復(fù)方四黃復(fù)合水凝膠的基質(zhì)和載藥量研究

袁一鳴　辛?xí)苑肌＄娤Ｎ摹≡S廣全　李四維　林曉燕

【摘要】? 目的? 探討醫(yī)院外用制劑復(fù)方四黃外洗液的劑型改造，探索復(fù)方中藥復(fù)合水凝膠合適的基質(zhì)和載藥量。方法? 通過(guò)卡波姆U21、海藻酸鈉、黃原膠、水溶性殼聚糖及它們復(fù)合的凝膠為基質(zhì)，以感官指標(biāo)、穩(wěn)定性及抑菌效果考察，篩選出與復(fù)方四黃液結(jié)合最佳的空白凝膠基質(zhì)，以其對(duì)金葡菌的抑菌試驗(yàn)確定最佳載藥量。結(jié)果? 卡波姆U21/海藻酸鈉復(fù)合凝膠為復(fù)方四黃外洗液合適凝膠基質(zhì)，最佳載藥量為1.5倍復(fù)方四黃外洗液。結(jié)論? 該基質(zhì)與復(fù)方四黃液穩(wěn)定結(jié)合，為復(fù)方四黃凝膠劑的成型工藝研究提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】? 復(fù)方四黃復(fù)合水凝膠;卡波姆U21;海藻酸鈉水復(fù)合凝膠

中圖分類(lèi)號(hào)? R286? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A? ? 文章編號(hào)? 1671-0223（2022）01-005-03

復(fù)方四黃外洗液為醫(yī)院的中藥洗劑，是以《肘后備急方》中黃連解毒湯[1]為基礎(chǔ)加減而成，即大黃、黃連、黃柏、黃芩、連翹及虎杖六味中藥按照一定工藝制備成的復(fù)方合劑。它具有清熱解毒，去腐生肌，消腫止痛的功效，對(duì)外科或感染等效果顯著[2]。該劑型為外洗劑，存在局限性，而水凝膠劑具有穩(wěn)定性良好、不良反應(yīng)少及不污染衣著等優(yōu)點(diǎn)[3-5]，且凝膠劑基質(zhì)用量小而載藥量大，藥物易于溶出，對(duì)皮膚刺激性小，患者的順應(yīng)度更高[6]。由于水凝膠劑有著諸多優(yōu)勢(shì)，且對(duì)工藝條件要求不高，又能產(chǎn)生較好的經(jīng)濟(jì)效益，較為適合中藥復(fù)方制劑的生產(chǎn)現(xiàn)狀[7]。

1? 材料與儀器

1.1? 材料

連翹、黃芩、虎杖、大黃、黃連、黃柏，均購(gòu)自大參林醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司;卡波姆U21（安徽蕪湖奧斯通生物技術(shù)有限公司）;海藻酸鈉（福晨化學(xué)試劑有限公司）;透明黃原膠（山東優(yōu)索化工科技有限公司）;水溶性殼聚糖（南京都萊生物技術(shù)有限公司）;10%氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（以達(dá)科技有限公司）;雙蒸水。

1.2? 儀器

Agilent Technologies 1260 infinity 高效液相色譜儀;JJ200 型電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠(chǎng) d=0.01g）;BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司 d=0.0001g）;KQ5200E醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;東方-A型直熱式電熱恒溫干燥箱（廣州東方電熱干燥設(shè)備廠(chǎng)）;HH-S4 數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠(chǎng)）。

1.3? 菌種

金黃色葡萄球菌ATCC29213，由中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。

2? 凝膠基質(zhì)的篩選

2.1? 凝膠的基質(zhì)考察

查閱相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，決定單方凝膠基質(zhì)選用卡波姆、海藻酸鈉、黃原膠及水溶性殼聚糖。復(fù)合凝膠基質(zhì)則由以上凝膠基質(zhì)材料兩兩組合成，根據(jù)各基質(zhì)的成型情況、質(zhì)感、流動(dòng)性及黏稠度等綜合感官指標(biāo)，進(jìn)行凝膠基質(zhì)的初步篩選。

2.1.1? 空白凝膠制備方法? 單方凝膠制備方法為分別稱(chēng)取各凝膠基質(zhì)材料一定量，置于杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢?、溶脹、排氣泡。其中卡波姆在溶脹后用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至中性。復(fù)方凝膠的制備則是在單方凝膠的基礎(chǔ)上再將另一種凝膠基質(zhì)材料添加到單凝膠中，均勻攪勻，排氣泡。

2.1.2? 空白凝膠基質(zhì)感官指標(biāo)? 將卡波姆配成0.3%、1.0%、1.5%的凝膠溶液;黃原膠配成0.5%、1.0%、1.5%的凝膠溶液;殼聚糖配成3.0%、5.0%、7.0%的凝膠溶液;海藻酸鈉配成3.0%、6.0%、9.0%凝膠溶液。再根據(jù)單方凝膠基質(zhì)的成型狀態(tài)及相關(guān)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步確定復(fù)合凝膠基質(zhì)的配比﹕卡波姆U21/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）、卡波姆U21/黃原膠（1.0%﹕1.0%）、卡波姆U21/殼聚糖（3.0%﹕3.0%）、海藻酸鈉/黃原膠（6.0%﹕1.0%）、海藻酸鈉/殼聚糖（6.0%﹕3.0%）、黃原膠/殼聚糖（1.0%﹕1.0%）。感官指標(biāo)結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1結(jié)果可知，7.0%水溶性殼聚糖、1.0%卡波姆U21、卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）及卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）4組空白凝膠基質(zhì)的綜合感官指標(biāo)相對(duì)理想，均可作為復(fù)方四黃外洗液的凝膠載體。各基質(zhì)材料中，水溶性殼聚糖的相容性則最差、用量較大、成本高。故只對(duì)后三者進(jìn)行下一步考察篩選。

2.2? 穩(wěn)定性考察

2.2.1? 載藥凝膠劑制備方法? 根據(jù)表1感官指標(biāo)結(jié)果，選用單方卡波姆1.0%、卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕ 6.0%）及卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）3組的空白凝膠基質(zhì)，與復(fù)方四黃提取液混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至7.0左右，靜置排氣泡，制備成凝膠基質(zhì)與藥液比例分別為1﹕1，1﹕1/2，1﹕1/3的載藥凝膠劑。

2.2.2? 穩(wěn)定性考察方法? 將上述方法制備的所有載藥凝膠劑同時(shí)放置冰箱冷藏（0～5℃）及每天40℃水浴加熱3小時(shí)條件下交替重復(fù)進(jìn)行，以載藥凝膠劑最終發(fā)霉變質(zhì)的時(shí)間作為指標(biāo)進(jìn)行考察。結(jié)果見(jiàn)表2。

同時(shí)對(duì)三組載藥凝膠劑進(jìn)行離心試驗(yàn)，對(duì)比三組凝膠基質(zhì)與藥液結(jié)合后的載藥凝膠劑的穩(wěn)定性。參照離心公式T1=T2（4π2R）n2/g，R為離心機(jī)的半徑（米），n為轉(zhuǎn)速時(shí)間（r/s），T1為保存時(shí)間（天），T2為轉(zhuǎn)速時(shí)間，保留時(shí)間為15天，依次進(jìn)行離心（4000r/min）30min，1h。凝膠劑穩(wěn)定，無(wú)分層、沉淀現(xiàn)象。

2.2.3? 穩(wěn)定性結(jié)果? 結(jié)果可知，三組載藥凝膠劑的離心試驗(yàn)結(jié)果均穩(wěn)定，沒(méi)有分層或沉淀現(xiàn)象出現(xiàn)，證明載藥凝膠劑成型后較為穩(wěn)定。由表2可知，與單方卡波姆U21空白凝膠相比，復(fù)合載藥凝膠劑的長(zhǎng)久穩(wěn)定性更強(qiáng)。復(fù)合載藥更均勻凝膠更細(xì)膩，綜合各項(xiàng)指標(biāo)，決定采用卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）、卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）復(fù)合凝膠劑進(jìn)行下一步考察。

2.3? 不同混合基質(zhì)抑菌實(shí)驗(yàn)考察

選用卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）及卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）兩組復(fù)合空白凝膠，與復(fù)方四黃提取液結(jié)合，制備成凝膠基質(zhì)與藥液比例為1﹕1的載藥凝膠劑，制備方法同“2.2.1載藥凝膠劑制備方法”。選用中山市中醫(yī)院標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌菌株ATCC29213進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以?xún)山M載藥凝膠劑各自的空白凝膠作為空白組。抑菌實(shí)驗(yàn)方法為紙片擴(kuò)散法，以二者抑菌效果的優(yōu)異作為判斷指標(biāo)，進(jìn)行下一步篩選。

2.3.1? 抑菌實(shí)驗(yàn)操作方法? 在無(wú)菌環(huán)境下，將少量新培養(yǎng)的金葡菌至稀釋液中，稀釋并校正濁度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濃度，菌液的濃度約為1.5×108CFU/ml。用棉試子蘸取菌液后涂布整個(gè)培養(yǎng)基表面，反復(fù)3次后，取出已浸泡24小時(shí)的復(fù)方四黃液藥敏紙片。烘干，貼于瓊脂平板表面，置35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24h后用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的直徑。

2.3.2? 抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，卡波姆/海藻酸鈉載藥凝膠劑組的抑菌效果（抑菌圈直徑9.5mm）強(qiáng)于卡波姆/黃原膠載藥凝膠劑組（抑菌圈直徑7.0mm），二者各自的空白凝膠組均無(wú)抑菌效果。最終決定選擇卡波姆/海藻酸鈉復(fù)合空白凝膠作為復(fù)方四黃外洗液的凝膠基質(zhì)，進(jìn)行下一步考察。

3? 載藥量考察

凝膠劑本身含有水分，會(huì)使主藥液稀釋。根據(jù)不同載藥量的復(fù)方四黃復(fù)合水凝膠的抑菌效果與復(fù)方四黃外洗液的抑菌效果相對(duì)比，以及凝膠劑的感觀(guān)與穩(wěn)定性，確定復(fù)方四黃復(fù)合水凝膠的最佳載藥量。

3.1? 抑菌實(shí)驗(yàn)

設(shè)立1.5倍、1.75倍及2倍載藥量凝膠劑組和復(fù)方四黃外洗液組進(jìn)行對(duì)比，載藥凝膠劑制備方法同“2.2.1”項(xiàng)，抑菌實(shí)驗(yàn)操作方法同“2.3.1”項(xiàng)。以金黃色葡萄球菌作為考察對(duì)象，進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)考察。

3.2? 載藥凝膠離心試驗(yàn)

對(duì)1.5倍、1.75倍及2倍載藥量凝膠劑組參照2.2.2項(xiàng)進(jìn)行離心試驗(yàn)，依次進(jìn)行離心（4000r/min）30min，1h。

3.3? 結(jié)果

三組載藥凝膠劑離心后穩(wěn)定，無(wú)分層、沉淀現(xiàn)象。而且抑菌效果相近，均稍弱于復(fù)方四黃外洗液組，在流動(dòng)性及黏稠度方面，1.5倍載藥量的凝膠劑最佳。綜合考慮1.5倍載藥量的復(fù)方四黃復(fù)合水凝膠為最佳載藥量。見(jiàn)表3。

4? 討論

本實(shí)驗(yàn)采用卡波姆U21作為凝膠載體，卡波姆U21黏度更強(qiáng)，而水溶性殼聚糖的相容性最差，其與海藻酸鈉無(wú)法完好相溶。觀(guān)察所得，基質(zhì)電荷和特性有關(guān)。海藻酸鈉含有負(fù)電荷天然多糖，黃原膠帶負(fù)電荷微生物多糖，他們與聚陽(yáng)離子的水溶性殼聚糖生成難溶化合物。但卡波姆為聚陰離子化合物，與水溶性殼聚糖能混合，但凝膠不是很細(xì)膩。

通過(guò)查閱親水性凝膠劑的相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)，初步確定了凝膠基質(zhì)的材料及大概的用量范圍，再通過(guò)凝膠感官指標(biāo)的綜合判斷、制備成本、與主藥結(jié)合后的穩(wěn)定性及抑菌考察等多方面的考慮，最終確定了復(fù)合凝膠卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕0.6%）作為主藥的基質(zhì)[8-10]。該復(fù)合凝膠與主藥結(jié)合后質(zhì)感上最為均勻細(xì)膩、富有光澤、穩(wěn)定性好，故選擇其作為復(fù)方四黃外洗液的凝膠基質(zhì)。

5? 參考文獻(xiàn)

[1] 梅全喜.黃連解毒湯源出《肘后備急方》考辨[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（11）：2730.

[2] 袁一鳴，林愛(ài)華，梅全喜.復(fù)方四黃外洗液指紋圖譜研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2017，28（10）：2417-2419.

[3] KuenYL，David JM.Hydrogels for tissue engineering[J].Chemical Reviews， 2001：1869.

[4] 王曙東，劉文雅.凝膠劑的研究進(jìn)展及應(yīng)用概況[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19（21）：1-4.

[5] 楊凡.野西瓜凝膠劑的研究[D].中山：廣東藥科大學(xué)，2019.

[6] 劉安廷，張合城，羅玉萍，等.雙黃凝膠劑的制備及應(yīng)用研究[J].中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2019，11（28）：144-146.

[7] 方和桂.適用于中藥外用的劑型——凝膠劑[J].中國(guó)藥業(yè)， 2002（8）：25-26.

[8] Constain H Salamanca，Alvaro Barrera-Ocampo，Juan C Lasso，et al.Franz diffusion cell approach for pre-formulation characterisation of ketoprofen semi-solidDosage forms[J].Inventi Impact-Pharmaceutical Process Development，2019：2019

[9] 廖龑?zhuān)Y德錫，王沼丹，等.漢方抗痘凝膠制備工藝研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（5）：32-34.

[10] 袁一鳴.復(fù)方四黃外洗液提取工藝優(yōu)化和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].中山：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[2021-11-25收稿]