNA家族中的重要成員，同時(shí)也是重要的癌基因，對(duì)于癌癥的發(fā)生、發(fā)展具有十分重要的作用[8-9]，但目前將血清miR-135和miR-601用于評(píng)估胃癌預(yù)后的臨床研究仍然較少。本研究通過研究血清miR-135和miR-601在胃癌中的表達(dá)特征，探討其對(duì)胃癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估的價(jià)值，以期為胃癌患者的臨床診療提供相關(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性選擇2019-2020年唐山市第三醫(yī)院收治的90例胃癌患者作為觀察組，另選擇同期84例體檢健康者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者均符合胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，且經(jīng)胃鏡及組織病理檢查確診；(2)年齡40～70歲；(3)未接受抗腫瘤治療；(4)預(yù)計(jì)生存時(shí)間>5個(gè)月；(5)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)消化道出血患者；(2)合并其他部位惡性腫瘤患者；(3)嚴(yán)重肝、腎、心、腦功能不全及結(jié)核、血液病患者；(4)近期參與過其他臨床試驗(yàn)或經(jīng)其他特殊治療的患者；(5)中途退出或隨訪資料不全的受試者。觀察組中男性58例(64.44%)，女性32例(35.56%)；平均年齡(59.18±6.35)歲；早期胃癌36例(40.00%)，進(jìn)展期胃癌54例(60.00%)；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例(51.11%)，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例(48.89%)。對(duì)照組中男性49例(58.33%)，女性35例(41.67%)；平均年齡(58.64±7.42)歲。2組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)唐山市第三醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均自愿參與本研究并簽署知情同意書。

1.2方法 觀察組患者于入院次日晨，對(duì)照組于體檢當(dāng)日空腹抽取靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心15 min，分離血清置于-80 ℃冷存?zhèn)溆?。?shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(q-PCR)在美國ABI 7500 q-PCR儀上進(jìn)行，PCR試劑盒由日本Takara公司提供，反應(yīng)體系為20.00 μL，混合離心置入q-PCR儀，測定2組血清miR-135和miR-601水平。95 ℃變性15 s，60 ℃復(fù)性60 s，45個(gè)循環(huán)。通過2-ΔΔCt法(ΔCt=Ct目的基因-CtU6)測定血清miR-135和miR-601水平，試驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。引物序列見表1。通過羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀采用化學(xué)發(fā)光法測定CA72-4及CA19-9水平。

表1 引物序列

1.3觀察指標(biāo) 比較觀察組和對(duì)照組、早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平差異，分析miR-135、miR-601水平與臨床病理特征的關(guān)系，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨(dú)和聯(lián)合檢測在胃癌患者早期診斷及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1觀察組和對(duì)照組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較 觀察組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組和對(duì)照組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較

2.2不同時(shí)期胃癌血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較 進(jìn)展期胃癌患者血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9表達(dá)水平明顯高于早期胃癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同時(shí)期胃癌血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較

2.3血清miR-135、miR-601水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 血清miR-135、miR-601水平與胃癌臨床分期及腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、性別、腫瘤最大徑、組織學(xué)類型以及腫瘤位置無關(guān)(P>0.05)，見表4。

表4 血清miR-135、miR-601水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.4血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨(dú)及聯(lián)合檢測對(duì)早期胃癌的診斷效能 ROC曲線結(jié)果顯示，miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨(dú)檢測診斷早期胃癌的曲線下面積(AUC)分別為0.952、0.943、0.557、0.677，當(dāng)該4項(xiàng)指標(biāo)的最佳臨界值分別為3.28、6.79、17.13 ng/mL、34.67 ng/mL時(shí)，其靈敏度分別為0.820、0.845、0.799、0.812，特異度分別為0.796、0.803、0.748、0.790；4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷早期胃癌的AUC為0.961，靈敏度為0.872，特異度為0.835。見圖1。

圖1 血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9診斷早期胃癌的ROC曲線

2.5血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨(dú)及聯(lián)合檢測對(duì)胃癌預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 ROC曲線結(jié)果顯示，miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨(dú)檢測評(píng)估胃癌預(yù)后的AUC分別為0.948、0.675、0.566、0.625，當(dāng)該4項(xiàng)指標(biāo)的最佳臨界值分別為3.37、6.82、18.48 ng/mL、35.41 ng/mL時(shí)，其靈敏度分別為0.834、0.825、0.785、0.811，特異度分別為0.810、0.832、0.767、0.807。4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測評(píng)估胃癌預(yù)后的AUC為0.953，靈敏度為0.890，特異度為0.843。見圖2。

圖2 血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9評(píng)估胃癌預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

胃癌是臨床最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤[11]，其發(fā)病率逐年升高，且預(yù)后較差[12]。因此，胃癌的有效篩查、及早診斷及預(yù)后評(píng)估工作十分重要[13]。其中，血清腫瘤標(biāo)志物的無創(chuàng)篩查方式備受臨床關(guān)注。CA72-4和CA19-9是糖鏈蛋白家族成員[14]，同時(shí)也是臨床常見診斷胃癌的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)于胃癌患者的早期篩查具有一定參考價(jià)值。CA72-4是高相對(duì)分子質(zhì)量的一種黏蛋白，通常在腫瘤組織中呈高表達(dá)趨勢[15]。而CA19-9作為一種糖類抗原，是腫瘤廣譜標(biāo)志物，近年來也常被用于胃癌的診斷及預(yù)后評(píng)估[16]。但由于單一腫瘤標(biāo)志物對(duì)于診斷胃癌和預(yù)后評(píng)估的靈敏度和特異度較低，限制了其臨床應(yīng)用推廣[17-18]，在此基礎(chǔ)上，探索新型血清標(biāo)志物以預(yù)測胃癌進(jìn)展并輔助靶向治療漸成熱點(diǎn)[3]。

miRNA屬于內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，具有組織特異性和時(shí)間性[19-20]，作為新的癌基因與胃癌的發(fā)病密切相關(guān)[21]。miRNA主要通過調(diào)控靶基因的表達(dá)參與細(xì)胞的增殖、生長和分化[22]，對(duì)于癌癥的診斷和治療均具有重要的參考價(jià)值。血清miR-135和miR-601是miRNA家族中的重要成員，對(duì)于癌癥判斷及預(yù)后評(píng)估具有重要的意義。研究表明，血清miR-135和miR-601在胃癌[6]、乳腺癌[23]、肺癌[24]、宮頸癌[25]等多種癌癥中均呈現(xiàn)出高表達(dá)，且與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度等密切相關(guān)[26]。有學(xué)者指出，血清miR-135和miR-601的異常表達(dá)，將有望成為癌癥診斷及預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)[27]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，提示血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9在胃癌患者中呈現(xiàn)高表達(dá)趨勢；而進(jìn)展期胃癌患者血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平較早期胃癌明顯升高(P<0.05)，提示血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9隨著胃癌的發(fā)展，其血清水平均逐漸升高。于偉等[28]研究指出，血清miR-135和miR-601水平與胃癌的發(fā)生呈正相關(guān)，該結(jié)論與本研究結(jié)果相一致。

本研究ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9聯(lián)合檢測診斷早期胃癌的AUC(0.961)、靈敏度(0.872)、特異度(0.835)均高于4項(xiàng)單獨(dú)檢測，提示4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測對(duì)早期胃癌具有較高的診斷價(jià)值。有研究報(bào)道，血清miR-135水平在胃癌患者中呈升高趨勢，且與CA19-9密切相關(guān)，對(duì)于早期胃癌具有較高的診斷價(jià)值[29]，該結(jié)論與本研究結(jié)果大致相同；本研究結(jié)果還顯示，4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測評(píng)估胃癌預(yù)后的AUC(0.953)、靈敏度(0.890)、特異度(0.843)均高于4項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測，提示4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測對(duì)于評(píng)估胃癌預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。有研究指出，血清miR-601水平在胃癌患者中升高，其水平升高能反映胃癌的病理進(jìn)展，對(duì)于胃癌患者的預(yù)后具有重要的預(yù)測價(jià)值[30]，該結(jié)論與本項(xiàng)研究結(jié)果具有相似之處。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，血清miR-135和miR-601水平與臨床分期及腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)，這與李利義等[31]、吳朝旭等[32]的結(jié)論相似。在本研究中，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的胃癌患者血清miR-135和miR-601水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)；腫瘤分化程度低水平的胃癌患者血清miR-135和miR-601水平越高，提示臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期，腫瘤分化程度為中、低水平的胃癌患者應(yīng)給予足夠的臨床重視，及早診治，以改善預(yù)后。

由于研究時(shí)間短、樣本量較小、單中心研究等條件的限制，導(dǎo)致了本研究結(jié)果可能存在一定程度的偏差。本課題組接下來將通過長期、大樣本、多中心的臨床數(shù)據(jù)來對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和完善。

綜上所述，血清miR-135和miR-601水平在胃癌患者中明顯升高，二者聯(lián)合CA72-4、CA19-9水平檢測對(duì)胃癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估具有較高價(jià)值，有望成為胃癌早期診斷和預(yù)后評(píng)估的新型血清標(biāo)志物。