柴胡應(yīng)用與指紋圖譜研究進(jìn)展

陳良勝 殷雙興

河南省新縣人民醫(yī)院藥劑科，河南 新縣 465550

柴胡歷史悠久，為傘形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC.)或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根。柴胡皂苷類為其主要活性成分，其中，以柴胡皂苷a、d的藥理作用最強。因此，本文主要對道地柴胡藥材有效成分指紋圖譜的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，并進(jìn)行鑒別、檢查、含量測定、重金屬檢查和農(nóng)藥殘留檢測，旨在為全面控制柴胡藥材的質(zhì)量提供重要依據(jù)。

1 柴胡臨床使用的現(xiàn)狀

柴胡屬藥用植物在我國分布廣泛，品種較多，在不同區(qū)域都被當(dāng)?shù)卦谂R床上當(dāng)作柴胡使用，藥用的有效性和安全性較差。本文對長江上游和大別山柴胡屬藥用植物進(jìn)行實地考查和大量歷史文獻(xiàn)匯總和分析。認(rèn)定原植物為同屬植物4種民間藥用柴胡，在本地都有使用，都曾經(jīng)有被當(dāng)作藥用的歷史。我國野生柴胡屬中藥資源藏量巨大。由于我國藥典并未收錄有關(guān)區(qū)域性柴胡的內(nèi)容，缺乏相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，造成長江上游和大別山區(qū)域性柴胡質(zhì)量難以得到有效控制。而民間又有大量的實際應(yīng)用，給當(dāng)?shù)乩习傩沼盟帋韲?yán)重的安全隱患。因此，采用科學(xué)的方法建立區(qū)域性柴胡的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分析長江上游和大別山區(qū)四種柴胡屬植物的化學(xué)成分，測定其有效成分的含量，為當(dāng)?shù)夭窈耐茝V應(yīng)用提供理論依據(jù)，發(fā)展庫區(qū)中藥材具有現(xiàn)實的經(jīng)濟(jì)意義，也是現(xiàn)實的客觀需要。

正品柴胡為常用中草藥，野生資源正在枯竭，在推廣人工種植的同時，適時研發(fā)新的柴胡屬植物替用品，擴大野生資源的來源，也是目前比較現(xiàn)實的選擇。隨著柴胡資源日漸緊張，市場價格不斷攀升，各地都在積極探索，開發(fā)當(dāng)?shù)夭窈鷮俚囊吧Y源，試圖緩解供量的緊張。長江上游和大別山區(qū)是柴胡產(chǎn)量較大，是全國的主產(chǎn)區(qū)之一，品種混用極其混亂嚴(yán)重。質(zhì)量無法控制，用藥隱患大。

2 柴胡的分類

柴胡(Bupleuri)是傘形科植物中的大屬之一，全世界有200種左右。我國有柴胡屬植物40種、17變種、7變型，主要分布于西南、西北和東北地區(qū)[1]。本屬入藥種類約20種，主要的有柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)、狹葉柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)、銀州柴胡(Bupleuri.yinchowenseShanet Y. Li)和黑柴胡(Bupleuri.smithiiH.Wolff)等?！吨腥A人民國和國藥典》2020版規(guī)定柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)和狹葉柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)的干燥根為藥用柴胡，按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”和“南柴胡”。

3 柴胡的化學(xué)成分與藥理作用

柴胡的化學(xué)成分復(fù)雜,主要含皂苷和揮發(fā)油,同時也含黃酮、脂肪酸、多元醇、植物甾醇、木脂素、香豆素、多糖、微量元素等類型成分[2-3]。柴胡性味辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的功效，用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛[4]。藥理實驗[5-6]表明，柴胡具有解熱鎮(zhèn)痛、保肝、抗病毒、抗抑郁、抗癌、抗?jié)兊榷喾N活性。

4 柴胡的指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域綜述

近年來，很多學(xué)者對柴胡藥用成分和臨床應(yīng)用研究較多，在本草考證、生境分布、原藥用植物鑒定以及質(zhì)量評價等方面作出了大量的貢獻(xiàn)。在柴胡分布較多的甘肅、河北、河南、湖北等地區(qū)，對野生和家種的柴胡的指紋圖譜研究較多，主要采用HPLC、GC-MS以及薄層色譜等方法來研究柴胡中柴胡皂苷和揮發(fā)油等有效成分?，F(xiàn)將近十年來各地在柴胡品質(zhì)，主要在指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域取得的重要進(jìn)展綜述如下。

將北柴胡柴胡皂苷建立高效薄層熒光色譜指紋圖譜(如圖1所示)，與南柴胡、錐葉柴胡、多枝柴胡、三島柴胡、西藏柴胡等不同產(chǎn)地柴胡的指紋圖譜進(jìn)行比較。以60目硅膠為原料制備高效薄層板，以CH2Cl2∶EtOAC∶CH3OH∶H2O(30∶40∶15∶3)為流動相，2%對二甲氨基苯甲醛:10%硫酸乙醇液顯色后獲得薄層熒光色譜指紋圖譜，經(jīng)軟件(ChromafingerTM)生成共有模式，發(fā)現(xiàn)北柴胡指紋圖譜由19個特征熒光條斑組成[7]。

圖1 柴胡屬藥材皂苷高效薄層色譜指紋圖譜的研究圖[7]

有關(guān)專家采用山西產(chǎn)地的柴胡和小葉黑柴胡中皂苷類成分HPLC指紋圖譜分析方法，采用RP-HPLC測定10個不同來源柴胡樣品。建立了HPLC指紋圖譜共有模式，并對其進(jìn)行了相似度比較，為控制柴胡藥材的質(zhì)量提供了理論依據(jù)[8-11]。

肖蓉等[12]分別建立了野生北柴胡、栽培北柴胡、狹葉柴胡、錐葉柴胡及線葉柴胡的HPLC指紋圖譜(如圖2所示)，采用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對北柴胡揮發(fā)油的有效成分進(jìn)行了測定和分析。 發(fā)現(xiàn)培育出來的北柴胡與野生北柴胡相比，其提取物、皂苷類成分和 HPLC 指紋圖譜均無顯著差異，但揮發(fā)油的含量和成分有一定差異。 因此培育柴胡具有一定的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價值。根據(jù)實驗結(jié)果，北柴胡提取物的含量為15.6%，柴胡皂苷 c、 a、 d 含量分別為0.50%、1.90%和1.73%。南柴胡浸出物含量為25.9%，皂苷c、d含量分別為0.15%、0.29%。市場上的柴胡飲片品種主要為北柴胡，浸出物含量為13.6%，皂苷c、a、d的含量分別為0.41%、1.17%、1.30%。

圖2 河北道地藥材北柴胡HPLC-UV指紋圖譜研究圖[12]

湯芳玲等[13]采用Waters BEHTM Cl8色譜柱，以CH3CN∶H2O進(jìn)行梯度洗脫，0.61 mL· min-1的流速，200 nm作為檢測波長，30℃柱溫。通過檢測20批小葉黑柴胡藥材，建立其UPLC指紋圖譜(如圖3所示)，共發(fā)現(xiàn)了28個共有指紋峰，根據(jù)聚類分析結(jié)果，可將藥材質(zhì)量分為2大類，8個相似度較高的藥材分為一類。

圖3 UPLC法測定小葉黑柴胡的根中柴胡皂苷a、d含量圖[13]

李艷榮等[14]建立同時測定承德產(chǎn)及其他主產(chǎn)區(qū)柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量及其HPLC指紋圖譜(如圖4所示)。方法：色譜柱為ZorbaxSB-C18，乙腈溶液系統(tǒng)梯度洗脫，檢測波長 210 nm，流速1.0 mL· min-1，分析時間90 min。得到柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的線性范圍分別為33.2～531 μg· mL-1(r=0.9999)、31.8～508 μg·mL-1(r=0.9999)；平均回收率分別為98.6%(RSD=0.9%)、98.9%(RSD=1.2%)。15批藥材的HPLC指紋圖譜共確立6個共有峰。

圖4 柴胡的HPLC指紋圖譜研究圖[14]

王建科等[15]建立了竹葉柴胡藥材的HPLC指紋圖譜。方法：色譜柱為Agilent Cl8， CH3CN：0.2% H3PO4水溶液為流動相，流速為1.0 mL·min-l，柱溫為30 ℃，檢測波長為203 nm。得到了竹葉柴胡藥材的指紋圖譜，確定了共有峰22個，各峰的相似度均>0.800。

王一飛等[16]建立了柴胡藥材的高效液相指紋圖譜方法(如圖5所示)。方法：采用Zorbax SB-C18柱，柱溫25 ℃，以流動相CH3CN：0.2% H3PO4水溶液洗脫，檢測波長220 nm，流速為1.0 mL·min-l。采用國家藥典委員會出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價》軟件，對9批不同批次的柴胡藥材指紋圖譜進(jìn)行相似度計算。得到各批柴胡藥材中有11個共有峰，各峰分離度良好，各批次柴胡藥材間共有峰的相對保留時間RSD<1.0%，藥材間相似度均>90%。

圖5 北柴胡藥材的HPLC 指紋圖譜研究圖[16]

孫國祥等[17]用RP-HPLC建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜(如圖6所示)。方法采用CenturySIL C18色譜柱，流動相為水和乙腈(均含l%醋酸)梯度洗脫；流速1.0 mL·min-1，265 nm檢測，柱溫(30～0.15)℃。確定了27個共有峰。通過對指紋峰多種參數(shù)評價，建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜。各產(chǎn)地藥材的化學(xué)成分分布比例和含量2個方面與對照指紋圖譜間都具有良好相似性。

圖6 柴胡高效液相色譜數(shù)字化指紋圖譜研究圖 [17]

王啟帥等[18]采用HPLC-ELSD析方法，對柴胡樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究。分析采用相似性分析、數(shù)據(jù)聚類分析和主成分分析分析。 結(jié)果建立了柴胡藥材的HPLC指紋圖譜分析方法，共有12個共有峰。

綜上所述，隨著指紋圖譜技術(shù)的飛速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于對中藥質(zhì)量的研究，逐步取代傳統(tǒng)的以單一化學(xué)成分的含量來控制藥材質(zhì)量的模糊做法，各地對正品柴胡和道地柴胡品種的質(zhì)量研究很多，多采用最新的指紋圖譜技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)各地柴胡品種的指紋圖譜有所不同，其指紋圖譜顯示有效成分含量皂苷和揮發(fā)油成分多有不同，結(jié)合長江上游和大別山區(qū)域柴胡的考察，借鑒和運用其他柴胡指紋研究經(jīng)驗，建立地域性柴胡指紋圖譜，指導(dǎo)柴胡資源開發(fā)意義重大。