液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定牛奶中噻蟲胺的不確定度評定

賈亞麗 彭露

摘要：采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定牛奶中的噻蟲胺殘留量，并建立不確定度數(shù)學分析模型。根據(jù)GB 23200.39-2016標準檢驗方法，對整個檢驗過程中的不確定度進行評定。經(jīng)分析，不確定度主要來源于樣品的稱樣過程、前處理過程、標準溶液的配制過程以及儀器測定過程等相關(guān)過程以及測量方法的重復性等。分析結(jié)果表明，標準曲線擬合過程對測定結(jié)果的不確定度影響最大（0.0267）。因此，在實際檢測過程中，需要使用精確度更高的器具，以達到控制不確定度，使檢測結(jié)果可靠化的目的。

關(guān)鍵詞：不確定度;牛奶;噻蟲胺;液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀

測量不確定度是一個反映測定結(jié)果的可信性、有效性的參數(shù)，通常一份完整的測定記錄應附有相應的不確定度對測定結(jié)果的質(zhì)量進行定量說明。噻蟲胺是一種新型的煙堿類廣譜殺蟲劑，其作用機理新穎，應用多樣化，防效好，效率高，見效快，殘留期長，能有效防治對菊酯類、煙堿類，有機磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的吸汁類害蟲，是高毒有機磷農(nóng)藥的又一替代品種。目前，已報道的噻蟲胺殘留量在水果、蔬菜以及動物源食品中的檢測方法主要有高效液相色譜法、液質(zhì)色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，前處理過程主要包括乙腈勻漿提取-固相萃取柱凈化，0.1%乙酸-乙腈超聲提取-基質(zhì)分散固相萃取?！癚uEChERS”方法作為一種基質(zhì)分散固相萃取凈化技術(shù)，由于具有快速，簡單，經(jīng)濟，有效，穩(wěn)定，安全的特點，正越來越普遍用于食品和農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥多殘留分析。

國家對噻蟲胺殘留量的檢測提供了相應的檢驗標準，但對其不確定度測量尚未報道。本文以添加噻蟲胺的陽性牛奶為實驗樣品，參考QuEChERS方法結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，對其測量不確定度進行分析評定，根據(jù)各不確定度分量的貢獻，對實際樣品的檢測方法優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支撐。

1 實驗部分

1.1試劑、儀器及材料

噻蟲胺標準品（純度99.90%）（CATO.公司）;無水硫酸鈉（分析純），甲酸（分析純），正己烷（色譜純）、乙腈（色譜純）均購自于Merck KGaA;實驗用水均為Milli-Q 超純水系統(tǒng)（Millipore ）制備的超純水;QuEChERS分散固相萃取管（15 mL離心管中裝150 mg PSA、15 mg GCB、900 mg MgSO4）（上海安譜公司）;三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（AB SCIEX 5500）;、ME204電子天平（METTLER TOLEDO）;UMV-2多管渦旋振蕩器（北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司）;KQ-500E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;3-30K高速冷凍離心機（SIGMA）;氮吹濃縮儀（上海安譜公司）

1.2 溶液制備

1.2.1 標準儲備液的配制

準確吸取1 mL噻蟲胺標準物質(zhì)，以乙腈溶解，配制成一定濃度的儲備液。

1.2.2 標準溶液的配制

準確吸取噻蟲胺儲備液1.00mL于10 mL容量瓶中。乙腈定容至刻度，搖勻，備用。

1.2.3 標準工作曲線的配制

分別準確移取標準溶液濃度（10.0ug/mL）0.010、0.020、0.050、0.10、0.20 mL，用乙腈定容至10.0 mL，得到系列標準工作溶液，濃度分別為10、20、50、100、200 ng/mL。

1.2.4 樣品前處理

稱取5g（精確至0.01g）試樣于50 mL離心管中，加入約3g無水硫酸鈉，混勻，加入10 mL乙酸-乙腈溶液，10 mL正己烷，均質(zhì)3 min，4000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移提取液到分液漏斗中，充分搖勻后靜置分層，收集乙腈層。按同樣操作重復提取一次。用10 mL乙腈洗滌正己烷層，搖勻后靜置分層，收集乙腈層。合并三次收集的乙腈層，在40 ℃下旋蒸至近干，用乙酸-乙腈溶液定容到20 mL，取1.0 mL，加適量基質(zhì)分散固相萃取劑凈化，劇烈振搖1 min，4000 r/min離心10 min，取上清液用0.2 μm濾膜過濾，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。

1.2.5儀器條件

色譜柱：C18柱，150 mm × 2.1 mm，5 μm;

色譜條件：A為甲酸水（0.1%），B為乙腈;梯度洗脫條件：0-1min（65% A），1-5 min（65%-20% A），5-6.5 min（20% A），6.5-6.6 min（20%-65% A），6.6-8.5 min（65% A）

流速：0.3 mL/min;

電離方式：ESI+;

檢測方式：MRM;

檢測離子對（m/z）：定性離子對（250/131），碰撞能17.0 V，定量離子對（250/169），碰撞能21.0 V;

質(zhì)譜儀參數(shù)：離子化電壓（IS）5500 V，霧化氣（GS1）50 psi，輔助氣（GS2）55 psi，氣簾氣壓力（CUR）25 psi，霧化溫度 500 ℃。

2 數(shù)學模型

牛奶中噻蟲胺殘留量按下式計算：

其中，X為實驗中噻蟲胺殘留量，單位mg/kg;V為樣品前處理定容體積，單位mL;m為稱取的樣品質(zhì)量，單位g。

3 不確定度來源

QuEChERS方法結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定牛奶中噻蟲胺殘留量的不確定度主要來源于樣品的稱樣過程、前處理過程、標準溶液的配制過程、儀器測定過程以及測量方法的重復性等。

4 不確定度引入的結(jié)果分析

4.1 樣品稱量引入的不確定度

樣品稱量使用百分之一電子天平，不確定度由天平引入。根據(jù)天平檢定證書，讀取擴展不確定度U=±0.02 g，k=2，稱量的平均質(zhì)量為5.76 g，則相對標準不確定度

5 結(jié)論

本文研究了高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定牛奶中噻蟲胺殘留量，參照CNAS-GL06-2019《化學分析中不確定度的評估指南》對試驗全過程可能引入不確定度的各因素進行不確定度分析評定。根據(jù)計算結(jié)果可知，影響測定結(jié)果不確定度的因素主要有樣品的稱量、樣品前處理、標準溶液的配制、檢測儀器、測量重復性、回收率等。其中標準曲線擬合過程對測定不確定度的影響最大（0.0267），其次是標準物質(zhì)（0.0138），因此，可以考慮，在之后的實際樣品檢測過程中，應重點關(guān)注標準溶液配制相關(guān)過程?？梢酝ㄟ^使用精確度更高的器具、適當增加標準品的稱樣量、合理設置標準溶液線性范圍等措施來降低測定結(jié)果不確定度。針對樣品前處理過程所引入的不確定度，應加強對實驗人員的培訓，提高操作熟練度，確保操作規(guī)范以提高回收率，從而減小不確定度。

參考文獻

[1]張鵬，金芬，楊莉莉，等.噻蟲胺在番茄和土壤中的殘留及消解動態(tài)[J].農(nóng)藥學學報，2016，18（4）：490-496

[2]李廣領(lǐng)，谷珊山，劉博，等.基質(zhì)分散萃取-高效液相色譜法對菠菜中噻蟲胺殘留的檢測[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2016，55（2）：465-468.

[3]管歡，黃慧俐，行艷景，等.噻蟲胺在甘蔗和土壤中的殘留分析及消解動態(tài)LJ].現(xiàn)代農(nóng)藥，2015，14（2）：42-45.

[4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，國家標準化管理委員會.GB/T20769-2008水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標準出版社，2009

[5]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，農(nóng)業(yè)部，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB23200.39-2016食品安全國家標準食品中噻蟲嗪及其代謝物噻蟲胺殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].北京：中國標準出版社，2017

[6]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，國家標準化管理委員會.GB/T20770-2008糧谷中486種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標準出版社，2009

[7]楊東冬，叢路靜，田明明，等.分子印跡固相萃取-液相色譜聯(lián)用法測定3種新煙堿類農(nóng)藥的殘留[J].分析化學，2014，42：872 -877

[8]劉炎，歐陽迪慶，葉玉鳳，等.QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定番茄中噻蟲嗪、噻蟲胺、螺蟲乙酯及其代謝物殘留[J].分析測試學報，2017，36（12）：1431-1438

[9]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.JJG196-2006常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].北京：中國計量出版社，2007.

[10]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.JJG646-2006移液器檢定規(guī)程[S].北京：中國計量出版社，2007.

[11]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-GL006-2019化學分析中不確定度的評估指南[S].北京：中國計量出版社，2019