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    西瓜籽油脂肪酸成分分析及抗氧化活性研究

    2022-01-10 08:50:12盤鵬慧羅偉強
    食品與機械 2021年12期
    關(guān)鍵詞:西瓜籽超氧陰離子

    盤鵬慧 羅偉強 莫 丹 龐 曉

    (廣西民族大學(xué),廣西 南寧 530006)

    西瓜籽中含有維生素、微量元素、蛋白質(zhì)、脂肪等多種營養(yǎng)成分[1-2],其中脂肪中不飽和脂肪酸含量較豐富[3-4]。研究[5]表明,西瓜籽油有輔助降血脂功能。

    目前有關(guān)各種植物油脂的提取、成分及其含量、抗氧化活性的研究時有報道[6-12],而有關(guān)西瓜籽油的研究多集中在提取工藝方面[13-14]。研究擬采用索氏法對西瓜籽進行提油,用GC-MS對西瓜籽油的脂肪酸組成、含量進行分析,并研究西瓜籽油的體外抗氧化能力,以期為西瓜籽油在天然抗氧化劑、醫(yī)療、保健等方面的開發(fā)利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    1.1.1 原料與試劑

    西瓜籽:市售;

    石油醚(沸程60~90 ℃)、硫酸、甲醇、硫酸亞鐵、無水乙醇、三氯化鐵、抗壞血酸(維生素C)、硫酸亞鐵、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼:分析純,國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

    1.1.2 主要儀器和設(shè)備

    電子天平:AB204-S型,上海帥寧儀器有限公司;

    電熱恒溫鼓風干燥箱:GZX-GF101-3BS型,上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;

    高速多功能粉碎機:CS700型,永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司;

    旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:RE-52AA型,上海亞榮生化儀器廠;

    循環(huán)水式多用真空泵:SHB-ⅢA型,鄭州長城科工貿(mào)有限公司;

    紫外可見分光光度計:752N型,北京合悅達科技有限公司;

    氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀:Clarus500型,美國鉑金埃爾默公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 西瓜籽油的提取 根據(jù)文獻[15],將西瓜籽置于潔凈的搪瓷盤上,70 ℃干燥6 h。取出,室溫冷卻后取適量西瓜籽于高速粉碎機中攪拌1 min,得西瓜籽細粉。準確稱取40.511 3 g西瓜籽細粉,用濾紙包好放在盛有適量石油醚的燒杯中浸泡6 h。將其取出置于500 mL的索氏提取器中,用石油醚為溶劑回流5 h左右,至溶劑用濾紙檢測無油跡后,停止回流。提取液經(jīng)濾紙過濾后,先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去大部分溶劑,再通過沸水浴除去殘余溶劑,即得淺黃色的西瓜籽油15.469 g,提取率為38.18%。

    1.2.2 西瓜籽油中脂肪酸的GC-MS分析

    (1)酯化處理:根據(jù)文獻[16],略有改動。稱取0.1 g西瓜籽油,加入體積分數(shù)5%的硫酸—甲醇溶液2 mL,60 ℃ 水浴超聲30 min后,再加入正己烷2 mL,充分振蕩后靜置。取上層清液加入無水硫酸鈉,取上層清液進行GC-MS分析。

    (2)氣相色譜條件:色譜柱為PE-5彈性石英毛細管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm),以高純氦氣為載氣,流速1.00 mL/min,程序升溫:起始溫度80 ℃,以14 ℃/min升溫至195 ℃,195 ℃保持9 min,然后以6.0 ℃/min升溫至280 ℃,280 ℃保持3 min。進樣口溫度260 ℃,進樣量1.0 μL,分流比40∶1。

    (3)質(zhì)譜條件:EI源,電離電壓70 eV,傳輸線溫度280 ℃,離子源溫度230 ℃,掃描范圍33~500 amu。

    1.2.3 還原Fe3+能力測定 根據(jù)文獻[17],將西瓜籽油配置成系列濃度梯度溶液,分別取1 mL各濃度的西瓜籽油溶液,依次加入2.5 mL磷酸鹽緩沖溶液(0.2 mol/L)、2.5 mL的鐵氰化鉀(10 mg/mL),50 ℃水浴鍋中恒溫加熱20 min。再加入2.5 mL三氯乙酸(0.1 g/mL),搖勻后,3 000 r/min離心10 min,取上清液2.5 mL,加入2.5 mL去離子水及0.5 mL的三氯化鐵(1 mg/mL)。室溫下反應(yīng)5 min,在700 nm處測定該樣品吸光度,用去離子水做空白對照,VC作為陽性對照。做3次平行試驗,取平均值。

    1.2.4 清除DPPH自由基能力測定 分別量取3 mL各濃度的西瓜籽油溶液與2 mL DPPH溶液(0.2 mmol/L)混合,搖勻后避光靜置30 min,于517 nm處測定其吸光度[18-19]。用去離子水做空白對照,VC作為陽性對照。做3次平行試驗,取平均值,按式(1)計算DPPH自由基清除率。

    E=[1-(A1-A2)/A3]×100%,

    (1)

    式中:

    E——DPPH自由基清除率,%;

    A1——樣品溶液和DPPH溶液的吸光值;

    A2——樣品溶液和無水乙醇的吸光值;

    A3——去離子水和DPPH溶液的吸光值。

    1.2.5 清除超氧陰離子自由基能力測定 根據(jù)文獻[20],修改如下:在具塞試管中分別加入1 mL各濃度的西瓜籽油溶液、4.5 mL Tris-HCl緩沖液(0.05 mol/L)、0.1 mL鄰苯三酚溶液(3 mmol/L),混勻,于25 ℃下反應(yīng)5 min,然后加入1 mL HCl溶液(8 mmol/L)以終止反應(yīng),于299 nm處測定其吸光度。用去離子水為空白對照,VC作為陽性對照。做3次平行試驗,取平均值,按式(2)計算超氧陰離子自由基清除率。

    D=[1-(A1-A2)/A3]×100%,

    (2)

    式中:

    D——超氧陰離子自由基清除率,%;

    A1——樣品溶液、Tris-HCl緩沖液、鄰苯三酚溶液、HCl溶液的吸光值;

    A2——樣品溶液、Tris-HCl緩沖液、無水乙醇、HCl溶液的吸光值;

    A3——去離子水、Tris-HCl緩沖液、鄰苯三酚溶液、HCl溶液的吸光值。

    1.2.6 清除羥基自由基能力測定 根據(jù)文獻[21],修改如下:在試管中分別加入1 mL各濃度的西瓜籽油溶液,然后依次加入6 mmol/L FeSO4溶液、6 mmol/L的水楊酸—乙醇溶液和8 mmol/L H2O2溶液各1 mL,混勻,在37 ℃恒溫水浴加熱30 min,于510 nm處測定樣品吸光度。用去離子水為空白對照,VC作為陽性對照。做3次平行試驗,取平均值,按式(3)計算羥基自由基清除率。

    F=[1-(A1-A2)/A3] ×100%,

    (3)

    式中:

    F——羥基自由基清除率,%;

    A1——樣品溶液、硫酸亞鐵溶液、水楊酸乙醇溶液、H2O2溶液的吸光值;

    A2——樣品溶液、硫酸亞鐵溶液、無水乙醇的吸光值;

    A3——去離子水、硫酸亞鐵溶液、水楊酸乙醇溶液、H2O2溶液的吸光值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 西瓜籽油GC-MS分析

    對西瓜籽油中脂肪酸的成分用GC-MS法進行分析,總離子流圖見圖1。通過計算機質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫和人工譜圖解析相結(jié)合的手段進行檢索,分析判定各成分,共鑒定出8種化合物,其中6種為脂肪酸。運用面積歸一化法對化合物進行相對定量,結(jié)果見表1。

    圖1 西瓜籽油甲脂化后總離子流色譜圖Figure 1 Total ion flow chromatogram of watermelon seed oil after methylated

    表1 西瓜籽油脂肪酸組成的分析結(jié)果Table 1 The identification results of fatty acids in watermelon seed oil

    由表1可看出,西瓜籽油中的脂肪酸含量較高,其中亞油酸甲脂、反油酸甲酯、油酸甲酯均為不飽和脂肪酸,不飽和脂肪酸達53.21%。不飽和脂肪酸中,尤以(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸(俗稱亞油酸)含量較高,達34.70%。亞油酸是人體必需的脂肪酸之一,其可降低血液中膽固醇含量,如人體缺乏亞油酸,膽固醇就會與一些飽和脂肪酸結(jié)合,導(dǎo)致代謝障礙,從而引發(fā)心腦血管方面的疾病。因此,西瓜籽油可作為功能性油脂進行開發(fā)。

    2.2 西瓜籽油的抗氧化能力

    2.2.1 Fe3+還原力 樣品在700 nm處的吸光值越大,其還原Fe3+能力則越強[22-23]。由圖2可知,西瓜籽油和VC都有還原能力,濃度增加二者還原能力亦隨之增強,西瓜籽油的還原能力低于VC的還原能力。

    圖2 西瓜籽油對Fe3+的還原能力Figure 2 Effect of watermelon seed oil on reducing Fe3+

    2.2.2 DPPH自由基清除能力 由圖3可知,VC對DPPH自由基的清除能力很好,對DPPH自由基的清除率在2~10 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均在97%左右,且濃度變化對清除率的影響不大。而在2~10 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),西瓜籽油清除DPPH自由基的能力呈劑量依賴性增強,當西瓜籽油質(zhì)量濃度<6 mg/mL時,西瓜籽油對DPPH自由基的清除能力隨質(zhì)量濃度的增加明顯增大,當質(zhì)量濃度超過6 mg/mL時,西瓜籽油對DPPH自由基的清除能力隨質(zhì)量濃度增大而增加的增幅減慢。當質(zhì)量濃度為2 mg/mL時,西瓜籽油對DPPH自由基的清除率為27.48%,當質(zhì)量濃度增加到10 mg/mL時,西瓜籽油對DPPH自由基的清除率達到90.73%,接近同質(zhì)量濃度VC的清除能力。根據(jù)回歸方程,得出西瓜籽油清除DPPH自由基的IC50值為3.7 mg/mL。

    2.2.3 超氧陰離子自由基清除能力 由圖4可知,西瓜籽油和VC對超氧陰離子自由基的清除能力均隨質(zhì)量濃度的增加而有所增大,在0.02~0.10 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),VC對超氧陰離子自由基的清除率從18.80%增大到40.17%,西瓜籽油對超氧陰離子自由基的清除率僅從48.72%增大到58.12%,西瓜籽油對超氧陰離子自由基的清除能力隨質(zhì)量濃度增大而增強的幅度相對較小。當質(zhì)量濃度為0.02 mg/mL時,VC對超氧陰離子自由基的清除率為18.80%,而西瓜籽油對超氧陰離子自由基的清除率達到了48.72%,可見西瓜籽油對超氧陰離子自由基的清除能力比VC的大得多。根據(jù)回歸方程,得出西瓜籽油清除超氧陰離子自由基的IC50值為0.031 mg/mL。

    圖3 西瓜籽油對DPPH自由基的清除能力Figure 3 The DPPH scavenging activity of watermelon seed oil

    圖4 西瓜籽油對超氧陰離子自由基的清除能力Figure 4 The superoxide anion free radicals activity of watermelon seed oil

    2.2.4 羥基自由基清除能力 由圖5可知,西瓜籽油和VC對羥基自由基的清除能力均隨質(zhì)量濃度的增加而增大,但西瓜籽油對羥基自由基的清除率增加較緩慢。質(zhì)量濃度從0.2 mg/mL增加到1.0 mg/mL時,VC對羥基自由基的清除率從72.93%增加到98.92%,而西瓜籽油對羥基自由基的清除率僅從4.68%增加到11.87%。由此可見,西瓜籽油對羥基自由基的清除能力不僅隨質(zhì)量濃度增大而增加的幅度較小,且對羥基自由基的清除能力較弱。根據(jù)回歸方程,得出西瓜籽油清除羥基自由基的IC50值為12.04 mg/mL。

    圖5 西瓜籽油對羥基自由基的清除能力Figure 5 The hydroxyl free radicals activity of watermelon seed oil

    3 結(jié)論

    試驗采用索氏回流法對西瓜籽進行提油,經(jīng)GC-MS檢測分析其含有6種脂肪酸,其中不飽和脂肪酸相對含量達到50%以上,亞油酸含量達到34.70%,具有較高的營養(yǎng)價值。通過抗氧化試驗研究表明,西瓜籽油對DPPH自由基的IC50值為3.7 mg/mL,對超氧陰離子自由基的IC50值為0.031 mg/mL,對羥基自由基的IC50值為12.04 mg/mL,對3種自由基清除能力的排序為超氧陰離子自由基>DPPH自由基>羥基自由基。西瓜籽油有良好的抗氧化能力,在醫(yī)療、保健等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。后期將針對各不飽和脂肪酸對其抗氧化性的貢獻作用進行深入分析。

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