胃癌組織中SIRT-1、VEGF的表達(dá)及臨床意義

趙靜雅1，李明輝，田云霄1，馮運(yùn)章

(1.邯鄲市中心醫(yī)院病理科，河北 邯鄲 056000；2.邯鄲市中心醫(yī)院普外二科，河北 邯鄲 056000)

胃癌是一種臨床上最常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，因其早期體征不明顯，胃鏡常規(guī)檢查普及不足，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期階段。近年來(lái)隨著人們生活飲食方式的改變，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。盡管治療手段不斷改善，但其預(yù)后水平往往較差，因此如何有效評(píng)估胃癌患者的病情具有重要的臨床意義[1-2]。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silence information regulator，SIRT-1)是一種蛋白脫乙?；?，與腫瘤細(xì)胞的代謝、衰老、增殖、凋亡等有關(guān)[3]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種具有促進(jìn)血管新生作用的細(xì)胞因子，與腫瘤的血管生成有關(guān)[4]。目前，關(guān)于二者在胃癌中的作用報(bào)道較少。 本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌組織及其癌旁正常組織中SIRT-1、VEGF的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，以期為胃癌病情的臨床評(píng)估提供參考，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

納入2016年6月至2018年6月在本院接受手術(shù)治療的胃癌患者120例。其中男70例，女50例；年齡30～82歲，平均(62.71±6.52)歲；腫瘤直徑2～8 cm，平均(4.16±0.64)cm；胃竇32例，胃體68例，賁門20例；低分化46例，中分化32例，高分化42例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例；浸潤(rùn)深度T1～T2者68例，T3～T4者52例；漿膜受侵64例；TNM分期分為Ⅰ期52例，Ⅱ期38例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡在18歲以上；②女性非妊娠期、哺乳期；③無(wú)精神病病史；④接受手術(shù)切除治療并經(jīng)病理學(xué)檢查為胃癌[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有血液、免疫、神經(jīng)等系統(tǒng)疾病；②檢查前有免疫、化療、放療、抗氧化等治療史；③有心、肝、腎等嚴(yán)重性疾??；④有其他原發(fā)性癌癥。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法

主要試劑：鼠抗人SIRT-1、VEGF抗體購(gòu)自上海領(lǐng)潮生物科技有限公司，免疫組織化學(xué)法試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋有限公司。免疫組化法檢測(cè)：所有患者均于術(shù)后取胃癌組織及其癌旁正常組織，常規(guī)10%甲醛固定、石蠟包埋、5 μm 厚度連續(xù)切片。玻片水化、抗原修復(fù)、過(guò)氧化氫去雜質(zhì)后，加入1∶200的SIRT-1或VEGF一抗，4 ℃過(guò)夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗片后，加SIRT-1或VEGF二抗封閉40 min、DAB顯色、蘇木素復(fù)染3 min、脫水、封固。以PBS代替一抗為陰性對(duì)照，以已知SIRT-1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織切片為陽(yáng)性對(duì)照。

SIRT-1、VEGF表達(dá)評(píng)估：由2名病理科醫(yī)師對(duì)切片染色結(jié)果行獨(dú)立閱片，每張切片均在高倍顯微鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞，其中SIRT-1陽(yáng)性信號(hào)(黃色或棕黃色顆粒)主要表達(dá)于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)、VEGF陽(yáng)性信號(hào)主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，按陽(yáng)性細(xì)胞百分率(小于5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、大于75%為4分)、染色強(qiáng)度(無(wú)色為0分、淡黃色為1分、黃色為2分、棕黃色為3分)評(píng)估，兩項(xiàng)相加在4分及以上為陽(yáng)性、3分及以下為陰性[3-4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織及其癌旁正常組織SIRT-1、VEGF的表達(dá)

胃癌組織SIRT-1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1、圖1。

表1 胃癌組織及其癌旁正常組織SIRT-1、VEGF表達(dá)比較[n=120，例(%)]

項(xiàng)目SIRT-1陽(yáng)性陰性VEGF陽(yáng)性陰性癌旁正常組織24(20.00)96(80.00)26(21.67)94(88.33)胃癌組織84(70.00)36(30.00)96(80.00)24(20.00)χ260.60678.551P<0.001<0.001

a:癌旁組織SIRT-1陰性；b:癌組織SIRT-1陽(yáng)性；c:癌旁組織VEGF陰性；d:癌組織VEGF陽(yáng)性

圖1 SIRT-1和VEGF表達(dá)(×200)

2.2 胃癌組織中SIRT-1、VEGF表達(dá)與病理特征的關(guān)系

胃癌組織SIRT-1、VEGF表達(dá)與TNM分期、浸潤(rùn)深度、漿膜受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤位置、分化程度、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織中SIRT-1、VEGF表達(dá)與病理特征的關(guān)系(例)

2.3 胃癌組織SIRT-1與VEGF表達(dá)的關(guān)系

胃癌組織SIRT-1與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(χ2=5.042，P=0.025)，見(jiàn)表3、圖2。

表3 胃癌組織SIRT-1與VEGF表達(dá)的關(guān)系[例(%)]

圖2 SIRT-1與VEGF表達(dá)的關(guān)系

3 討論

胃癌在我國(guó)發(fā)病率較高，其病因尚未明確，可能與遺傳、生活、飲食、環(huán)境等有關(guān)，早期無(wú)明顯癥狀或特異性癥狀，表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹脹等常見(jiàn)消化道癥狀，晚期可導(dǎo)致貧血、消瘦、惡病質(zhì)等[5-6]。目前，手術(shù)、化療、放療是治療胃癌的常用方法，可有效緩解患者的臨床癥狀，改善患者的生存狀況，但因胃癌早期無(wú)特異性表現(xiàn)，多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期階段，癌細(xì)胞的異常增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為導(dǎo)致療效及預(yù)后較差，因此如何有效評(píng)估胃癌的病情進(jìn)展情況對(duì)指導(dǎo)臨床診治具有重要的意義[7-8]。有研究顯示，SIRT-1是一種蛋白去乙?；福瑸镾irtuins 家族成員之一，具有蛋白去乙?；钚缘淖饔茫梢蕾嚐燉０废汆堰识塑账岫鴧⑴c細(xì)胞的能量代謝、增殖、凋亡等過(guò)程[9-10]。VEGF是目前誘導(dǎo)新血管生成最強(qiáng)的物質(zhì)，可通過(guò)促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖而使組織內(nèi)部及其周圍新生血管形成，從而維持組織生長(zhǎng)發(fā)育所需的供血供氧[11-12]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中SIRT-1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率較癌旁正常組織高，此結(jié)果與李明輝等[3]、張英輝等[4]的研究一致，表明SIRT-1、VEGF與胃癌的發(fā)生有關(guān)。這可能是由于在實(shí)體腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，SIRT-1的高表達(dá)可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的凋亡，尤其是影響與細(xì)胞凋亡及增殖相關(guān)的多種蛋白活性而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而維持腫瘤的異常增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為[13-14]。VEGF在多種腫瘤中均呈高表達(dá)狀態(tài)，其可能參與了腫瘤血管的形成，使腫瘤在發(fā)生發(fā)展中可持續(xù)獲得充足的供血供氧[15-16]。因此，在胃癌的發(fā)生過(guò)程中，VEGF可能通過(guò)刺激SIRT-1的高表達(dá)而調(diào)節(jié)自身細(xì)胞的能量代謝、增殖、凋亡等過(guò)程，抑制胃細(xì)胞凋亡而使胃細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)，并盡可能地延緩胃細(xì)胞的凋亡，使胃細(xì)胞失去正常的生長(zhǎng)死亡歷程而趨向于癌變[17-18]。同時(shí)，胃癌腫瘤組織為維持其快速生長(zhǎng)所需的大量血氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可能介導(dǎo)了VEGF等血管新生因子的高表達(dá)而促使腫瘤新生血管的形成，使新生血管能夠持續(xù)為胃癌腫瘤組織的快速生長(zhǎng)提供充足的血氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而使腫瘤組織維持快速的生長(zhǎng)狀態(tài)，進(jìn)一步加快了胃細(xì)胞的癌變進(jìn)程[19-20]。

本研究中，TNM分期高、浸潤(rùn)程度深、漿膜受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織SIRT-1、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率較高，此結(jié)果與Li等[10]、沈源等[11]的研究一致，提示SIRT-1、VEGF與胃癌的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等有關(guān)。這可能是由于在胃癌組織中，SIRT-1能抑制胃癌細(xì)胞凋亡，加快胃細(xì)胞的癌變進(jìn)程，使腫瘤的生長(zhǎng)加劇，從而使胃癌細(xì)胞隨病情的快速進(jìn)展而易出現(xiàn)侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為[21-22]。同時(shí)，VEGF陽(yáng)性表達(dá)會(huì)刺激大量VEGF等血管新生因子合成，更顯著地促使了腫瘤周圍血管的新生，使胃癌組織能夠獲得更充足的血氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以維持其快速生長(zhǎng)，甚至侵襲、轉(zhuǎn)移[23-24]。本研究還發(fā)現(xiàn)，胃癌組織SIRT-1與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)，提示SIRT-1和VEGF可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中共同促進(jìn)了胃癌的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，但二者之間的相互作用機(jī)制尚需深入研究了解。因此，本研究認(rèn)為通過(guò)檢測(cè)胃癌組織中SIRT-1、VEGF表達(dá)情況對(duì)評(píng)估胃癌生物學(xué)特性及病情轉(zhuǎn)歸具有重要的參考作用。對(duì)SIRT-1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)者說(shuō)明其病情較為嚴(yán)重，且不良生存的風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)加強(qiáng)病情監(jiān)測(cè)，并及時(shí)作出相應(yīng)的治療方案調(diào)整，以改善患者病情轉(zhuǎn)歸。同時(shí)單一指標(biāo)檢測(cè)易受多種因素影響而導(dǎo)致評(píng)估誤差，故應(yīng)聯(lián)合檢測(cè)[25-26]。

綜上所述，胃癌組織中SIRT-1、VEGF呈高表達(dá)狀態(tài)，且與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可能共同促進(jìn)了胃癌的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，提示SIRT-1、VEGF可作為胃癌診治的新靶點(diǎn)，值得臨床更進(jìn)一步的研究。本研究也存在一定的局限性，如SIRT-1、VEGF在胃癌發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制復(fù)雜，且本次研究納入病例數(shù)較少，不足以代表所有病患情況，故應(yīng)進(jìn)行更大樣本、更深入的研究。