喹哪啶在珍珠龍膽石斑魚(yú)體內(nèi)的殘留消除規(guī)律

徐閃浪，黃 和,4，高 平，陳日檬，曾丹丹，陳營(yíng)壽

喹哪啶在珍珠龍膽石斑魚(yú)體內(nèi)的殘留消除規(guī)律

徐閃浪1,2,3，黃 和1,2,3,4，高 平5，陳日檬5，曾丹丹5，陳營(yíng)壽5

（1. 廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院 // 2. 廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 // 3. 水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 // 4. 廣東海洋大學(xué)分析測(cè)試中心，廣東 湛江 524088；5. 湛江市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 湛江 524022）

【】研究喹哪啶在珍珠龍膽石斑魚(yú)（♀×♂）組織內(nèi)的殘留和消除規(guī)律，以期為監(jiān)控喹哪啶麻醉劑的安全使用以及制定其休藥期的提供參考依據(jù)。將石斑魚(yú)置于質(zhì)量濃度為10 mg?L-1的喹哪啶溶液中，藥浴浸泡麻醉24 h后將其放置海水中復(fù)蘇120 h。在24 h小時(shí)麻醉過(guò)程中，采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）分析方法每2 h測(cè)定一次其肌肉和肝臟內(nèi)喹哪啶的含量，分析喹哪啶在石斑魚(yú)組織內(nèi)的殘留規(guī)律。同樣，在之后石斑魚(yú)120 h復(fù)蘇過(guò)程中測(cè)定其肌肉和肝臟中喹哪啶含量，分析喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)的消除規(guī)律。喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟和肌肉中殘留量較大，在肝臟中最大殘留量max為81.54 μg?g-1，肌肉中最大殘留量max為31.95 μg?g-1。石斑魚(yú)內(nèi)喹哪啶殘留消除過(guò)程符合一級(jí)二室模型。復(fù)蘇消除120 h之后，喹哪啶在肝臟中殘留量為2.54 μg?g-1，在肌肉中為1.36 μg?g-1。喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟和肌肉中消除速率分別為0.010?0.004 g?h-1?g-1；肌肉中消除半衰期為66.75 h；肝臟中消除半衰期為37.57 h。相較于丁香酚和MS-222，喹哪啶消除速率低，消除半衰期長(zhǎng)，消除降解緩慢。

喹哪啶；珍珠龍膽石斑魚(yú)；殘留；消除

珍珠龍膽石斑魚(yú)（♀ ×♂）又稱(chēng)龍虎斑或珍珠斑，其肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受全國(guó)各地食客的喜愛(ài)。但我國(guó)珍珠龍膽石斑魚(yú)養(yǎng)殖主要集中在廣東、海南和福建等省份，在實(shí)際銷(xiāo)售中往往需要較長(zhǎng)時(shí)間或者長(zhǎng)距離的運(yùn)輸。傳統(tǒng)的水產(chǎn)品運(yùn)輸方式在運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)因?yàn)樗|(zhì)惡化、應(yīng)激、缺氧、震動(dòng)等不利因素而導(dǎo)致珍珠龍膽石斑魚(yú)大量死亡[1]。行業(yè)普遍采用漁用麻醉劑手段降低珍珠龍膽石斑魚(yú)的應(yīng)激行為活動(dòng)，以提高活魚(yú)運(yùn)輸?shù)拇婊盥?，減少經(jīng)濟(jì)損失[2]。

喹哪啶具有較好的麻醉作用，其麻醉效果明顯，且價(jià)格便宜，消耗劑量少，因此被廣泛運(yùn)用于漁業(yè)麻醉運(yùn)輸中。目前，喹哪啶在漁業(yè)水產(chǎn)方面應(yīng)用研究主要集中在其對(duì)水產(chǎn)品的麻醉效果，而關(guān)于其在水產(chǎn)品中殘留消除規(guī)律的研究尚未見(jiàn)報(bào)道?；诖耍狙芯恳哉渲辇埬懯唪~(yú)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）檢測(cè)技術(shù)研究珍珠龍膽石斑魚(yú)在喹哪啶藥浴麻醉24 h后，其組織內(nèi)喹哪啶的殘留和消除規(guī)律，以期為監(jiān)控喹哪啶麻醉劑的安全使用及制定休藥期提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 石斑魚(yú) 珍珠龍膽石斑魚(yú)購(gòu)買(mǎi)于廣東省湛江市霞山水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)，選用體長(zhǎng)為（32±1.4）cm、體質(zhì)量為（529±45）g的石斑魚(yú)。置于300 L（119 cm × 89 cm × 32 cm）水箱中暫養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)用海水水溫為20 ～ 22 ℃，鹽度為18 ～ 20，pH為7.5，溶氧量為8 ～ 11 mg?L-1。暫養(yǎng)期間每天連續(xù)地使用增氧泵充氣供氧，每天換體積分?jǐn)?shù)50%海水，不進(jìn)行投喂，暫養(yǎng)24 h，挑選體表完整、健康無(wú)傷的個(gè)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑及耗材 喹哪啶標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：91-63-4），純度≥98%，上海麥克林生化科技有限公司純度；乙腈、正己烷、乙酸乙酯均為HPLC級(jí)，美國(guó)Honeywell公司；無(wú)水乙醇（≥99.7%），廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研發(fā)開(kāi)發(fā)中心；Silica柱（1 000 mg / 6 mL），艾杰爾科技有限公司。

1.1.3 主要儀器 GCMS- QP2010Ultra氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電子轟擊離子源（EI）（日本SHIMADZU公司）、RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司）、Centrisartg-16C高速冷凍離心機(jī)(賽多利斯科學(xué)儀器（北京)有限公司）、Vac Elut 20固相萃取裝置（美國(guó)Agilent公司）、JYL-C19V九陽(yáng)料理機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 復(fù)活實(shí)驗(yàn) 稱(chēng)取適量喹哪啶標(biāo)準(zhǔn)溶液先溶于15 mL無(wú)水乙醇溶液再混溶于水溫為20 ～ 22 ℃，鹽度為18 ～ 20的海水中，依次配制100 L質(zhì)量濃度分別為為10、15 、20、25、30、35 mg?L-1的喹哪啶藥液，裝于6個(gè)塑料箱（70 cm×50 cm×39 cm）。每個(gè)塑料箱中隨機(jī)放入10尾石斑魚(yú)進(jìn)行藥浴麻醉，共計(jì)60尾，藥浴浸泡期間保持增氧泵充氣供氧。藥浴浸泡24 h[3]后，將各個(gè)麻醉濃度下的石斑魚(yú)用干凈海水快速?zèng)_洗魚(yú)體表面，分別放入盛有120 L干凈海水的塑料缸（68 cm×30 cm×100 cm）中進(jìn)行復(fù)活，在此過(guò)程保持向其充氣供氧，記錄每個(gè)麻醉濃度的魚(yú)的復(fù)活情況。復(fù)蘇情況主要分為完全復(fù)活、癱瘓、死亡3種情況。完全復(fù)活：魚(yú)體可以恢復(fù)正常游動(dòng)[4]，反應(yīng)能力正常，呼吸速率穩(wěn)定。癱瘓：呼吸速率下降但穩(wěn)定，不具備應(yīng)激反應(yīng)，平躺箱底無(wú)法游動(dòng)。死亡：無(wú)呼吸，魚(yú)體僵硬，色澤發(fā)白。根據(jù)復(fù)活情況計(jì)算其復(fù)活率、癱瘓率和死亡率。

1.2.2 殘留實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱(chēng)量一定喹哪啶標(biāo)準(zhǔn)溶液先溶于15 mL無(wú)水乙醇溶液再混溶于水溫為20 ～ 22 ℃，鹽度為18 ～ 20的海水中。配制400 L質(zhì)量濃度10 mg?L-1的麻醉藥液，將配制好的10 mg?L-1麻醉藥液分裝于4個(gè)塑料箱（70 cm×50 cm×39 cm），每個(gè)箱配制100 L。每個(gè)塑料箱中隨機(jī)放入10尾石斑魚(yú)進(jìn)行麻醉藥浴，共計(jì)40尾，藥浴浸泡期間一直保持增氧泵充氣供氧。麻醉期間，分別在0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)平行取3尾魚(yú)。每次取樣前先用清水多次快速?zèng)_洗魚(yú)體表面殘留的藥液，避免表面藥液影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將石斑魚(yú)去表皮，取肝臟和肌肉，均質(zhì)混勻，待提取測(cè)定。

1.2.3 消除實(shí)驗(yàn) 進(jìn)行喹哪啶殘留實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，進(jìn)行石斑魚(yú)在10 mg?L-1的喹哪啶麻醉藥液中藥浴浸泡24 h后的消除試驗(yàn)。將按照1.2.2中方法配制好的10 mg?L-1的麻醉藥液分裝于5個(gè)塑料箱（70 cm×50 cm×39 cm），每個(gè)箱配制100 L。每個(gè)塑料箱中隨機(jī)放入10尾石斑魚(yú)進(jìn)行麻醉藥浴，共計(jì)50尾。藥浴浸泡24 h后，用干凈海水快速多次沖洗魚(yú)體表面殘留的藥液，避免表面藥液影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，放入盛有200 L干凈海水的塑料箱中進(jìn)行復(fù)蘇。復(fù)蘇期間保持增氧泵充氣供氧，分別在0.5、1、1.5、2、3、5、7、10、15、24、36、48、72、96、120 h取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)平行取3尾魚(yú)。將石斑魚(yú)去表皮，取肝臟和肌肉，均質(zhì)混勻，待提取測(cè)定。

1.2.4 GC-MS測(cè)定喹哪啶含量

1.2.4.1 樣品前處理 稱(chēng)取2 g（精確至0.01 g）樣品置于50 mL塑料離心管中，加入2 mL超純水和1顆均質(zhì)子，旋渦振蕩1 min后加入10 mL乙腈，旋渦振蕩5 min后，超聲提取10 min，再加入2 g氯化鈉（NaCl），手搖1 min，以5 000 r·min-1離心10 min；上層清液分離至另一支50 mL離心管中；殘?jiān)偌尤?0 mL乙腈重復(fù)提取一次，合并所有上清液后，加入2 g無(wú)水硫酸鎂（MgSO4），振蕩1 min，以5 000 r?min-1離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中在40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，用3 mL正己烷復(fù)溶凈化。按照順序依次使用5 mL乙酸乙酯、5 mL正己烷活化Silica柱，將上述復(fù)溶液全部倒入Silica柱后，用3 mL正己烷潤(rùn)洗雞心瓶，全部倒入Silica柱中，依靠重力自然流出。再用5 mL正己烷淋洗Silica柱，棄掉全部流出液，最后用6 mL乙酸乙酯洗脫并收集，40 ℃水浴氮吹至體積小于2 mL，用乙酸乙酯定容至2 mL供GC-MS分析。

1.2.4.2 GC-MS儀器條件 色譜條件：色譜柱，DB-17MS毛細(xì)管柱（30 m × 0.25 mm× 0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度，230 ℃；升溫程序，初始柱溫為50 ℃，保持2 min，以10 ℃?min-1的升溫梯度升至200 ℃，保持2 min，以20 ℃?min-1的升溫梯度升至280 ℃保持17 min；載氣，高純氦氣（純度≥99.999%）；總流量，35 mL?min-1；恒壓模式，90 kPa；進(jìn)樣模式，不分流模式；進(jìn)樣量，1 μL。

質(zhì)譜條件：離子源溫度，230 ℃；接口溫度，260 ℃；電離方式，電子轟擊源（Electron impact，EI）；電離能量，70 eV；溶劑延遲，5 min；檢測(cè)方式，選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式。

1.3 數(shù)據(jù)分析

結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 25.0、Origin 9.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并制圖。對(duì)于不符合正態(tài)分布的石斑魚(yú)復(fù)活率、癱瘓率和死亡率結(jié)果（表1），對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行平方根反正弦轉(zhuǎn)換處理后，采用單因素方差分析（One-way ANOVA）和Dunnett檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，< 0.05被認(rèn)為具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外，喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟的殘留消除規(guī)律模型建立，本研究主要采用軟件DAS 2.0對(duì)石斑魚(yú)的肝臟和肌肉的藥時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，選用智能分析模式，分別對(duì)比一、二、三房室以及權(quán)重分別為1、2、3三種情況進(jìn)行曲線擬合，根據(jù)AIC值來(lái)判斷最佳消除房室模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 喹哪啶藥浴麻醉石斑魚(yú)24 h后的復(fù)活情況

珍珠龍膽石斑魚(yú)經(jīng)不同濃度的喹哪啶藥浴浸泡24 h后，復(fù)活情況見(jiàn)表1。喹哪啶質(zhì)量濃度水平對(duì)石斑魚(yú)的復(fù)活率、癱瘓率和死亡率具有極顯著性（< 0.01）影響。隨著喹哪啶質(zhì)量濃度水平的遞增，石斑魚(yú)的復(fù)活率極顯著降低，當(dāng)喹哪啶質(zhì)量濃度為25 mg?L-1，石斑魚(yú)復(fù)活率為（0±0.00）%。同時(shí)，死亡率極顯著提高，當(dāng)喹哪啶質(zhì)量濃度為20 mg?L-1時(shí)，出現(xiàn)麻醉過(guò)程死亡現(xiàn)象，死亡率為（18.49±6.38）%。喹哪啶質(zhì)量濃度為≥30 mg?L-1，石斑魚(yú)死亡率達(dá)到（100±0.00）%。而隨著喹哪啶質(zhì)量濃度水平遞增，石斑魚(yú)癱瘓率呈先升后降的趨勢(shì)。喹哪啶質(zhì)量濃度為20 mg?L-1時(shí)，石斑魚(yú)癱瘓率最高為（52.01±0.97）%。綜合考慮下，確定后續(xù)殘留消除實(shí)驗(yàn)的麻醉濃度為10 mg?L-1。

表1 石斑魚(yú)在不同喹哪啶濃度下浸浴24 h后的復(fù)活情況

2.2 麻醉過(guò)程中喹哪啶在石斑魚(yú)組織中殘留變化

24 h麻醉過(guò)程中，喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)的殘留實(shí)時(shí)藥物濃度?時(shí)間（C?t）曲線見(jiàn)圖1。在麻醉10 h時(shí)，肝臟和肌肉中的喹哪啶殘留量出現(xiàn)第一個(gè)峰值，肝臟中為81.54 μg?g-1，肌肉中為24.76 μg?g-1。在麻醉14 h時(shí)，肝臟中喹哪啶殘留量出現(xiàn)第二個(gè)峰值78.15 μg?g-1，而肌肉中喹哪啶殘留量出現(xiàn)第二個(gè)殘留量峰值（31.95 μg?g-1）則在麻醉24 h。麻醉過(guò)程中石斑魚(yú)肌肉中喹哪啶殘留量變化較小，但肝臟中喹哪啶殘留量變化較大，呈現(xiàn)明顯“雙峰”吸收復(fù)現(xiàn)象。喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟殘留量差異較大，肝臟中喹哪啶殘留量遠(yuǎn)高于肌肉中。

2.3 消除過(guò)程中喹哪啶在石斑魚(yú)組織中消除變化

喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉、肝臟中消除的實(shí)時(shí)藥物濃度?時(shí)間（C?t）曲線見(jiàn)圖2。在開(kāi)始消除0.5 h之內(nèi)，喹哪啶的殘留量消除速率較快，肌肉中喹哪啶殘留量從31.95 μg?g-1降到23.17 μg?g-1，肝臟中喹哪啶殘留量從71.21 μg?g-1降到24.52 μg?g-1。但在開(kāi)始消除0.5 h之后，喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟中的消除速率下降，喹哪啶濃度出現(xiàn)上升又下降的反復(fù)循環(huán)現(xiàn)象。復(fù)蘇消除120 h后，肝臟的喹哪啶殘留量為2.54 μg?g-1，肌肉的為1.36 μg?g-1。可見(jiàn)，喹哪啶麻醉劑在石斑魚(yú)的肝臟和肌肉中消除較慢且需要更長(zhǎng)消除時(shí)間。

圖1 喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟和肌肉中的殘留變化

圖2 喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟中和肌肉中的喹哪啶消除變化

2.4 喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)殘留消除模型及主要參數(shù)

DAS 2.0智能分析模式計(jì)算見(jiàn)表2。可知在肝臟或肌肉中，當(dāng)權(quán)重= 3時(shí)，一室模型和二室模型擬合度較為理想，分別為1.000和0.999。AIC絕對(duì)值越小說(shuō)明模型擬合越好，二室模型中AIC值均為最小，肝臟中是30.354，肌肉中是26.559。由此確定喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟、肌肉殘留消除變化過(guò)程符合一級(jí)消除二室模型，喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉、肝臟的藥?時(shí)曲線關(guān)系方程見(jiàn)表3。喹哪啶在石斑魚(yú)組織（肌肉?肝臟）的主要消除參數(shù)見(jiàn)表4。

表2 DAS 2.0智能分析結(jié)果

表3 石斑魚(yú)組織中喹哪啶的藥-時(shí)曲線關(guān)系方程

注Note：，實(shí)時(shí)藥物濃度real-time drug concentration；，時(shí)間time

表4 喹哪啶在石斑魚(yú)組織內(nèi)的主要消除參數(shù)

注：1/2α，分布半衰期；1/2β，消除半衰期；AUC（0- t），0～時(shí)間血藥濃度曲線下面積；AUC（0～∞），0～∞時(shí)間血藥濃度曲線下面積；10，從中央室到體外消除速率常數(shù)；12，從中央室到外周室消除速率常數(shù)；21，從外周室到中央室消除速率常數(shù)；k，分布速率常數(shù)；Tlag，滯后時(shí)間；CL，消除速率；MRT（0 - t），0～平均滯留時(shí)間；MRT（0～∞），0～∞平均滯留時(shí)間；1/2，消除半衰期；max，達(dá)峰時(shí)間；z，表觀分布容積；max，峰值濃度

Notes:1/2α, distribution half-life;1/2β, elimination half-life; AUC（0- t）, area under the plasma concentration curve at time 0 -; AUC（0～∞）, area under the plasma concentration curve at time 0～∞;10, Elimination rate constant from extra-depot subcompartment to in vitro;12, Elimination rate constant from extra-depot subcompartment to depot subcompartment;21, Elimination rate constant from depot subcompartment to extra-depot subcompartment;a, distribution rate constant; Tlag: lag time;CL, elimination rate; MRT（0- t）, average residence at time 0 -; MRT（0～∞）, average residence at time 0～∞;1/2, elimination half-life;max, peak time;z, apparent volume of distribution;max, peak concentration

3 討論

3.1 喹哪啶麻醉濃度的確定

根據(jù)文獻(xiàn)[5]，為避免魚(yú)體在麻醉過(guò)程死亡，在對(duì)魚(yú)體進(jìn)行不同體外操作干預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)慎重選擇適合的麻醉狀態(tài)。李寧等[6]發(fā)現(xiàn)適用于活魚(yú)長(zhǎng)時(shí)間麻醉手段是使其處于深度鎮(zhèn)靜期或者麻醉期。與輕度鎮(zhèn)靜期相比，該狀態(tài)下的魚(yú)應(yīng)激反應(yīng)弱，代謝效率低，呼吸穩(wěn)定。即使在長(zhǎng)時(shí)間麻醉過(guò)程中，魚(yú)體即顯得更加安定也不會(huì)因?yàn)槁樽磉^(guò)深靜臥池底缺氧而無(wú)法復(fù)蘇或者窒息而死[7-8]。根據(jù)復(fù)活實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)喹哪啶質(zhì)量濃度為10 mg?L-1時(shí)，24 h麻醉后石斑魚(yú)復(fù)活率為100%，并未出現(xiàn)死亡或者癱瘓的情況，滿(mǎn)足殘留消除實(shí)驗(yàn)的要求。因此本研究選擇喹哪啶質(zhì)量濃度為10 mg?L-1作為珍珠龍膽石斑魚(yú)殘留消除規(guī)律研究實(shí)驗(yàn)的麻醉濃度。該結(jié)果和Hinton等[9]在喹哪啶和MS-222對(duì)鰻（）的麻醉效果的研究的結(jié)果相似：當(dāng)麻醉鰻幼魚(yú)，喹哪啶質(zhì)量濃度為8、10、12 mg?L-1時(shí)，最長(zhǎng)麻醉時(shí)間可以達(dá)到48 h；而質(zhì)量濃度為15、20、25 mg?L-1時(shí)藥浴麻醉12 h后則開(kāi)始出現(xiàn)致死情況。

3.2 喹哪啶在石斑魚(yú)組織中殘留特征

在麻醉過(guò)程中，麻醉劑喹哪啶在肝臟中的殘留量遠(yuǎn)高于肌肉中，這現(xiàn)象在MS-222在大菱鲆（）[10]、凡納濱對(duì)蝦（）[11]的殘留中都曾報(bào)道過(guò)。喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟中殘留量高，原因可能是肝臟是動(dòng)物解毒、藥物代謝消除的重要器官之一，且肝臟中包括各種細(xì)小復(fù)雜的血管。其次，石斑魚(yú)大部分都是肌肉纖維和蛋白質(zhì)，沒(méi)有血管，且參與藥物消除代謝作用小，因此導(dǎo)致喹哪啶在肝臟中殘留量遠(yuǎn)高于肌肉中的。喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟中殘留差異大，喹哪啶在肝臟中最大殘留量max為81.54 μg?g-1，肌肉中為31.95 μg?g-1，說(shuō)明喹哪啶麻醉進(jìn)入石斑魚(yú)體內(nèi)大部分停留在肝臟器官上，只有小部分通過(guò)血液循環(huán)進(jìn)入石斑魚(yú)肌肉中。

麻醉過(guò)程，石斑魚(yú)肝臟和肌肉中的喹哪啶殘留量出現(xiàn)先上升后下降的反復(fù)循環(huán)現(xiàn)象，肝臟中出現(xiàn)明顯的喹哪啶殘留量“雙峰”現(xiàn)象，這與阿維菌素在鱸（）組織中的吸收殘留規(guī)律相似[12]。這種藥物吸收多峰的現(xiàn)象在丁香酚麻醉凡納濱對(duì)蝦和鱸中殘留消除規(guī)律中[13]、氟苯尼考在草魚(yú)（）、鱸中的藥物代謝中均存在[14-15]。這種現(xiàn)象極可能與肝腸循環(huán)吸收或者腸胃循環(huán)吸收的非齊性的現(xiàn)象有關(guān)[12]。但目前喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟內(nèi)的具體吸收代謝機(jī)制尚不明確，該理論尚未得到證實(shí)，有待進(jìn)一步深入的探究。

3.3 喹哪啶在石斑魚(yú)組織中消除特征

在放入干凈海水復(fù)蘇中開(kāi)始消除0.5 h內(nèi)，喹哪啶的殘留量急速消除降解，肝臟中喹哪啶殘留量下降超過(guò)60%，肌肉殘留量超過(guò)20%。這可能是由于魚(yú)體在干凈海水開(kāi)始復(fù)蘇，呼吸速率加快，代謝加快，加快了喹哪啶在魚(yú)體內(nèi)消除。組織內(nèi)藥物極速消除現(xiàn)象在漁用麻醉劑殘留規(guī)律研究中較為常見(jiàn)。在研究丁香酚在鱸[13]、青石斑魚(yú)（）[16]肌肉的消除規(guī)律中也出現(xiàn)類(lèi)型現(xiàn)象。復(fù)蘇120 h后，肝臟的喹哪啶殘留量為2.54 μg?g-1，肌肉中為1.36 μg?g-1；相比于MS-222、丁香酚，喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)消除較慢，停留時(shí)間長(zhǎng)。大菱鲆復(fù)蘇48 h后，MS-222在其肌肉和肝臟中殘留量均低于1 μg?kg-1[10]；丁香酚在羅非魚(yú)（）復(fù)蘇96 h后殘留量分別為（3.98±0.14）?（4.35±0.15）μg?kg-1[17]。

在消除過(guò)程中石斑魚(yú)的肌肉、肝臟喹哪啶殘留量均出現(xiàn)下降又上升的反復(fù)循環(huán)現(xiàn)象。這說(shuō)明即使在不麻醉情況下，喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)也會(huì)出現(xiàn)再吸收的情況，這是屬于魚(yú)體“自給給藥”的過(guò)程。這可能是因?yàn)樵陂L(zhǎng)時(shí)間麻醉過(guò)程中，喹哪啶隨著血液分布到石斑魚(yú)的各個(gè)組織中，且已與蛋白質(zhì)充分結(jié)合成結(jié)合型的喹哪啶，故在石斑魚(yú)體內(nèi)形成隱形藥庫(kù)[7]，且石斑魚(yú)體內(nèi)又同時(shí)存在肝腸循環(huán)、胃腸循環(huán)等作用，導(dǎo)致喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟出現(xiàn)再吸收的情況，由此形成殘留量先下降又上升的反復(fù)循環(huán)現(xiàn)象。劉海新等在研究斜帶髭鯛（）體內(nèi)丁香酚消除規(guī)律[7]以及其他獸藥[18-19]殘留消除規(guī)律研究中也發(fā)現(xiàn)過(guò)類(lèi)似的消除中“自給給藥”的現(xiàn)象。

3.4 喹哪啶在石斑魚(yú)組織中殘留消除參數(shù)分析

在復(fù)蘇消除10 h時(shí)，喹哪啶在石斑魚(yú)肝臟的峰值max達(dá)81.54 μg?g-1，遠(yuǎn)高于60 h MS-222在大菱鲆肝臟中的殘留量67.9 μg?g-1[10]。說(shuō)明喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟中吸收迅速。消除半衰期（1/2）?消除率（CL）是體現(xiàn)藥物在動(dòng)物體內(nèi)消除特征的兩個(gè)重要參數(shù)[22]。喹哪啶在石斑魚(yú)肌肉和肝臟內(nèi)的CL分別為0.004 g?h-1?g-1和0.010 g?h-1?g-1；在肌肉中的消除半衰期（1/2β）為66.75 h，在肝臟中的1/2β為37.57 h。而Xue等[23]研究MS-222在鱸中殘留消除規(guī)律中發(fā)現(xiàn)，MS-222在鱸肌肉中的消除半衰期分別為8.72 h和7.15 h；孫偉紅等[11]發(fā)現(xiàn)大菱鲆的肌肉和肝臟組織中MS-222的消除半衰期分別為13.14 h和14.15 h?？梢?jiàn)，相比其他漁用麻醉劑，喹哪啶的消除率低，消除半衰期長(zhǎng)，消除效果緩慢。AUC(0-t)是藥物利用度的主要指標(biāo)因素，它主要是反映藥物在生物體內(nèi)被吸收的總量[24]。喹哪啶在石斑魚(yú)的肌肉中AUC(0-t)為1 030.11 h?μg?g-1，在肝臟中AUC(0-t)為2 796.11 h?μg?g-1，肝臟中AUC(0-t)是肌肉的2.7倍。這表明喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)藥物利用度較高，能對(duì)石斑魚(yú)起到較好的麻醉作用。

4 結(jié)論

珍珠龍膽石斑魚(yú)肌肉和肝臟對(duì)喹哪啶吸收迅速，殘留量高，在肝臟中最大殘留量max為81.54 μg?g-1，肌肉中最大殘留量max為31.95 μg?g-1。但喹哪啶在石斑魚(yú)體內(nèi)消除速率低，消除半衰期長(zhǎng)，消除緩慢。石斑魚(yú)肌肉對(duì)喹哪啶的消除速率CL為0.004 g? h-1?g-1，肝臟的為0.010 g?h-1?g-1，在肌肉中的消除半衰期（1/2β）為66.75 h；在肝臟中的消除半衰期（1/2β）為37.57 h。

[1] 朱乾峰. 珍珠龍膽石斑魚(yú)低溫?；钸\(yùn)輸技術(shù)研究[D]. 湛江: 廣東海洋大學(xué), 2018.

[2] 李思發(fā). 魚(yú)類(lèi)麻醉劑[J]. 淡水漁業(yè), 1988, 18(1): 22-23.

[3] 李曉璐, 劉妍, 淮亞紅, 等. 活體運(yùn)輸過(guò)程中冰片麻醉劑與MS-222對(duì)草魚(yú)麻醉效果的對(duì)比研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2017, 33(6): 214-221.

[4] COOKE S J, SUSKI C D, OSTRAND K G, et al. Behavioral and physiological assessment of low concentrations of clove oil anaesthetic for handling and transporting largemouth bass ()[J]. Aquaculture, 2004, 239(1/2/3/4): 509-529.

[5] 張志明, 胡盼, 姜志強(qiáng), 等. 丁香酚對(duì)錦鯉麻醉效果的研究[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2014, 33(1): 40-45.

[6] 李寧, 白嬋, 熊光權(quán), 等. 丁香酚和三卡因甲磺酸鹽在大口黑鱸中代謝殘留的比較[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2020, 36(3): 56-64.

[7] 劉海新, 余穎, 羅方方, 等. 丁香酚在斜帶髭鯛體內(nèi)蓄積與消除規(guī)律及休藥期[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2020, 40(1): 19-28.

[8] 劉偉東. 大菱鲆()保活的基礎(chǔ)研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2009.

[9] HINTON M J, LOYACANO H A J R. Efficacy of quinaldine and MS-222 on American eel[J]. Proceedings of the Annual Meeting - World Mariculture Society, 2009, 9(1/2/3/4): 647-652.

[10] 孫偉紅, 趙東豪, 付樹(shù)林, 等. MS-222對(duì)大菱鲆麻醉效果及殘留消除規(guī)律研究[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2015, 6(11): 4578-4583.

[11] 彭勤, 黃和, 趙子科. 丁香酚麻醉劑在凡納濱對(duì)蝦中殘留消除的研究[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2018, 38(5): 64-70.

[12] 邢麗紅. 阿維菌素在鱸魚(yú)組織中的富集消除規(guī)律研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2008.

[13] 彭勤. 對(duì)蝦和鱸魚(yú)中丁香酚麻醉劑檢測(cè)及殘留自消除規(guī)律研究[D]. 湛江: 廣東海洋大學(xué). 2018.

[14] 袁國(guó)鋒. 氟苯尼考在草魚(yú)體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究[D]. 蘇州: 蘇州大學(xué), 2012.

[15] 紅艷, 郭嬌嬌, 楊虎, 等. 氟苯尼考在鱘魚(yú)體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2011, 30(7): 373-377.

[16] 方曉磊. 青石斑魚(yú)中丁香酚的殘留消除特征研究[D]. 舟山: 浙江海洋大學(xué), 2017.

[17] 孫宇航, 王綠洲, 李鋒剛. 丁香酚在羅非魚(yú)體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào), 2018, 45(4): 218-222.

[18] 索紋紋. 水產(chǎn)品中氯硝柳胺殘留量分析方法的建立及消除規(guī)律研究[D]. 廣州：華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

[19] 余培建. 藥浴給藥恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物在歐洲鰻鱺體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J]. 福建水產(chǎn), 2007, (4): 38-43.

[20] 黃向麗. 草魚(yú)體內(nèi)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑的殘留和消除規(guī)律研究[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2009.

[21] 孫曉旺, 陳永平, 李彤, 等. MS-222對(duì)半滑舌鰨的麻醉效果及體內(nèi)消除規(guī)律研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào), 2017, 44(2): 87-90.

[22] 陳永平, 韓現(xiàn)芹, 陳建, 等. MS-222在草魚(yú)?花鱸?鯽魚(yú)組織中的殘留與消除[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2019, 38(4): 527-532.

[23] XUE Y J, CHANG C C, LAI J M, et al. Determining the tranquilization dose and residue of tricaine methanesulfonate (MS-222) in sea basstissue[J]. Fisheries Science, 2017, 83, 625-633.

[24] 焦亞琴. 丁香酚在鯉體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究[D]. 貴州: 貴州大學(xué), 2017.

Residue and Elimination of Quinalidine in Pearl Gentian Grouper

XU Shan-lang1,2,3, HUANG He1,2,3,4, GAO Ping5, CHEN Ri-meng5, ZENG Dan-dan5, CHEN Ying-shou5

（1.,// 2.// 3.// 4.,524088,; 5.,524022,）

【】To provide a reference for the safe use of quinaldine anesthetics and the formulation of its withdrawal period, the residue and elimination of quinaldine in pearl gentian grouper（♀×♂）tissues was studied.【】Grouper were revived in seawater for 120 hours after anesthetized for 24 hours in 10 mg?L-1quinaldine.During the 24 h anesthesia period, the quinaldine level in the muscle and liver of grouper was measured for every 2 h by GC-MS,an attemp to study the residual rule of quinalidine in pearl gentian grouper tissues.Similarly during the 120-hour reviving,the elimination rule of quinalidine in pearl gentian grouper was studied by regularly measuring the content of quinalidine in its muscle and liver.【】The residual quinalidine in pearl gentian grouper liver and muscle was quite high, among which the maximum residual quinaldine in the livermaxwas 81.54 μg?g-1, and that in the musclemaxwas 31.95 μg?g-1. The residues and elimination of quinalidine in pearl gentian grouper conformed to the first-level elimination two-compartment model. After being revived and eliminated for 120 h, the residual quinaldine in the liver was 2.54 μg?g-1, that of the muscle was 1.36 μg?g-1. The elimination rates CL of quinaldine in muscle and liver were 0.004 and 0.010 g?h-1?g-1respectively. The elimination half-life of that in compartment (1/2β) of muscle was 66.75 h, and the1/2βof liver was 37.57 h. Compare with eugenol and MS-222, the elimination rate was slow and the elimination half-life was long. The resulted indicate that the elimination effect was not ideal.

quinalidine; pearl gentian grouper; residues; elimination

S985.1+9

A

1673-9159（2021）06-0018-07

10.3969/j.issn.1673-9159.2021.06.003

徐閃浪，黃和，高平，等. 喹哪啶在珍珠龍膽石斑魚(yú)體內(nèi)的殘留消除規(guī)律[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，41（6）：18-24.

2021-06-08

“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng) (2019YFD0901605)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目( 2014A020208121) ；市場(chǎng)監(jiān)管總局科技計(jì)劃資助（2020MK081）；湛江市非資助科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(2020B01476)

徐閃浪，女（1995―），碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：zj19806787501@163.com

黃和，男（1962―），教授，研究方向?yàn)樗a(chǎn)食品質(zhì)量與安全控制。E-mail:zjhahe@163.com；

高平，男（1981―），碩士，高級(jí)工程師，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)。E-mail:gaoyang2008694@126.com

（責(zé)任編輯：劉朏）