雜交蘭雙藝金龍根狀莖增殖、分化及生根壯苗研究

摘""要：雜交蘭雙藝金龍（Cymbidium"‘Shuangyi"Jinlong’）是福建百秾生態(tài)科技有限公司從雜交蘭栽培品種黃金龍的無(wú)性系變異單株中選育出的新品種，集花藝和葉藝于一身，發(fā)芽性好，易開(kāi)花，抗性較強(qiáng)，有較高的市場(chǎng)需求。為提高雜交蘭種苗繁殖效率，提升種苗品質(zhì)，建立標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)體系，以雙藝金龍的根狀莖為材料，對(duì)其根狀莖增殖與分化、生根壯苗、煉苗移栽等各階段影響因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。結(jié)果表明：（1）適宜根狀莖增殖生長(zhǎng)的培養(yǎng)基是MS+1.00"mg/L"NAA+0.10"mg/L"6-BA+20.00"g/L蔗糖+1.00"g/L活性炭+6.30"g/L瓊脂+1.00"g/L蛋白胨，根狀莖數(shù)量和鮮質(zhì)量增殖系數(shù)分別為3.57和4.63。（2）適宜根狀莖芽分化的培養(yǎng)基是1/2MS+1.50"mg/L"NAA+0.90"mg/L"TDZ+100.00"g/L香蕉泥+25.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂，芽分化率為97.78%，分化系數(shù)達(dá)6.87。（3）生根壯苗效果較好的培養(yǎng)基是1/2MS+1.00"mg/L"IBA+100.00"g/L香蕉泥+0.17"g/L"KH2PO4+1.00"g/L蛋白胨+30.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂+1.00"g/L活性炭，培養(yǎng)90"d植株平均生根數(shù)5條，根長(zhǎng)5.40"cm，假鱗莖厚度4.35"mm，株高12.95"cm，每株苗鮮質(zhì)量2.42"g。（4）煉苗21"d后選用水苔∶松樹(shù)皮（V∶V=1∶1）為基質(zhì)進(jìn)行移栽，移栽60"d存活率為83.33%。本研究綜合考慮各因素的影響效應(yīng)，最終確定了各階段的最佳培養(yǎng)基配方和煉苗移栽方案，為雙藝金龍標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)體系的建立提供參考。

關(guān)鍵詞：雜交蘭；根狀莖；增殖；分化；生根壯苗中圖分類(lèi)號(hào)：Q945.5；S682.31""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Rhizome"Proliferation，"Differentiation"and"Strong"Seedlings"of"Cymbidium"‘Shuangyi"Jinlong’

DENG"Shuwen1，2，"WU"You1，2，"ZHANG"Huayuan1，2，"LI"Shixing1，2，"LIN"Zirun1，2，"CHEN"Nanchuan3，"FU"Chunmei4，"RAO"Xiaoqiong4，"WU"Shasha1，2，"ZHAI"Junwen1，2*

1."College"of"Landscape"Architecture，"Fujian"Agriculture"and"Forestry"University，"Fuzhou，"Fujian"350002，"China;"2."Key"Laboratory"of"Orchidaceous"Plant"Conservation"and"Utilization，"State"Forestry"and"Grassland"Administration，"Fuzhou，"Fujian"350002，"China;"3."Fujian"Bainong"Ecological"Technology"Co."Ltd.，"Zhangzhou，"Fujian"363599，China;"4."Fujian"Liancheng"Orchid"Co.，"Ltd.，"Longyan，"Fujian"366211，"China

Abstract："Cymbidium"‘Shuangyi"Jinlong’"is"a"new"variety"selected"and"bred"from"the"clonal"variation"of"the"hybrid"orchid"cultivar"‘Golden"dragon’"by"Fujian"Bainong"Ecological"Technology"Co."Ltd.."It"integrates"flower"and"leaf"art，"has"good"germination，"easy"flowering"and"strong"resistance，"and"has"a"high"market"demand."The"rhizome"and"tissue"culture"seedlings"of"Cymbidium"‘Shuangyi"Jinlong’"were"used"as"experimental"materials，"and"the"orthogonal"experiment"was"conducted"to"optimize"the"influencing"factors"of"rhizome"proliferation"and"differentiation，"rooting"and"seedling"growth，"seedling"cultivation"and"transplanting，"in"order"to"improve"the"seedling"reproductive"efficiency"and"seedling"quality"of"hybrid"orchid，"and"establish"a"standardized"production"system."The"most"suitable"medium"for"rhizome"proliferation"and"growth"was"MS"medium"supplemented"with"1.00"mg/L"NAA，"0.10"mg/L"6-BA，"20.00"g/L"sucrose，"1.00"g/L"activated"carbon，nbsp;6.30"g/L"agar，"and"1.00"g/L"peptone;"the"quantity"value-added"coefficient"was"determined"to"be"3.57"while"the"quality"value-added"coefficient"was"found"to"be"4.63."The"optimal"medium"for"rhizome"differentiation"was"1/2MS，"1.50"mg/L"NAA，"0.90"mg/L"TDZ，"100.00"g/L"banana"homogenate，"25.00"g/L"sucrose"6.30g/L;"the"leaf"bud"differentiation"rate"reached"up"to"97.78%，"with"a"differentiation"coefficient"of"6.87."The"best-performing"medium"for"rooting"and"seedlings"strengthening"was"1/2MS，"l.00"mg/L"IBA，"100.00"g/L"banana"homogenate，"0.17"g/L"KH2PO4，"30.00"g/L"sucrose，"agar"and"l.00"g/L"activated"carbon."After"90"days"of"cultivation，"the"average"number"of"roots"per"plant"was"five，"with"a"root"length"of"5.40"cm，"a"pseudobulb"thickness"of"4.35"mm，"a"plant"height"of"12.95"cm，"and"a"fresh"quality"of"2.42"g."The"recommended"method"for"transplanting"tissue"culture"seedlings"involves"using"water"hyacinth∶pine"bark"（V∶V=1∶1）"as"the"transplantation"substrate"after"21"days"in"vitro"culture."The"survival"rate"after"60"days"post-transplantation"reached"83.33%."Taking"into"account"the"impact"of"various"factors，"this"study"ultimately"identified"the"optimal"medium"compositions"at"each"stage"and"refined"transplanting"schemes."This"provides"a"reference"for"establishing"a"standardized"production"system.

Keywords："Cymbidium"hybrid;"rhizome;"proliferation;"differentiation;"rooting"and"seedlings"strengthening

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.01.016

由大花蕙蘭（Cymbidium"hybridium）和國(guó)蘭雜交選育而成的一類(lèi)蘭花統(tǒng)稱為雜交蘭，它集成了國(guó)蘭的幽香、典雅和大花蕙蘭的艷麗、健壯[1]。雜交蘭雙藝金龍（Cymbidium"‘Shuangyi"Jinlong’）是從雜交蘭黃金龍無(wú)性系變異單株中選育的葉片中部、邊緣至尖端和花瓣、萼片具有黃色斑紋的新品種，發(fā)芽性好，易開(kāi)花，抗性較強(qiáng)，具有較高市場(chǎng)潛力[2]。該品種自上市以來(lái)廣受青睞，需求日益增加，但種苗繁殖效率低、品質(zhì)良莠不齊，因此該品種的組培快繁體系研究對(duì)提高生產(chǎn)效率、構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)體系具有重要意義。目前已研究該品種栽培技術(shù)[3]和株型控制[4]，但在優(yōu)質(zhì)種苗規(guī)?；?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方面仍存在較多空白，仍在沿用其他雜交蘭品種繁育培養(yǎng)基配方，尚未研發(fā)出有針對(duì)性的快繁體系。研究表明，蘭科植物的種類(lèi)不同，生長(zhǎng)發(fā)育各個(gè)階段對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求不同，培養(yǎng)基成分和配比上也存在顯著差異[5]。如春蘭（C."goeringii）、蓮瓣蘭（C."tortisepalum）、墨蘭（C."sinense）、建蘭（C."ensifolium）4大類(lèi)國(guó)蘭品種根增殖、芽分化、生根壯苗及移栽研究結(jié)果顯示各品種的快繁體系不盡相同[6]。因此，為了達(dá)到最佳的組培快繁效果，應(yīng)根據(jù)具體植物品種調(diào)整培養(yǎng)基配方來(lái)滿足規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)需求。

本研究從產(chǎn)業(yè)化角度出發(fā)，以雜交蘭雙藝金龍為試材，針對(duì)根狀莖增殖、芽分化、生根壯苗和煉苗移栽等階段的關(guān)鍵影響因素，篩選出組培快繁各階段的最佳培養(yǎng)基組合，為雜交蘭雙藝金龍標(biāo)準(zhǔn)化組培快繁體系的建立及優(yōu)質(zhì)種苗工廠化生產(chǎn)提供參考。

1""材料與方法

1.1""材料

以雜交蘭雙藝金龍為試驗(yàn)材料，試驗(yàn)材料由福建百秾生態(tài)科技有限公司提供。

1.2""方法

1.2.1""根狀莖增殖""以雙藝金龍葉芽組培快繁誘導(dǎo)出的根狀莖為試驗(yàn)材料，探究以MS、1/2MS、花寶2號(hào)（Hyponex"Ⅱ，N∶P∶K=20∶20∶20，3.00"g/L）為基本培養(yǎng)基，不同濃度的NAA（1.00、3.00、5.00"mg/L）和6-BA（0.10、0.30、0.50"mg/L）對(duì)根狀莖增殖的影響，采用3因素3水平的正交試驗(yàn)，參考正交試驗(yàn)表L9（34），共9個(gè)處理，每個(gè)處理3瓶，每瓶接種10個(gè)長(zhǎng)度0.5～0.8"cm、無(wú)側(cè)枝的根狀莖，3次重復(fù)，共90個(gè)外植體。此外，各處理培養(yǎng)基均添加20.00"g/L蔗糖+1.00"g/L活性炭+6.30"g/L瓊脂+1.00"g/L蛋白胨，每瓶培養(yǎng)基用量120"mL，pH"5.7。接種后培養(yǎng)條件：溫度（26±"2）℃，相對(duì)濕度70%；暗處理30"d后，光照培養(yǎng)1000～1500"lx，光照時(shí)間為2"h/d。培養(yǎng)60"d后統(tǒng)計(jì)根狀莖的側(cè)枝數(shù)量，使用電子天平稱量根狀莖質(zhì)量，計(jì)算數(shù)量增殖系數(shù)和鮮質(zhì)量增殖系數(shù)[6-7]。數(shù)量增殖系數(shù)=根狀莖側(cè)枝條數(shù)/接種根狀莖段數(shù)；鮮質(zhì)量增殖系數(shù)=（增殖后根狀莖質(zhì)量－根狀莖接種質(zhì)量）/根狀莖接種質(zhì)量。

1.2.2""根狀莖芽分化""以增殖后的根狀莖為試驗(yàn)材料，對(duì)不同濃度的NAA（0.50、1.50、2.50"mg/L）和TDZ（0.10、0.50、0.90"mg/L）、活性炭（0.00、0.50、1.00"mg/L）、3種有機(jī)添加物（100.00"mL/L椰汁、100.00"g/L香蕉泥、100.00"g/L土豆泥）做4因素3水平正交試驗(yàn)。各處理培養(yǎng)基均以1/2MS為基本培養(yǎng)基并添加25.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂，其他條件同1.2.1。培養(yǎng)60"d后，統(tǒng)計(jì)分化出芽的根狀莖數(shù)和誘導(dǎo)出芽數(shù)，計(jì)算根狀莖的葉芽分化率、芽誘導(dǎo)系數(shù)[8]。分化率=（分化出芽的根狀莖數(shù)/根狀莖總數(shù)）×100%；芽誘導(dǎo)系數(shù)=誘導(dǎo)出的芽個(gè)數(shù)/分化出芽的根狀莖數(shù)。使用直尺測(cè)量芽高。

1.2.3""生根壯苗""以長(zhǎng)勢(shì)一致的4"cm組培苗為材料，對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑IBA（0.50、1.50、2.50"mg/L）、有機(jī)添加物（100.00"mL/L椰汁、100.00"g/L香蕉泥、100.00"g/L土豆泥）、KH2PO4（1/2MS培養(yǎng)基中KH2PO4的濃度倍數(shù)為1、2、3倍）、蛋白胨（1.00、2.00、3.00"g/L）做4因素3水平正交試驗(yàn)。以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加30.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂+1.00"g/L活性炭（pH"5.70）。每個(gè)處理接種3瓶，每瓶接種10株，3次重復(fù)，共接種90株。接種后培養(yǎng)條件：溫、濕度同1.2.1，光照時(shí)間為8"h/d，光照強(qiáng)度1000～"1500"lx。90"d后每處理隨機(jī)選擇30株，在超凈工作臺(tái)中統(tǒng)計(jì)生根數(shù)，使用直尺測(cè)量根長(zhǎng)、株高，使用游標(biāo)卡尺測(cè)量假鱗莖厚度，使用電子天平稱量植株鮮質(zhì)量。

1.2.4""煉苗與移栽""為提高組培苗出瓶成活率，選擇生根壯苗后長(zhǎng)勢(shì)一致、株高約12"cm、根數(shù)≥3條的組培苗，在煉苗大棚內(nèi)分別煉苗7、14、21"d（瓶?jī)?nèi)栽培3"d擰松1/2瓶蓋，第6天完全擰松瓶蓋），煉苗結(jié)束后將組培苗從瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，陰干至根部微變白再移栽至以下3種基質(zhì)中：（1）水苔；（2）水苔∶松樹(shù)皮=1∶1（V∶V）；（3）松樹(shù)皮∶珍珠巖=6∶4（V∶V）。共9組處理，每組各移栽20株，3次重復(fù)，移栽后澆足定根水，保持濕潤(rùn)，適當(dāng)遮陰，放入大棚培

養(yǎng)。移栽60"d后，統(tǒng)計(jì)移栽存活數(shù)并計(jì)算存活率；統(tǒng)計(jì)植株展葉數(shù)、根數(shù)，測(cè)量株高、葉寬、假鱗莖厚度并稱量鮮質(zhì)量。存活率=（移栽存活的植株數(shù)/移栽植株的總數(shù)）×100%。

1.3""數(shù)據(jù)處理

利用Excel"2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和極差分析；用SPSS"25.0軟件進(jìn)行方差分析，用Duncan法進(jìn)行事后多重比較判斷處理間的差異顯著性，用主體間效應(yīng)檢驗(yàn)計(jì)算各因素對(duì)有關(guān)指標(biāo)的影響效應(yīng)。

2""結(jié)果與分析

2.1""基本培養(yǎng)基、NAA、6-BA對(duì)根狀莖增殖的影響

T1根狀莖數(shù)量增殖系數(shù)為3.57±0.13，顯著高于其他處理；T9根狀莖鮮質(zhì)量增殖系數(shù)較高，為5.86±0.30，但與T1、T8差異不顯著（表1）。以MS為基本培養(yǎng)基的T1、T2、T3和以花寶2號(hào)為基本培養(yǎng)基的T7、T8、T9，根狀莖增殖效果顯著優(yōu)于以1/2MS為基本培養(yǎng)基的T4、T5、T6（圖1）。綜合分析，T1的根狀莖數(shù)量增殖系數(shù)和鮮質(zhì)量增殖系數(shù)的效果整體較好。

由表2可知，基本培養(yǎng)基對(duì)根狀莖增殖起主要作用，MS培養(yǎng)基和花寶2號(hào)對(duì)根狀莖的增殖效果顯著優(yōu)于1/2MS培養(yǎng)基；根狀莖的數(shù)量增殖系數(shù)隨著NAA濃度增加而先增加后減少，但不存在顯著差異。主體間效應(yīng)檢驗(yàn)得出：僅基本培養(yǎng)基對(duì)根狀莖數(shù)量和鮮質(zhì)量增殖系數(shù)影響極顯著，各因素對(duì)根狀莖數(shù)量和鮮質(zhì)量增殖系數(shù)影響效應(yīng)排序結(jié)果一致（基本培養(yǎng)基gt;NAAgt;6-BA）。

2.2""NAA、TDZ、活性炭、有機(jī)添加物對(duì)根狀莖芽分化的影響

活性炭濃度越高褐化程度越輕，活性炭濃度設(shè)置最高的D3、D5、D7，芽分化生長(zhǎng)較健壯，葉芽較高，且根系粗壯。統(tǒng)計(jì)分析各指標(biāo)，D1、D6的根狀莖分化率較高，達(dá)（97.78±1.92）%，其次為D8、D7；D6的芽分化系數(shù)為6.87±0.39，顯著高于其他處理組；D5、D8、D9分化芽生長(zhǎng)較好，芽高顯著高于其他處理（表3）。綜合分析，D6根狀莖分化芽的分化率、芽分化系數(shù)、芽生長(zhǎng)高度總體較好。經(jīng)根狀莖芽分化試驗(yàn)培養(yǎng)后，所有處理均未出現(xiàn)芽變現(xiàn)象（分化芽白化或葉藝缺失的返祖現(xiàn)象），芽分化顯著較多的是D6和D8，但出現(xiàn)了部分褐化現(xiàn)象（圖2）。經(jīng)觀察，處理D6培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)15"d可進(jìn)入生根壯苗培養(yǎng)階段。

由表4可知，活性炭對(duì)芽分化系數(shù)和芽高生長(zhǎng)影響較大，添加活性炭會(huì)抑制芽分化系數(shù)，但有利于芽高生長(zhǎng)；有機(jī)添加物種類(lèi)對(duì)分化率影響較大，100.00"g/L土豆泥的影響作用均顯著低于香蕉泥，100.00"g/L香蕉泥對(duì)根狀莖的芽分化系數(shù)有顯著促進(jìn)作用，100.00"mL/L椰汁對(duì)芽高生長(zhǎng)的促進(jìn)作用優(yōu)于香蕉泥但不顯著（表4）。主體間效應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果顯示：除TDZ對(duì)芽高影響不顯著，其他試驗(yàn)因素對(duì)分化率、芽分化系數(shù)、芽高

的影響皆表現(xiàn)極顯著；分化率和芽高的影響效應(yīng)排序與極差R值排序結(jié)果一致。而對(duì)于芽分化系數(shù)的影響效應(yīng)為：活性炭gt;有機(jī)添加物gt;NAAgt;TDZ。

2.3""IBA、有機(jī)添加物、KH2PO4、蛋白胨對(duì)組培苗生根壯苗的影響

R5、R8根部生長(zhǎng)狀態(tài)總體較好，這2組處理的生根數(shù)顯著高于其他處理，分別為（5.12±0.06）、（5.08±0.08）條（表5）；組培苗的生根壯苗效果顯著（圖3）。對(duì)應(yīng)極差分析顯示有機(jī)添加物對(duì)生根影響較大，100.00"g/L香蕉泥對(duì)該品種的生根數(shù)有顯著促進(jìn)作用（表6）。而100.00"mL/L椰汁則對(duì)根長(zhǎng)有較大的促進(jìn)作用，R7的生根數(shù)（2.13±0.08）較少，但其根長(zhǎng)（6.25±0.12）cm顯著較長(zhǎng)。R5假鱗莖較厚，為（4.35±0.06）mm，顯著高于R1、R2、R9；1.00"mg/L"IBA和3倍KH2PO4濃度的1/2MS培養(yǎng)基較利于假鱗莖的生長(zhǎng)。R7株高為（13.75±0.20）cm顯著高于其他處理，2.00"g/L蛋白胨最能促進(jìn)株高生長(zhǎng)。R5鮮質(zhì)量為（2.42±0.02）g顯著較重，100.00"g/L香蕉泥有助于植株生長(zhǎng)、增加鮮質(zhì)量。綜合分析，達(dá)到生根壯苗效果較好的培養(yǎng)基是R5。

此外，方差分析主體間效應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果F值得出，除有機(jī)添加物對(duì)植株假鱗莖厚度影響不顯著和蛋白胨對(duì)假鱗莖厚度和鮮質(zhì)量影響顯著外，各因素相對(duì)各檢測(cè)指標(biāo)影響表現(xiàn)出極顯著結(jié)果；其中有機(jī)添加物對(duì)植株生根數(shù)、根長(zhǎng)、鮮質(zhì)量的影響最強(qiáng)，IBA對(duì)假鱗莖厚度的影響最強(qiáng)，蛋白胨對(duì)株高的影響最強(qiáng)（表6）。

2.4""煉苗時(shí)間及移栽基質(zhì)對(duì)組培苗移栽的影響

煉苗移栽Y5的存活率最高，為（93.33±"5.77）%，即煉苗14"d后使用水苔∶松樹(shù)皮（1∶1）進(jìn)行移栽（表7）。當(dāng)煉苗天數(shù)相同時(shí)，水苔∶松樹(shù)皮（1∶1）相對(duì)另外2種移栽基質(zhì)的存活率高，均在80%以上；經(jīng)觀察，水苔種植的多為爛根而死；而以松樹(shù)皮∶珍珠巖（6∶4）為移栽基質(zhì)的未存活植株根部出現(xiàn)皺縮現(xiàn)象，植株失水導(dǎo)致死亡。通過(guò)松樹(shù)皮∶珍珠巖（6∶4）的移栽結(jié)果看出，煉苗時(shí)間對(duì)移栽存活率有顯著影響，煉苗14"d比7"d的存活率提高了31%。

除了存活率不同，各處理間植株生長(zhǎng)狀態(tài)也存在明顯差異，Y1的移栽苗與出瓶時(shí)生長(zhǎng)狀態(tài)基本一致；而Y2、Y4、Y7、Y8的移栽苗生長(zhǎng)狀況

良好，植株相對(duì)健壯（圖4）。統(tǒng)計(jì)其生長(zhǎng)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，Y4株高較高，為（19.00±1.61）cm，顯著高于Y1、Y3，說(shuō)明水苔相比松樹(shù)皮∶珍珠巖（6∶4）作為移栽基質(zhì)及煉苗時(shí)間為14"d較適宜移栽苗的生長(zhǎng)；而相同移栽基質(zhì)中，煉苗14"d和21"d的株高無(wú)顯著性差異，說(shuō)明煉苗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)限制植株生長(zhǎng)（圖5）。各處理展葉數(shù)多在6片左右，Y6展葉數(shù)顯著多于Y3、Y9，移栽松樹(shù)皮∶珍珠巖（6∶4）的煉苗14"d處理組展葉較多。Y7的葉寬最佳，為（11.18±1.24）mm，水苔能明顯促進(jìn)葉片寬度延展。生根情況較好的是Y6、Y7、Y8，生根數(shù)顯著多于其他處理組。Y7、Y8的假鱗莖厚度顯著較高，分別為（6.44±0.30）、（6.28±0.45）mm。Y7的鮮質(zhì)量最重，為（7.77±1.11）g，可以看出水苔的保水能力有助于鮮質(zhì)量增加。

綜上所述，在雜交蘭煉苗移栽環(huán)節(jié)，以保證存活率為前提，綜合移栽后的生長(zhǎng)狀態(tài)，Y8作為組培苗移栽方案較為合適。

3""討論

3.1""雜交蘭根狀莖增殖的影響因素

適于蘭科植物的基本培養(yǎng)基有MS、1/2MS、KC、VW、PM、速效復(fù)合肥（如花寶1號(hào)、花寶2號(hào)）及一些與之對(duì)應(yīng)的改良培養(yǎng)基[9-10]。品種、發(fā)育階段和培養(yǎng)目標(biāo)的不同，對(duì)基本培養(yǎng)基的需求也不同。本研究表明，MS培養(yǎng)基有助于雜交蘭雙藝金龍根狀莖分枝增殖，花寶2號(hào)更有利于根狀莖營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，而1/2MS培養(yǎng)基則對(duì)根狀莖增殖階段影響較??；就成分差異而言，1/2MS培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基的大量元素減半，花寶2號(hào)的P、K含量高于MS培養(yǎng)基，說(shuō)明雜交蘭雙藝金龍對(duì)無(wú)機(jī)鹽濃度需求較高，P、K無(wú)機(jī)鹽可促進(jìn)其根狀莖的生長(zhǎng)。此外，生長(zhǎng)素NAA能明顯促進(jìn)蘭科植物根狀莖增殖和生長(zhǎng)，添加細(xì)胞分裂素6-BA能促進(jìn)側(cè)枝生長(zhǎng)[11]。因此在本研究中選擇高濃度的NAA和低濃度的6-BA進(jìn)行根狀莖增殖培養(yǎng)試驗(yàn)，但結(jié)果顯示相比于基本培養(yǎng)基種類(lèi)，它們對(duì)雜交蘭雙藝金龍的根狀莖增殖影響不顯著，其中細(xì)胞分裂素6-BA濃度的影響效應(yīng)最小，這一結(jié)論與雜交蘭紅美人（C."‘Hong"Mei"Ren’）×寒蘭楊貴妃（C."kanran"‘Yang"Gui"Fei’）雜交后代增殖[12]的研究結(jié)果一致。

3.2""雜交蘭根狀莖芽分化的影響因素

生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素之間的相互作用調(diào)控一些重要的發(fā)育過(guò)程，如植物體所必需的分生組織的形成和維持[13]。本研究選擇不同濃度的生長(zhǎng)素NAA和細(xì)胞分裂素TDZ進(jìn)行試驗(yàn)，NAA和TDZ對(duì)雜交蘭雙藝金龍的根狀莖芽分化率和分化系數(shù)均有顯著影響。但在芽高生長(zhǎng)方面，NAA有較高的影響效應(yīng)，說(shuō)明NAA在植株形態(tài)增長(zhǎng)上有更明顯的促進(jìn)作用[14]。觀察芽分化情況的同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同程度的褐化情況，活性炭濃度的增加可減輕褐化，這是由于活性物質(zhì)具有豐富的孔隙網(wǎng)絡(luò)吸附物質(zhì)，不可逆吸附培養(yǎng)基中的抑制性化合物，減少了有毒代謝物和酚類(lèi)滲出物積累[15]。同時(shí)，活性炭使培養(yǎng)基為根系提供黑暗環(huán)境促進(jìn)植物極性發(fā)生，有利于其正常生長(zhǎng)[16]，但活性物質(zhì)也會(huì)吸附營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而限制植物養(yǎng)分吸收。本研究也證明了這一觀點(diǎn)，活性炭濃度與根狀莖分化率和芽分化系數(shù)成反比，與芽高成正比。因此在保證芽分化效果最佳的前提下，若要使芽高生長(zhǎng)可增加暗環(huán)境處理或適量增加環(huán)境溫度代替活性炭作用，促使分化芽快速生長(zhǎng)。此外，在培養(yǎng)基中添加的有機(jī)添加物是維生素、氨基酸、脂肪酸、碳水化合物和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來(lái)源[17]。研究表明80.00"g/L香蕉泥有利于玉兔蘭玉香蘭（C."Jade"Hare"‘Yuxiang’）芽分化[18]；100.00"mL/L椰汁有利于雜交墨蘭芽分化[7]。本研究表明100.00"g/L香蕉泥更有利于雜交蘭根狀莖的芽分化。

3.3""雜交蘭組培苗生根壯苗的影響因素

雜交蘭組培苗的生根壯苗可以從生根數(shù)、根長(zhǎng)、假鱗莖厚度、株高、鮮質(zhì)量等形態(tài)指標(biāo)直觀體現(xiàn)。本研究顯示1.00"mg/L"IBA對(duì)各指標(biāo)的影響最佳，說(shuō)明適量的IBA能促進(jìn)雙藝金龍組培苗生根壯苗。雜交蘭K6生根壯苗研究同樣表明過(guò)高或過(guò)低的IBA濃度均對(duì)其組培苗生長(zhǎng)起到抑制作用，0.50"mg/L"IBA更適于K6的生根壯苗[19]。栽培研究表明以KH2PO4為主的磷鉀肥可以促進(jìn)蘭花根系生長(zhǎng)和假鱗莖發(fā)育，提高抗逆性[20]。因此本研究在MS培養(yǎng)基原有的基礎(chǔ)上提高KH2PO4含量，結(jié)果顯示使用3倍的KH2PO4濃度對(duì)雜交蘭組培苗的根長(zhǎng)、假鱗莖厚度、株高、鮮質(zhì)量均有明顯促進(jìn)作用。在組培中可加入土豆泥、香蕉泥、椰汁等植物有機(jī)物，也可加入蛋白胨、酵母提取物等人工提取物[21]，這兩類(lèi)同時(shí)添加可促進(jìn)假鱗莖膨大和試管苗增殖[22]。本研究結(jié)果顯示植物有機(jī)添加物均對(duì)雙藝金龍生根壯苗的生根數(shù)、根長(zhǎng)、鮮質(zhì)量具有極顯著影響，而人工提取物蛋白胨則對(duì)株高具有極顯著影響，添加100.00"g/L香蕉泥和1.00"g/L蛋白胨共同作用最有利于組培苗的生根壯苗。此外，IBA、KH2PO4、蛋白胨的含量對(duì)生根壯苗各指標(biāo)的影響表現(xiàn)顯著或極顯著，唯有有機(jī)添加物對(duì)假鱗莖厚度表現(xiàn)出不顯著。這個(gè)現(xiàn)象在蘭科其他屬植物中也有相似的結(jié)果，如香蕉泥、椰汁對(duì)蜻蜓石斛（Dendrobium"pulchellum）的莖粗生長(zhǎng)影響較小[23]，但其原因有待研究。

3.4""煉苗時(shí)間及移栽基質(zhì)對(duì)雜交蘭組培苗移栽的影響

煉苗移栽是植物從組培室到室外成功移植的重要過(guò)程[24]。本研究認(rèn)為煉苗時(shí)間及移栽基質(zhì)均是組培苗移栽的關(guān)鍵影響因素，延長(zhǎng)煉苗時(shí)間至21"d并使用水苔∶松樹(shù)皮（1∶1）為移栽基質(zhì)可顯著提高組培苗的移栽存活率并保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。在移栽基質(zhì)的相關(guān)研究中顯示，疏松透氣且保水能力好的基質(zhì)有利于小苗的生長(zhǎng)[25]。本研究同樣體現(xiàn)這一結(jié)論，純水苔基質(zhì)的保水能力較強(qiáng)，透氣性較弱，不利于移栽植株的根部生長(zhǎng)；而以松樹(shù)皮∶珍珠巖（6∶4）為移栽基質(zhì)的透水性較強(qiáng)，難以保濕。水苔∶松樹(shù)皮（1∶1）的移栽基質(zhì)綜合二者保水透氣性能且能保證植株的養(yǎng)分供給，因此該基質(zhì)移栽的組培苗存活率及生長(zhǎng)狀態(tài)較好。

4""結(jié)論

本研究通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)雜交蘭雙藝金龍組培快繁各階段的培養(yǎng)基成分進(jìn)行研究，分析各類(lèi)培養(yǎng)基成分對(duì)根狀莖及組培苗生長(zhǎng)的影響，篩選各階段最適培養(yǎng)基，同時(shí)探究煉苗時(shí)間及移栽基質(zhì)的最佳方案。

（1）基本培養(yǎng)基是雜交蘭雙藝金龍根狀莖增殖的重要影響因素。根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+1.00"mg/L"NAA+0.10"mg/L"6-BA+20.00"g/L蔗糖+1.00"g/L活性炭+6.30"g/L瓊脂+1.00"g/L蛋白胨。

（2）NAA、TDZ、活性炭、有機(jī)添加物對(duì)根狀莖的芽分化和生長(zhǎng)均有顯著影響，其中活性炭會(huì)顯著抑制芽分化，因此1/2MS+1.50"mg/L"NAA+"0.90"mg/L"TDZ+100.00"g/L香蕉泥+25.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂的芽分化培養(yǎng)基對(duì)根狀莖芽分化效果最好。

（3）生根壯苗效果較好的培養(yǎng)基是1/2MS+"1.00"mg/L"IBA+100.00"g/L香蕉泥+0.17"g/L"KH2PO4+"1.00"g/L蛋白胨+30.00"g/L蔗糖+6.30"g/L瓊脂+"1.00"g/L活性炭。

（4）雙藝金龍組培苗煉苗21"d后移栽在水苔∶松樹(shù)皮（V∶V=1∶1）基質(zhì)中效果最好。

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