周建忠,安樹偉,章宇思
(蘇州市吳江區(qū)水產(chǎn)技術(shù)推廣站,江蘇 蘇州215200)
蘇州市吳江區(qū)自20世紀(jì)90年代開始推廣大口黑鱸養(yǎng)殖,至2018年養(yǎng)殖面積達(dá)4萬(wàn)畝。2021年吳江區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)大口黑鱸發(fā)生以體表潰瘍?yōu)樘卣鞯募膊?,造成大量死亡。為明確病因,筆者進(jìn)行了病原分離、人工回歸感染、生理生化鑒定及16S rRNA序列分析鑒定,并開展藥物敏感性試驗(yàn)篩選敏感藥物,采用對(duì)癥施藥、調(diào)水、培藻等方法成功處理病情。
發(fā)病漁場(chǎng)位于吳江區(qū)八坼街道,養(yǎng)殖面積50畝,共4個(gè)塘口,每畝放養(yǎng)3 000尾大口黑鱸。
2021年7月中旬,各塘口陸續(xù)出現(xiàn)癥狀相同的發(fā)病大口黑鱸。主要癥狀為魚游動(dòng)緩慢、食欲降低、體表多處出現(xiàn)不同程度潰瘍,肝臟局部呈白色、質(zhì)地不均勻,心臟有脂肪顆粒(圖1)。
圖1 患病大口黑鱸臨床癥狀
取病魚肝、腎、脾等內(nèi)臟組織,無(wú)菌操作轉(zhuǎn)入組織研磨管,加入生理鹽水冰浴研磨成組織勻漿液,使用寧波愛基因科技有限公司提供的DNA提取試劑盒及大口黑鱸微流控芯片聯(lián)檢試劑盒(虹彩病毒/彈狀病毒)開展病毒檢測(cè),未檢出病毒。
從患病大口黑鱸肝臟、腎臟、脾臟分離獲得1株優(yōu)勢(shì)菌株WJ01,28℃下培養(yǎng)24小時(shí)后,在TSA培養(yǎng)基上形成表面光滑、中央凸起、邊緣完整、直徑1~2毫米的白色圓形菌落。經(jīng)革蘭氏染色發(fā)現(xiàn),分離菌株為革蘭氏陰性短桿菌。
將菌液濃度為1×107CFU/毫升腹腔注射試驗(yàn)組大口黑鱸進(jìn)行攻毒后,于第3天開始出現(xiàn)體表潰瘍癥狀,表明該分離菌株為病原菌。
分離菌株生理生化特性試驗(yàn)使用API 20NE生理生化鑒定條,結(jié)果見表1。藥敏試驗(yàn)根據(jù)K-B紙片擴(kuò)散法,藥敏紙片由杭州微生物試劑有限公司提供,藥敏結(jié)果見表2。
表1 分離菌株WJ01生理生化特性
表2 分離菌株WJ01藥敏試驗(yàn)結(jié)果
使用上海生工DNA提取試劑盒(EZ-10)提取病原菌DNA,以革蘭氏陰性菌通用引物(上游引物FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG,下游引物R-TACGGCTACCTTGTTACGAC)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物送蘇州金唯智生物科技有限公司測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在NCBI上BLAST比對(duì),結(jié)果顯示分離菌株與維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)的同源性最高。
根據(jù)人工回感試驗(yàn)、生理生化試驗(yàn)、16S rRNA分子鑒定結(jié)果,初步判定引發(fā)該漁場(chǎng)大口黑鱸潰瘍病病原是維氏氣單胞菌。
對(duì)漁場(chǎng)4口塘使用5%聚維酮碘按1∶500稀釋,全池潑灑,隔天1次,連用3次;養(yǎng)殖工具使用前用20毫克/升高錳酸鉀浸泡20分鐘。
投喂飼料由每天2次減少為每天1次,下午投喂;飼料中添加黃芪多糖及保肝膽中藥,以提高病魚體質(zhì),連用3天;使用敏感抗菌藥物10%恩諾沙星拌料投喂,連用5天;后期注重調(diào)水、培藻,恢復(fù)池塘生態(tài)環(huán)境。
經(jīng)連續(xù)15天治療,漁場(chǎng)從每天死亡200余尾降至10余尾,后期未見潰瘍病死亡個(gè)體。
人工回感試驗(yàn)出現(xiàn)了體表潰瘍癥狀,但未出現(xiàn)心臟脂肪粒,推測(cè)脂肪粒并非由維氏氣單胞菌引發(fā)潰瘍病的典型癥狀。
從體外抑菌試驗(yàn)看,恩諾沙星和氟苯尼考作為常用藥物,效果都比較好。造成本次發(fā)病比較嚴(yán)重的主要原因是,該漁場(chǎng)負(fù)責(zé)人將病原誤診為虹彩病毒,使用了三黃散、大蒜素和多西環(huán)素拌料投喂,并未取得良好效果,可見病原的確診及藥敏試驗(yàn)對(duì)池塘實(shí)踐用藥具有較強(qiáng)的指導(dǎo)意義。
該漁場(chǎng)大口黑鱸吃料量高于周邊漁場(chǎng),且規(guī)格明顯偏大,推測(cè)吃料過(guò)猛、生長(zhǎng)太快,導(dǎo)致肝臟代謝異常和心臟脂肪粒,進(jìn)而降低魚體機(jī)能,是引發(fā)此次大口黑鱸大量死亡的誘因。