家兔氣管支氣管管道鑄型標本制作三種腐蝕方法的比較

呂嘉琪，諸葛增玉，姚雨欣，沈枸松，甄珍

家兔氣管支氣管管道鑄型標本制作三種腐蝕方法的比較

呂嘉琪，諸葛增玉通信作者，姚雨欣，沈枸松，甄珍

（天津農(nóng)學院動物科學與動物醫(yī)學學院，天津 300392）

找出有效且簡便易行的家兔肺臟氣管支氣管樹鑄型標本模型制作方法，為動物醫(yī)學相關(guān)的教學、科研及臨床實踐提供真實嚴謹?shù)慕馄蕦W形態(tài)依據(jù)。使用自凝牙托粉與牙托水配制成填充劑，從喉口處灌注進入家兔肺部，凝固后分別使用氫氧化鈉、硫酸和鹽酸腐蝕組織得到肺部氣管支氣管樹鑄型，比較不同腐蝕方法的效果。三種腐蝕方法均得到良好的鑄型標本，使用氫氧化鈉溶液腐蝕標本只需放入相同溶液再次浸泡；硫酸溶液腐蝕的標本偏黑色，需要再次漂白；鹽酸溶液腐蝕的標本有殘留脂類需用堿性液體浸泡清除。使用自凝牙托粉與牙托水按1.0∶1.5的比例填充灌注肺臟后，用50%氫氧化鈉腐蝕組織，能夠最便捷地得到形態(tài)完整、彈性適中、潔凈光滑的呼吸道鑄型標本，氫氧化鈉溶液腐蝕標本無需配備其他溶液、物質(zhì)不易揮發(fā)，是三種腐蝕方法中最便捷、安全的方法。

家兔；氣管支氣管；標本；鑄型；腐蝕方法

隨著醫(yī)學教育的發(fā)展，動物標本鑄型制作已經(jīng)成為動物醫(yī)學院校及人類醫(yī)學學科實驗室的重點建設(shè)項目。鑄型標本具有三維立體感強、構(gòu)型美觀、色澤鮮艷的特點，使同學們能更直觀清晰地觀察臟器形態(tài)，可極大增強學生的學習興趣，提高學習效率[1]。肺臟是循環(huán)系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)中重要的器官，含有豐富的毛細血管及肺泡，不僅是氣體交換的重要場所，還是體液調(diào)節(jié)必不可少的器官。氣管支氣管鑄型標本的制作需要用到解剖學方法與技術(shù)，對于理解肺內(nèi)管道系統(tǒng)的解剖、指導實施動物實驗、教學和科研具有重要價值[2]。家兔是醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域的主要試驗動物之一，為了教學、臨床及科學研究需要，使用自凝牙托粉與牙托水對肺臟進行鑄型并采用不同腐蝕方法比較不同的效果，可選擇更簡便安全的家兔肺氣管與支氣管管道鑄型標本制作方法。

1 材料

體型相同的成年家兔12只（購自天津市奧易德實驗用品有限公司）、自凝牙托粉（聚甲基丙烯酸甲酯，購自上海新世紀齒科材料有限公司）、牙托水（甲基丙烯酸甲酯，購自天津市風船化學試劑科技有限公司）、骨剪、手術(shù)刀、量筒、玻璃棒、燒杯、細繩、濃鹽酸（濃度36.46%，購自天津市風船化學試劑科技有限公司）、濃硫酸（濃度98.08%，購自天津市風船化學試劑科技有限公司）、氫氧化鈉（購自天津市風船化學試劑科技有限公司，批號20180524）、一次性注射器（25 mL、60 mL）、電子秤。

2 方法和步驟

2.1 取材

將家兔進行保定處理，用25 mL注射器向家兔耳緣靜脈緩慢注射10 mL空氣，致其死亡后迅速從腹部剪開一個小口，向上延伸至胸部。將家兔仰臥擺放在托盤內(nèi)，切開家兔頸部皮膚及肌肉，暴露出氣管。從胸骨劍突位置分別向左、右、下三個方向剪開腹腔膜，暴露出橫膈膜。剪開橫膈膜，用骨剪剪開肋骨暴露出整個肺部，以便清除肺臟中的黏液及異物且方便灌注。在喉口部將氣管分離，輕輕擠壓肺部及氣管使其中的黏液、血液及異物擠出。

2.2 填充劑的配制

根據(jù)家兔肺臟的體積大小估測并稱量自凝牙托粉，倒入潔凈干燥的燒杯中，然后按1.0∶1.5比例倒入相應體積的牙托水，立即用玻璃棒輕輕攪拌混合均勻，避免產(chǎn)生氣泡。自凝牙托粉與自凝牙托水混合后形成的填充物凝固較快，在冬天使用時，應保持室溫26 ℃左右進行混合和填充，溫度低會加快填充劑的凝固。填充劑現(xiàn)配現(xiàn)用且配完后需馬上使用[3]。

2.3 灌注

根據(jù)家兔肺臟填充所需材料的量選取合適的針筒（25 mL或60 mL），將吸取了填充劑的針筒插入氣管口，保證氣管口與針筒間無縫隙。由于針口較大，氣管較脆弱且滑，不宜用繩子或止血鉗固定，只能用手指捏緊針口與氣管口縫隙。緩慢注射以使填充劑充分注入氣管與支氣管，直至肺部充盈、外層滑膜表面出現(xiàn)小白點時停止[4]。過快地推針筒容易使肺部壓力過大而發(fā)生破裂。灌注好后，用細繩將氣管口進行結(jié)扎防止填充劑流出。

肺內(nèi)的填充劑凝固需要一段時間，為防止肺臟表面因碰觸其他物體而變形，或變干而影響鑄型，將灌注好的肺臟放入有生理鹽水的廣口瓶 中[5]，肺臟會自然漂浮在水面上，肺葉自然分離，肺部形狀保持良好。在生理鹽水中放置3 d左右，待肺內(nèi)填充物變硬方可開始腐蝕過程。

2.4 三種方法腐蝕肺部組織

2.4.1 用強堿腐蝕

將氫氧化鈉顆粒和蒸餾水配制成50%濃度的濃氫氧化鈉溶液。將填充劑硬化后的肺臟取出，用流水沖洗干凈。然后放入配置好的50%濃氫氧化鈉溶液中進行腐蝕。在器皿上貼上標簽，密封好，放置7 d，每天進行觀察，若溶液較渾濁且標本上組織無明顯變化，可更換新配制的濃氫氧化鈉溶液[6-7]。每次更換時，用小刷子輕輕地刷去肺臟表面的腐物再放入新的強堿中。

2.4.2 用強酸腐蝕

（1）將98%濃度的濃硫酸用蒸餾水按比例稀釋成40%濃度[2]。配制好后冷卻待用，在此過程中，做好安全防護措施。將沖洗好的肺臟放入40%硫酸溶液中腐蝕，密封好器皿，貼上標簽后放置7 d，由于濃硫酸與組織發(fā)生脫水反應，溶液變黑不易觀察，期間不需要更換硫酸溶液。7 d后取出剩下的氣道內(nèi)填充物，若組織未腐蝕完全可將標本再次放入相同溶液中3 d，取出標本后把廢液倒入廢液桶。濃硫酸腐蝕完的標本呈黑色，用清水泡2 d，一天換一次水，直至不再掉色為止，此時標本仍然呈黑色。將標本置于84溶液中進行30 min漂白處理。

（2）直接將36.46%濃度濃鹽酸倒入帶蓋且密閉性較好的器皿中，放入沖洗好的肺臟，迅速密封好，防止鹽酸揮發(fā)出來，貼上標簽放置7 d，因溶液易揮發(fā)，期間無需更換溶液。7 d后取出標本，若未腐蝕完全可放入相同溶液中3 d。濃鹽酸腐蝕的標本上并未溶解脂類物質(zhì)，無法用清水洗凈且易黏于接觸到的器皿和手套上，于是將標本放入上述50%氫氧化鈉溶液中泡1 h[8]，將標本取出后已無脂類物質(zhì)，用流水輕輕沖洗干凈。

2.5 修整及封裝

腐蝕過的標本如果還有沒被腐蝕掉的組織，需將其重新放入上述相同溶液中繼續(xù)腐蝕，1～2 d后再進行清洗，每次清洗用小刷子輕輕刷表面的腐物直到全部組織腐蝕和清洗干凈為止。

在清洗完后要進行適當修整，剪去灌注端由于擠壓突出的塑膠結(jié)塊。標本脆且易斷，清洗中要多加小心，如發(fā)現(xiàn)斷枝要撿起，并找到來源，依解剖關(guān)系進行粘接，用少量自凝牙托粉和牙托水混合的填充劑做粘合劑即可。粘接時用同色牙托粉，在兩斷端處涂抹少量填充劑立即將兩者密接在一起，浸入水中數(shù)秒鐘后便可粘接在一起。最后獲得的標本自然晾干后，拍照記錄，放入密封袋中干燥保存，將密封袋放入泡沫箱中分別保存，避免擠壓使標本損壞。

3 結(jié)果

使用50%氫氧化鈉溶液腐蝕標本，只需使用相同濃度的溶液進行數(shù)次腐蝕即可。使用此方法腐蝕標本時，可通過更換新配制溶液和對標本進行刷洗來加快腐蝕組織的進度。腐蝕完的標本略顯黃黑色（圖1A）。用清水浸泡后可消除（圖1B）。

使用40%濃硫酸腐蝕的標本，需要通過計算將濃度配制成合適的40%。濃硫酸具有強腐蝕性，且配制過程產(chǎn)生大量熱量，溶液溫度較高，易對試驗人員造成傷害和使標本變形。由于濃硫酸能與接觸到的物質(zhì)發(fā)生脫水反應，腐蝕過程中溶液變黑色，不易于觀察。濃硫酸腐蝕完的標本呈黑色（圖1C），使用84消毒液進行漂白，浸泡30分鐘，漂白有效（圖1D）。

使用36.46%濃鹽酸腐蝕標本時，鹽酸具有易揮發(fā)性，易對試驗人員造成傷害，需使用密閉性良好的器皿以防止鹽酸揮發(fā)造成危險和減緩腐蝕進度。鹽酸溶液腐蝕后的標本上有較多不溶性脂類物質(zhì)。將標本放入濃氫氧化鈉溶液或其他堿性溶液中以除去標本上的脂類物質(zhì)，腐蝕完的標本略顯黑色（圖1E），用清水浸泡可消除（圖1F）。

用自凝牙托粉與牙托水混合的填充劑制作的家兔肺部氣管鑄型立體感強、構(gòu)型美觀、氣道鑄型飽滿、色澤光潔、韌性好、不容易斷裂、有較好的支撐力。其中使用氫氧化鈉腐蝕的標本，操作過程較方便，可清晰看見氣管支氣管管道的結(jié)構(gòu)與走向，包括肺的導管部：即支氣管樹、支氣管、小支氣管、細支氣管、終末細支氣管。呼吸部：呼吸性細支氣管、肺泡管、部分肺泡囊。清晰地展現(xiàn)了家兔氣管支氣管的形狀、分布和走向，在教學、科研和科普教育中將能發(fā)揮積極的作用。

4 討論

4.1 取材與灌注選擇及注意

新鮮材料的臟器組織柔軟，富有彈性，血管內(nèi)血液尚未凝固，容易清除多余物質(zhì)，灌注方便且效果更好，分支清晰、明顯，便于觀察及教學[1]。常規(guī)處理后取出的肺臟管道內(nèi)常存有血凝塊或分泌物，需要將肺臟和氣管內(nèi)的分泌物及血液清除干凈才能開始灌注[5]，若形成了血塊等物質(zhì)堵塞管道，應用鑷子小心夾出。

肺支氣管灌注時灌注人員應耐心，應緩慢注入填充材料，看到肺臟脹大時更應放慢注入速度，當感受到注射器活塞推不動時，應立即停止灌注，否則會使支氣管肺泡脹破[9]，此時應緩慢退出注射器，灌注完成后需將氣管用細繩進行結(jié)扎，需將灌注完的標本，放入有生理鹽水的廣口容器中，使肺葉保持自然狀態(tài)定型[10]。

4.2 標本的修整

修整通常需要摘除凝塊、疏密打枝、斷枝再植、加熱矯形、移花接木和整形修補等[4]。因鑄型標本質(zhì)脆，易斷裂，若斷裂，需用灌注時相同的灌注材料進行粘合?？蓪吮痉湃?0～80 ℃的水中浸泡1 min，取出可進行校正形狀[11]。

4.3 腐蝕方法比較

標本制作過程中，使用化學或物理方法將標本上的組織去除以展現(xiàn)出管道鑄型的過程稱為腐蝕。試驗中分別嘗試使用50%濃度的氫氧化鈉溶液、40%濃度的硫酸溶液、36.46%濃度的鹽酸溶液三種溶液進行標本腐蝕。三種方法均能成功地腐蝕掉標本上的組織，具體區(qū)別如下：

氫氧化鈉在堿腐蝕法中較為常用。使用50%氫氧化鈉溶液腐蝕標本，只需配備相同濃度的溶液，氫氧化鈉無揮發(fā)性，配制過程較簡單、安全。若使用50%濃度氫氧化鈉溶液腐蝕標本后腐蝕尚不完全，只需更換溶液再次腐蝕1～2 d即可。此方法腐蝕過程中易于觀察標本腐蝕進度，若發(fā)現(xiàn)標本腐蝕無變化可及時更換溶液并對標本進行細微洗刷，加快腐蝕組織的進度。腐蝕完的標本略顯黃黑色，用清水浸泡后可消除。此法腐蝕速度快于鹽酸腐蝕，且能完好保留細小管道鑄型，是目前較好的一種腐蝕方法，也是三種腐蝕方法中最簡便、安全的方法[12]。

使用40%濃硫酸腐蝕的標本，需要通過計算將濃度配制成合適的40%濃度。濃硫酸具有強腐蝕性，且配制過程產(chǎn)生大量熱量，溶液溫度較高，易對試驗人員造成傷害，配制過程試驗人員需做好相關(guān)的防護措施。濃度過高的硫酸直接接觸標本會放出大量的熱，使標本變形損壞。由于濃硫酸能與接觸到的物質(zhì)發(fā)生脫水反應，腐蝕過程中溶液變黑色，不易于觀察腐蝕進度。濃硫酸腐蝕完的標本呈黑色，用清水浸泡無法去除黑色，使用84消毒液進行漂白，浸泡30 min后取出流水沖洗直至標本表面不滑膩，漂白有效。此方法為三種腐蝕方法中最危險和麻煩的方法。

參考多方文獻發(fā)現(xiàn)用鹽酸做腐蝕液的濃度從25%～50%均有，為了方便，我們直接使用濃度為36.46%的鹽酸腐蝕標本，免去了配制濃度的繁 雜[9，11，13]。由于鹽酸具有易揮發(fā)性，易對試驗人員造成傷害，需使用密閉性良好的器皿以防止鹽酸揮發(fā)造成危險及溶質(zhì)減少而減緩腐蝕進度，因此不便于經(jīng)常更換溶液。鹽酸溶液腐蝕后的標本上附著有較多不溶性脂類物質(zhì)，黏于器皿和手套上，對后續(xù)修整、保存造成影響。將標本放入濃氫氧化鈉溶液或其他堿性溶液中可除去標本上的脂類物質(zhì)。腐蝕完的標本略顯黑色，用清水浸泡可消除。此方法為三種方法中較危險、麻煩的方法。

腐蝕時間通常為6～8 d，為更好地顯示出管道鑄型，必須要腐蝕完全。腐蝕過程中每次更換腐蝕液時可通過對標本進行刷洗以加快進程，應用垂直、較小的流水進行沖洗，同時用小刷子沿管道方向輕輕洗刷。不論使用什么性質(zhì)腐蝕劑，最后都需要對標本浸泡或沖洗以洗去殘留腐蝕劑。由于管道鑄型會有細小分支，容易被巨大流水沖斷，因此沖洗的原則是在徹底清潔情況下，“水流壓力寧小勿大”[14]。

5 結(jié)論

自凝牙托粉和牙托水以1.0∶1.5比例在室溫下混合均勻后制成填充劑，灌注入處理好的家兔肺臟，經(jīng)過在生理鹽水中固化3 d，后放入濃度為50%的氫氧化鈉溶液中反復腐蝕和用小刷子輕輕刷洗，最后可得到良好的鑄型標本。該方法是使用氫氧化鈉溶液、濃硫酸溶液、鹽酸溶液三種腐蝕方法中最便捷且安全的方法。

[1] 牛家峰，郭福運. 氣管支氣管及肺動靜脈鑄型標本的設(shè)計與制作[J]. 局解手術(shù)學雜志，2009，18（5）：327.

[2] 韓新巍，路慧彬，吳剛，等. 兔氣管支氣管鑄型標本制作方法[J]. 介入放射學雜志，2009，18（8）：612-614.

[3] 石瑾. 自凝牙托材料在管道鑄型中的應用及其前景[J].中國臨床解剖學雜志，2013，31（4）：5-6.

[4] 馬鮮平，孫裕光，王芝英，等. 山羊心肝肺聯(lián)合管道鑄型標本的制作[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013（18）：88-89.

[5] 張孝珍. 人體心血管腐蝕標本的制作方法[J]. 武漢體育學院學報，1985（3）：67-69.

[6] 馬玉祥，周曉輝，于翠萍，等. 人體解剖特殊標本制作技術(shù)及研究進展分析[J]. 中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2018，15（15）：195-196.

[7] 牛家峰，劉湛，李松奇. 肝內(nèi)管道鑄型標本的制作與體會[J]. 當代醫(yī)學，2012，18（34）：145-146.

[8] 張孝珍. 用ABS樹脂塑制人體腎管道鑄型標本[J]. 武漢體育學院學報，1991（2）：49-51.

[9] 程杰西. 不同填充劑灌注腎臟血管鑄型標本的設(shè)計與制作[J]. 解剖學研究，2019，41（4）：316-317.

[10] 劉穎慧，張曉歡，丁雨同，等. 遼寧絨山羊肺臟氣管樹鑄型標本的制作[J]. 吉林畜牧獸醫(yī)，2018，39（3）：39-41.

[11] 石瑾，王興海，李忠華. 鑄型標本的后期加工處理[J].解剖科學進展，1998（4）：90-93.

[12] 鄭二來，鄒錦慧，黃劍真. 淺談鑄型標本的處理與維護中的幾個問題[J]. 衛(wèi)生職業(yè)教育，2011，29（12）：106-107.

[13] 史欣良. 人體鑄型技術(shù)在動物上的應用[C]//中國解剖學會科技開發(fā)和咨詢工作委員會. 第三屆全國解剖學技術(shù)會議論文集. 廣州：南方醫(yī)科大學臨床解剖學研究所，2011：33，35.

[14] 杜曉霞，郭建強，祁根兄，等. 精美動物器官鑄型標本制作的實踐[J]. 中國畜牧獸醫(yī)文摘，2015，31（6）：50-51.

Comparison of three corrosion methods for cast specimens of tracheobronchial duct in rabbits

Lü Jiaqi, Zhuge ZengyuCorresponding Author, Yao Yuxin, Shen Jusong, Zhen Zhen

（College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300392, China）

To find out an effective and simple method to make the casting specimen of rabbit’s pulmonary trachea and bronchial tree, so as to provide a real and rigorous anatomical basis for veterinary related teaching, scientific research and clinical practice, three corrosion methods were used in this research. Self-solidifying denture powder and denture water were used to prepare fillers in proportion, and then perfusion from the throat into the lungs of rabbits. After the filler solidified, Sodium hydroxide solution, sulfuric acid solution and hydrochloric acid solution were used to corrode the lung tissues. The results showed that all of the three corrosion methods could get good cast specimen. The specimen corroded by sodium hydroxide solution only needed to be immersed in the same solution again; The specimens corroded by sulfuric acid solution were black and needed to be bleached again; The specimens corroded by hydrochloric acid solution needed to be immersed in alkaline solution to remove the residual lipids. After filling the lung with self-coagulating dental powder and dental bracket water at the ratio of 1.0∶1.5, 50% sodium hydroxide solution were used to corrode the lung tissue. The intact, moderately elastic, clean and smooth respiratory cast specimens could be obtained, and bronchial trees could be clearly seen. Sodium hydroxide solution did not need to be equipped with other solutions, and the substance was not volatile. It is the most convenient and safe method among the three corrosion methods.

rabbit; tracheal bronchus; specimen; casting mold; corrosion method

1008-5394（2021）04-0027-04

10.19640/j.cnki.jtau.2021.04.007

S85

A

2020-01-15

呂嘉琪（1997—），女，本科在讀，主要從事動物醫(yī)學專業(yè)。E-mail：775747398@qq.com。

諸葛增玉（1983—），女，講師，博士，主要從事動物解剖學教學研究工作。E-mail：zhugezy@163.com。

責任編輯：張愛婷