硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率、瘤胃發(fā)酵及瘤胃微生物區(qū)系的影響

謝 亮 龍江松 伍志武 方熱軍*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長沙 410128；2.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙 410128)

微量元素硒對(duì)肉牛具有重要的生理功能，在體內(nèi)發(fā)揮抗氧化、免疫、運(yùn)輸和調(diào)節(jié)激素合成等重要作用[1]。硒的合理利用可以起到增強(qiáng)肉?？共×?，提升機(jī)體健康水平和生產(chǎn)性能的作用。新型微量元素的使用可以起到減量增效的作用，降低微量元素使用量，緩解環(huán)境壓力[2]。微生態(tài)制劑具有提高動(dòng)物生長性能、維持腸道菌群平衡、改善肉品質(zhì)、增強(qiáng)抗病力等多種作用。微生態(tài)制劑作為綠色添加劑具有生態(tài)、高效、無公害和無殘留等特點(diǎn)，已經(jīng)成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，在反芻動(dòng)物與環(huán)境治理上應(yīng)用越來越廣泛。大量研究表明，硒和微生態(tài)制劑在生物學(xué)上具有相似的功能，均能提高畜禽的健康水平與生產(chǎn)力[3-6]。然而，硒與微生態(tài)制劑聯(lián)用對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率、瘤胃發(fā)酵及瘤胃微生物區(qū)系的影響卻鮮有報(bào)道。因此，本研究旨在探究2種形式硒源和微生態(tài)制劑對(duì)育肥肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率、瘤胃發(fā)酵及瘤胃微生物區(qū)系的影響，從而為硒和微生態(tài)制劑聯(lián)用產(chǎn)品的研究開發(fā)及其在我國肉牛生產(chǎn)中的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

無機(jī)硒：亞硒酸鈉，硒含量為1%。

有機(jī)硒：酵母硒，硒含量為0.2%。

微生態(tài)制劑：乳酸菌數(shù)量≥2×108CFU/kg，酵母菌數(shù)量≥3×107CFU/kg，為EM菌深度發(fā)酵產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用2×2雙因子隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取平均體重為(407.48±36.13) kg的健康新疆褐牛雜交牛24頭，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭牛。在精料補(bǔ)充料中，A組添加0.68 mg/kg無機(jī)硒(亞硒酸鈉)；B組混合添加0.68 mg/kg無機(jī)硒(亞硒酸鈉)和3%微生態(tài)制劑；C組添加0.68 mg/kg有機(jī)硒(酵母硒)；D組混合添加0.68 mg/kg有機(jī)硒(酵母硒)和3%微生態(tài)制劑。預(yù)試期14 d，正試期37 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)飼糧參照我國《肉牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 815—2004)配制，精粗比為37∶63，試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗(yàn)用粗飼料營養(yǎng)水平見表2。試驗(yàn)牛全部采用栓系飼喂，每日喂2次(09:00、16:00)，試驗(yàn)期間精料補(bǔ)充料與粗飼料每天按組稱量后按先粗后精的順序飼喂，試驗(yàn)牛自由采食和飲水，圈舍保持干凈衛(wèi)生，每周消毒1次。精料補(bǔ)充料的飼喂量為肉牛體重的1%，每月根據(jù)體重調(diào)整1次飼喂量。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet (DM basis)

表2 粗料的營養(yǎng)水平Table 2 Nutrient levels of forages

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 營養(yǎng)物質(zhì)消化率的測定

利用全收糞法于正試期第33天從每組中選取3頭健康、體重相近的試驗(yàn)牛進(jìn)行消化試驗(yàn)，采用集糞桶連續(xù)收集5 d的全部糞樣，每12 h收集1次，稱重后按總重量的10%取樣，每100 g加入20 mL 10%硫酸進(jìn)行固氮，將5 d的糞樣混合好后置于-20 ℃冰箱保存。利用楊勝[8]介紹的飼料分析方法分別對(duì)飼糧和糞樣中干物質(zhì)(DM)、中性洗滌纖維(NDF)、粗蛋白質(zhì)(CP)含量進(jìn)行測定。各營養(yǎng)物質(zhì)消化率計(jì)算公式如下：

DM消化率(%)=100×(DM攝入量-
DM排出量)/DM攝入量；
NDF消化率(%)=100×(NDF攝入量-
NDF排出量)/NDF攝入量；
CP消化率(%)=100×(CP攝入量-
CP排出量)/CP攝入量。

1.4.2 瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測定

于試驗(yàn)最后1 d每組選取健康、體重相近的3頭牛進(jìn)行瘤胃液的采集。每頭牛采集飼后3 h的瘤胃液，采樣前保證每頭牛有充足的飲水，提前固定試驗(yàn)牛的活動(dòng)。采樣時(shí)，首先將每頭牛的牛頭進(jìn)行固定，幾個(gè)人同時(shí)合作，拉拽牛頭向正前方，使牛的頭部位置便于插管，使頸部向上伸直，然后，將清洗干凈的不銹鋼彈簧軟管插入，經(jīng)咽喉、食管放入瘤胃。確認(rèn)位置后，用針筒抽拉抽取瘤胃液。從每頭牛的瘤胃中抽取約100 mL的瘤胃液，瘤胃液采完后緩慢抽出采樣管。采樣時(shí)，對(duì)所有牛應(yīng)盡量采用相同的插入手法和深度，在采集每頭牛的瘤胃液樣品后，用清水將采樣管內(nèi)、外部清洗干凈，再采取下一頭牛的瘤胃液。抽取出的瘤胃液應(yīng)去出除浮沫，用酸度計(jì)直接測定pH(PHS-10便攜式pH計(jì))，再用4層紗布過濾，濾去大塊的食物殘?jiān)?，裝于凍存管中放入液氮，后-80 ℃保存。

瘤胃液氨態(tài)氮(NH3-N)濃度參照馮宗慈[9]的比色法測定。用日本島津GC-2010Plus氣相色譜儀測定瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸濃度，色譜條件為：色譜柱選用DB-FFAP柱，規(guī)格為30 m×250 μm×0.25 μm；載氣為高純氮?dú)?99.999%)，流量0.8 mL/min；輔助氣為高純氫氣(99.999%)，火焰離子化檢測器(FID)溫度280 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃，分流比50∶1，進(jìn)樣量為1 μL；程序升溫，初始溫度60 ℃，以20 ℃/min速率升溫至220 ℃，保持1 min。

1.4.3 瘤胃內(nèi)微生物區(qū)系的測定

將瘤胃液樣品在干冰條件下送至上海美吉科技生物有限公司，采用Illumina MiSeq/NovaSeq平臺(tái)對(duì)24個(gè)肉牛瘤胃液樣本中細(xì)菌群落DNA片段進(jìn)行16S rRNA基因的V3～V4區(qū)雙端(paired-end)測序。從DNA提取到上機(jī)測序步驟：1)微生物組總DNA提??；2)目標(biāo)片段PCR擴(kuò)增；3)擴(kuò)增產(chǎn)物磁珠純化回收；4)擴(kuò)增產(chǎn)物熒光定量；5)測序文庫制備；6)上機(jī)進(jìn)行高通量測序；7)結(jié)果分析，包括對(duì)高通量測序的原始下機(jī)數(shù)據(jù)根據(jù)序列質(zhì)量進(jìn)行初步篩查，對(duì)問題樣本進(jìn)行重測、補(bǔ)測，然后切除序列的引物片段，棄去未匹配引物的序列，進(jìn)行質(zhì)控、去噪、拼接、去嵌合體等步驟。使用DADA2質(zhì)控后產(chǎn)生的每個(gè)去重的序列稱為特征序列，即操作分類單元(OTU)代表序列，而這些序列在樣本中的豐度表稱為特征表(對(duì)應(yīng)于OTU表)。進(jìn)行生物信息學(xué)分析主要包括OTU聚類分析、Alpha多樣性分析、微生物群落結(jié)構(gòu)分析、菌群門和屬相對(duì)豐度的分類學(xué)組成分析、Beta多樣性分析等。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016進(jìn)行初步整理后，用SPSS 26.0進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA),若差異顯著，則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較；進(jìn)一步采用一般線性模型單變量雙因素方差分析處理，分析硒源和微生態(tài)制劑2個(gè)主效應(yīng)以及硒源與微生態(tài)制劑交互作用的影響。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，0.05≤P<0.10為差異有顯著趨勢。

2 結(jié)果與分析

2.1 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

由表3可知，各組之間DM、CP、NDF消化率差異均不顯著(P>0.05)，但從數(shù)值上看：C組的DM消化率最高，其次是B組，A組最低；C組的CP排出量最低，相較于A組、B組、D組分別降低22.58%、3.45%、24.32%，同時(shí)C組的CP消化率最高，A組最低；C組的NDF消化率最高，其次是B組，D組最低。硒源和微生態(tài)制劑以及二者的交互作用對(duì)肉牛DM、CP、NDF消化率均無顯著影響(P>0.05)。

表3 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響Table 3 Effects of selenium source and microecological agent on nutrient digestibility of beef cattle

2.2 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表4可知，各項(xiàng)瘤胃發(fā)酵參數(shù)在各組間差異不顯著(P>0.05)。硒源除對(duì)瘤胃液乙酸/丙酸值的影響有顯著的趨勢(P=0.098)外，對(duì)其他瘤胃發(fā)酵參數(shù)均無顯著影響(P>0.05)，其中有機(jī)硒組的乙酸/丙酸值小于無機(jī)硒組。微生態(tài)制劑對(duì)瘤胃液氨態(tài)氮濃度的影響顯著(P<0.05)。綜上可知，飼糧中添加不同硒源對(duì)肉牛各項(xiàng)瘤胃發(fā)酵參數(shù)均無顯著影響，添加微生態(tài)制劑可以顯著提高瘤胃液氨態(tài)氮濃度，硒源和微生態(tài)制劑的交互作用對(duì)各項(xiàng)瘤胃發(fā)酵參數(shù)無顯著影響。

表4 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響Table 4 Effects of selenium source and microecological agent on rumen fermentation parameters of beef cattle

續(xù)表4項(xiàng)目 Items組別 GroupsABCDP值 P-value硒源Selenium source微生態(tài)制劑Microecological agent硒源×微生態(tài)制劑 Selenium source×microecological agent 丁酸 Butyrate/(mmol/L)12.29±2.2224.20±19.0712.32±3.8113.47±2.870.3760.2860.374戊酸 Valerate/(mmol/L)1.65±0.283.01±1.782.15±0.641.93±0.510.6590.3920.249異戊酸 Isovalerate/(mmol/L)2.88±0.383.70±1.442.72±0.412.97±0.550.3720.2890.571乙酸/丙酸 Acetate/propionate3.22±0.592.97±0.152.85±0.212.62±0.190.0980.2590.953總揮發(fā)性脂肪酸 TVAF/(mmol/L)81.85±11.75130.27±79.8381.02±20.0983.64±14.660.3590.3260.375pH7.21±0.217.30±0.037.18±0.207.14±0.180.3650.8070.510氨態(tài)氮 NH3-N/(mmol/L)2.41±1.533.01±1.291.86±1.074.63±0.080.4340.0330.135

2.3 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃微生物區(qū)系的影響

本試驗(yàn)檢測了12個(gè)肉牛瘤胃液樣本，共計(jì)得到590 636條有效序列和4 666個(gè)相似性大于97%的OTU，各組樣本具體情況見表5。稀疏曲線可以評(píng)估測序深度是否足以覆蓋樣本中所有物種，是生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的一種常用方法，通過從每個(gè)樣本中隨機(jī)抽取一定數(shù)量的序列(即在不超過現(xiàn)有樣本測序量的某個(gè)深度下進(jìn)行重抽樣)，可以預(yù)測樣本在一系列給定的測序深度下，所可能包含的物種總數(shù)及其中每個(gè)物種的相對(duì)豐度。稀疏曲線的平緩程度反映了測序深度對(duì)于觀測樣本多樣性的影響大小，曲線越平緩，表明測序結(jié)果已足夠反映當(dāng)前樣本所包含的多樣性，繼續(xù)增加測序深度已無法檢測到大量的尚未發(fā)現(xiàn)的新OTU；反之，則表明Alpha多樣性尚未接近飽和。圖1為瘤胃液12個(gè)樣本的稀疏曲線，稀疏曲線逐漸平緩，說明測序數(shù)據(jù)量足夠大，可以反映樣品中絕大多數(shù)的微生物物種信息。

橫坐標(biāo)代表隨機(jī)抽取的測序數(shù)據(jù)量；縱坐標(biāo)代表觀測到的物種數(shù)量。The abscissa represented the amount of sequencing data randomly extracted; the vertical axis represented the number of species observed.圖1 瘤胃液12個(gè)樣本的稀釋曲線Fig.1 Rarefaction curve of 12 rumen fluid samples

表5 樣本有效序列及OTU數(shù)目統(tǒng)計(jì)Table 5 Statistics of sample effective sequence and OTU number

試驗(yàn)肉牛瘤胃微生物Alpha多樣性指數(shù)分析見表6。代表群落多樣性的Shannon指數(shù)越大，其群落多樣性就越高，其中，B組數(shù)值最高，D組數(shù)值最低，但各組間差異均不顯著(P>0.05)。代表群落豐富度的Chao指數(shù)越大，其群落豐富度就越高，其中C組數(shù)值最高，D組數(shù)值最低，但各組間差異均不顯著(P>0.05)。

表6 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃微生物Alpha多樣性指數(shù)的影響Table 6 Effects of selenium source and microecological agent on rumen microbial Alpha diversity indexes of beef cattle

各組肉牛瘤胃微生物韋恩圖見圖2。由韋恩圖可知，在相似性大于97%的水平下，A組OTU數(shù)目為1 172個(gè)，B組為1 151個(gè)，C組為1 210個(gè)，D組為1 133個(gè)，C組OTU最豐富。各組共用的OTU數(shù)目為791個(gè)。A組特有OTU數(shù)目為59個(gè)，B組為48個(gè)，C組為82個(gè)，D組為48個(gè)，分別占其OTU數(shù)目的5.03%、4.17%、6.78%、4.24%，表明各組OTU組成相似度高，差異較小。

圖2 瘤胃微生物韋恩圖Fig.2 Venn diagram of rumen microbes

物種注釋共獲得20個(gè)門，其中有3個(gè)優(yōu)勢菌門，相對(duì)豐度由高到低依次為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)，各組肉牛瘤胃菌群在門水平上的組成見圖3。對(duì)排名靠前的幾個(gè)菌門的相對(duì)豐度進(jìn)行分析，結(jié)果見表7。A組和B組厚壁菌門的相對(duì)豐度顯著高于C組(P<0.05)，擬桿菌門的相對(duì)豐度顯著低于C組(P<0.05)。硒源對(duì)厚壁菌門的相對(duì)豐度有極顯著影響(P<0.01)，對(duì)擬桿菌門、放線菌門的相對(duì)豐度有顯著影響(P<0.05)。微生態(tài)制劑以及硒源與微生態(tài)制劑的交互作用對(duì)瘤胃各菌門的相對(duì)豐度均無顯著影響(P>0.05)。

表7 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃菌群門水平相對(duì)豐度的影響Table 7 Effects of selenium source and microecological agent on relative abundance of rumen bacterial community at phylum level of beef cattle %

續(xù)表7項(xiàng)目 Items組別 GroupsABCDP值 P-value硒源Selenium source微生態(tài)制劑Microecological agent硒源×微生態(tài)制劑 Selenium source×microecological agent 擬桿菌門Bacteroidetes19.29±8.79a22.54±1.94a47.53±9.13b44.72±25.09ab0.0150.9790.719放線菌門Actinobacteria1.48±0.401.91±0.710.78±0.201.00±0.720.0350.3360.765Patescibacteria0.68±0.370.67±0.260.54±0.140.41±0.370.2770.7030.745疣微菌門Verrucomicrobia0.58±0.240.46±0.210.37±0.070.30±0.170.1230.3860.821

圖3 瘤胃菌群門水平組成Fig.3 Composition of rumen bacterial community at phylum level

物種注釋共獲得282個(gè)屬，其中普雷沃菌屬(Prevotella)、NKA214菌群(NK4A214_group)、克里斯滕森菌科R7菌群(Christensenellaceae_R7_group)、解琥珀酸菌屬(Succiniclasticum)、毛螺菌科NK3A20菌群(Lachnospiraceae_NK3A20_group)屬于核心菌屬，各組肉牛瘤胃菌群在屬水平上的組成見圖4。對(duì)排名靠前的幾個(gè)菌屬的相對(duì)豐度進(jìn)行分析，結(jié)果見表8。A組和B組瘤胃NKA214菌群的相對(duì)豐度顯著高于C組和D組(P<0.05)。硒源對(duì)瘤胃NKA214菌群的相對(duì)豐度有極顯著影響(P<0.01)，對(duì)普雷沃菌屬的相對(duì)豐度有顯著影響(P<0.05)。微生態(tài)制劑以及硒源與微生態(tài)制劑的交互作用對(duì)瘤胃各菌屬的相對(duì)豐度均無顯著影響(P>0.05)。

表8 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃菌群屬水平相對(duì)豐度的影響 Table 8 Effects of selenium source and microecological agent on relative abundance of rumen bacterial community at genus level of beef cattle %

圖4 瘤胃菌群屬水平組成Fig.4 Composition of rumen bacterial community at genus level

3 討 論

3.1 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

有研究表明，在飼糧中補(bǔ)充有機(jī)硒(納米硒、酵母硒)可以提高綿羊的DM、有機(jī)物(OM)、CP、粗脂肪(EE)、NDF和酸性洗滌纖維(ADF)消化率，其中納米硒還可提高瘤胃發(fā)酵功能[10]。董升[11]研究表明，飼糧中添加0.6 mg/kg包被硒可極顯著提高玉米秸稈的OM、ADF、NDF降解率。但也有研究表明，飼糧中添加不同硒源(亞硒酸鈉、硒代蛋氨酸、酵母硒)對(duì)奶牛飼糧的DM、CP、NDF、ADF消化率無顯著影響[12]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率均無顯著影響，但與添加無機(jī)硒的A組相比，添加有機(jī)硒的C組的DM、CP、NDF消化率分別提高了6.09%、7.29%、3.64%。在本試驗(yàn)條件下，添加有機(jī)硒時(shí)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率優(yōu)于無機(jī)硒，這與前人研究結(jié)果基本相同，這可能是因?yàn)榻湍肝写罅康臓I養(yǎng)成分和某些協(xié)調(diào)因子，可增強(qiáng)瘤胃微生物的活性，間接性地促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)在瘤胃中的消化吸收，具體原因有待進(jìn)一步研究。

目前，大量研究表明益生菌可以分解大分子營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、糖類等，同時(shí)還可以促進(jìn)機(jī)體消化道的發(fā)育及內(nèi)源酶的分泌[13-14]。高堂亮等[15]研究表明，飼糧中添加活菌量為5×1010CFU/(頭·d)的微生態(tài)制劑，可顯著提高肉牛的DM消化率，改善其對(duì)CP、EE、NDF和ADF的消化能力。李光梅等[16]研究表明，在飼糧中添加500或1 000 mg/kg的微生態(tài)制劑可顯著提高綿羊DM、EE、CP的消化率。本試驗(yàn)條件下，微生態(tài)制劑及其與硒聯(lián)用對(duì)肉牛營養(yǎng)物質(zhì)消化率無顯著影響，與前人研究結(jié)果不一致，可能是因?yàn)槲⑸鷳B(tài)制劑中益生菌的種類、添加劑量，試驗(yàn)飼糧以及牛的品種與年齡不同造成的。

3.2 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵的影響

硒源對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃功能具有重要影響，微量元素可維持瘤胃微生物的正常功能[17]。硒對(duì)瘤胃功能的促進(jìn)作用可能是因?yàn)槲梢源龠M(jìn)瘤胃微生物與酶的活性[18]。Wei等[19]研究表明，蛋氨酸硒可提高泌乳中期奶牛中瘤胃液中總揮發(fā)性脂肪酸以及丙酸、丁酸濃度。本研究表明，肉牛飼糧中添加不同硒源對(duì)瘤胃發(fā)酵參數(shù)無顯著影響，但對(duì)乙酸/丙酸值的影響有顯著性趨勢，其中有機(jī)硒組的乙酸/丙酸值小于無機(jī)組。這說明添加有機(jī)硒肉牛的瘤胃發(fā)酵更趨向與丙酸型發(fā)酵，而丙酸是肉牛主要的生糖物質(zhì)，瘤胃中丙酸濃度越高說明肉?？梢垣@得的用于增重的能量越多。

Shen等[20]研究表明，酵母培養(yǎng)物可改善高精飼糧條件下肉牛瘤胃液pH的穩(wěn)定性。瘤胃乳頭高度、寬度及瘤胃壁厚度可以反映反芻動(dòng)物瘤胃的發(fā)育情況，寇慧娟等[21]研究表明，酵母培養(yǎng)物可促進(jìn)羔羊瘤胃發(fā)育。曹文新[22]在羔羊飼糧中添加滅活酵母培養(yǎng)物，結(jié)果表明滅活酵母可提高瘤胃液中丙酸、總揮發(fā)性脂肪酸的濃度，其中以添加量為15 g/(d·只)時(shí)效果最優(yōu)。黎凌鑠等[23]研究表明，微生態(tài)制劑可以促進(jìn)瘤胃發(fā)酵從乙酸型向丙酸型轉(zhuǎn)變，提高能量利用效率。但也有研究表明，微生態(tài)制劑對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃液pH與揮發(fā)性脂肪酸濃度無顯著影響[24-25]。本試驗(yàn)中，硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃液pH均無顯著影響，且各組瘤胃液pH均在正常生理范圍內(nèi)；此外，硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸濃度均無顯著影響，可能是硒與微生態(tài)制劑對(duì)瘤胃液中碳水化合物降解菌群的影響并不顯著所導(dǎo)致。氨態(tài)氮主要由飼糧中蛋白質(zhì)在瘤胃中被微生物降解生成，是合成菌體蛋白的重要前體物質(zhì)。本試驗(yàn)中，添加微生態(tài)制劑促進(jìn)了飼糧蛋白質(zhì)在瘤胃中的分解，進(jìn)而顯著提高了瘤胃液氨態(tài)氮濃度。

3.3 硒源和微生態(tài)制劑對(duì)肉牛瘤胃微生物區(qū)系的影響

Myer等[26]對(duì)10多種肉牛瘤胃微生物區(qū)系組成的研究結(jié)果表明，擬桿菌門與厚壁菌門是肉牛瘤胃中的優(yōu)勢菌門。本試驗(yàn)條件下，各組肉牛瘤胃中優(yōu)勢菌門為厚壁菌門與擬桿菌門，與前人結(jié)果一致。厚壁菌門主要參與纖維物質(zhì)的降解，與乙酸和乳脂的生成及脂肪的沉積密切相關(guān)；擬桿菌門主要參與非纖維物質(zhì)的降解，與瘤胃中丙酸的生成具有正相關(guān)關(guān)系[27]。本試驗(yàn)中，無機(jī)硒組厚壁菌門的相對(duì)豐度高于有機(jī)硒組，有機(jī)硒組擬桿菌門的相對(duì)豐度高于無機(jī)硒組，推測硒源可能會(huì)影響瘤胃中優(yōu)勢菌門的豐度，其中添加無機(jī)硒更易降解纖維素，提高乙酸濃度，添加有機(jī)硒更易降解非纖維類物質(zhì)，提高丙酸濃度。這印證了本試驗(yàn)中乙酸/丙酸值的結(jié)果，添加有機(jī)硒的肉牛瘤胃發(fā)酵更趨向于丙酸型發(fā)酵，有利于獲得更多能量用于增重。NKA214菌群是厚壁菌門中的一種革蘭氏陰性菌，可降解纖維物質(zhì)產(chǎn)生乙酸[28]。普雷沃菌屬能夠降解半纖維素為解琥珀酸菌屬生成丙酸提供底物[29]。本試驗(yàn)中，有機(jī)硒組瘤胃NKA214菌群的相對(duì)豐度極顯著低于無機(jī)硒組，有機(jī)硒組瘤胃普雷沃菌屬的相對(duì)豐度顯著高于無機(jī)硒組，表明有機(jī)硒可通過降低NKA214菌群的相對(duì)豐度，促進(jìn)普雷沃菌屬的增殖來提高乙酸、丙酸產(chǎn)量，改善瘤胃發(fā)酵模式。

4 結(jié) 論

在精料補(bǔ)充料中添加不同形式硒源與微生態(tài)制劑對(duì)肉牛的營養(yǎng)物質(zhì)消化率均無顯著影響，但添加微生態(tài)制劑可提高瘤胃液氨態(tài)氮濃度，促進(jìn)蛋白質(zhì)的利用，添加有機(jī)硒可影響瘤胃菌群組成，降低瘤胃液乙酸/丙酸值，改善瘤胃發(fā)酵。