菊花筒儲存法在生殖中心胚胎凍存管理中的應(yīng)用

李明明，熊豪森，丁媛

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)中心，河南 鄭州 450052)

胚胎冷凍保存是指將胚胎放置于-196 ℃的液氮環(huán)境中保存，使細(xì)胞新陳代謝和分裂暫時停止，從而達(dá)到長期保存的目的[1-2]。近年來，隨著體外受精-胚胎移植周期數(shù)的不斷增長，以及促排卵方案和實驗室技術(shù)的改善，加之對于生育力保存的重視、避免IVF的并發(fā)癥和一些特殊技術(shù)的需要，使得冷凍胚胎數(shù)量不斷增加[3-5]，占用各生殖中心大量的醫(yī)療資源(液氮、液氮罐、冷凍室面積等)。鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心始建于1997年，包括新老兩個院區(qū)，設(shè)立有3個培養(yǎng)室(培養(yǎng)室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，至目前已使用近百個液氮罐。隨著胚胎凍存空間的日趨飽和及編排冷凍位置的復(fù)雜化，給輔助生殖中心的實際工作帶來了一定的難題，胚胎凍存管理已經(jīng)成為生殖中心日常工作的重要組成部分[6]。在護(hù)理人力配備未增加的情況下，如何優(yōu)質(zhì)高效完善胚胎凍存管理顯得尤為重要。為解決上述問題，鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心自2016年12月4日開始引進(jìn)菊花筒代替常規(guī)鋁制支架用于裝載冷凍載桿，探討其效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心實驗室責(zé)任護(hù)士共3名，其中本科2名，碩士1名，職稱均為主管護(hù)師，工齡>9 a且熟練掌握實驗室冷凍載桿編桿原則及方法。本研究選取2016年1月5日至2021年1月26日在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心培養(yǎng)室Ⅰ所使用的液氮罐(編號28-43)中提籃為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：裝載載桿從空至滿連續(xù)使用的鋁制支架/菊花筒提籃。排除標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)整理舊液氮罐，由菊花筒替換原有鋁制支架再次使用的提籃(菊花筒內(nèi)含原來鋁制支架中的冷凍載桿)。最后符合標(biāo)準(zhǔn)的提籃共124提，其中鋁制支架占58提，菊花筒占66提。收集每提容納載桿數(shù)及平均每次編排冷凍位置時間。

1.2 儲存方法

1.2.1鋁制支架儲存法 (1)特點。借助鋁制支架加套管的儲存單元來存放載桿[7]，每一套管能放置5根左右載桿(不同患者可用不同顏色載桿區(qū)分，載桿尾端粘貼含患者信息的冷凍標(biāo)簽)。見圖1A～1B。每提籃可放置23個左右支架，見圖1C。使用前將醫(yī)用橡皮膏膠布裁剪出適當(dāng)大小，粘貼在支架頭端，用圓珠筆或中性筆在膠布上標(biāo)記支架編號(編號順序為：A1、B1、C1……X1、Y1、Z1，A2、B2、C2……X2、Y2、Z2，A3、B3、C3……X3、Y3、Z3……)。如患者凍存胚胎數(shù)較多，需使用2個或2個以上支架，可在每個支架編號后依次加入數(shù)字①、②、③……，如P355①、P355②。每提籃最終放置支架數(shù)量及每支架編號數(shù)字均不固定，前者與支架排列方向及位置相關(guān)，后者與患者胚胎形成及凍存數(shù)量相關(guān)，故不適宜提前設(shè)置EXCEL表格進(jìn)行胚胎冷凍位置編輯。(2)編排步驟。由實驗室責(zé)任護(hù)士嚴(yán)格按照鋁制支架使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行編排。①將當(dāng)日需凍胚患者基本信息(姓名、年齡、病歷號、受精方式、撿卵日期、冷凍日期、胚胎級別等)登記到胚胎冷凍保存位置本。②對患者胚胎存放位置及使用支架進(jìn)行編號，將冷凍信息(載桿數(shù)、冷凍罐號、提籃號、支架號/筒色、載桿顏色等)登記在胚胎冷凍保存位置本。③標(biāo)記鋁制支架編號。如編號為首次使用，將支架頭端粘貼橡皮膏膠布并用圓珠筆或中性筆寫上編號。如支架編號非首次使用(即液氮罐中存在粘貼橡皮膏膠布的對應(yīng)編號支架)，可直接用記號筆在支架頭端標(biāo)記編號(無需再粘貼膠布)，作為中轉(zhuǎn)支架臨時裝載載桿，待凍胚放入液氮罐對應(yīng)提籃及粘貼橡皮膏膠布的支架套管中，取出臨時支架，放入儲物筐集中擦洗后可再次使用。

A為冷凍標(biāo)簽及載桿；B為鋁制支架結(jié)構(gòu)；C為液氮罐提籃中的鋁制支架。

1.2.2菊花筒儲存法 (1)特點。菊花筒是由白色筒杯(外層)、11種不同顏色的扇環(huán)形管(中間層)和白色圓柱狀管(內(nèi)層)組成，11種不同顏色的扇環(huán)形管顏色為共同認(rèn)知的黑、綠、棕、藍(lán)、青、紫、黃、橙、粉、灰、紅，見圖2A。每個扇環(huán)形管可放置15根左右載桿(不同患者可用不同顏色載桿區(qū)分，載桿尾端粘貼含患者信息的冷凍標(biāo)簽)。每個提籃可上下放置2層菊花筒，使用時先在提籃內(nèi)放置一菊花筒，滿載后，再放另一菊花筒置于上層。防止菊花筒存放位置混淆，可在每個菊花筒啟用時，用記號筆在菊花筒最外層白色筒杯位置標(biāo)記存放位置，例如：“I-35-1-上”代表培養(yǎng)室I中35號液氮罐的第1提籃上層扇環(huán)形管位置，見圖2B～2C。實驗室人員取放載桿時，可使用持物鉗將菊花筒臨時放入可移動液氮盒內(nèi)，集中取放載桿結(jié)束后，再將菊花筒進(jìn)行歸位。因菊花筒扇環(huán)形管位置及數(shù)量固定，可將菊花筒胚胎冷凍位置制作成EXCEL表格。(2)編排步驟。由實驗室責(zé)任護(hù)士嚴(yán)格按照菊花筒使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行編排。①方法同鋁制支架儲存法。②打開菊花筒存放位置及用量EXCEL表格，根據(jù)扇環(huán)形管顏色(筒色)、載桿顏色、剩余空間數(shù)等編輯凍胚位置，同時將冷凍信息登記在胚胎冷凍保存位置本。

A為菊花筒結(jié)構(gòu)；B為菊花筒存放位置標(biāo)識；C為液氮罐提籃中的菊花筒。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1容納冷凍載桿數(shù) 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心2016年1月5日及2016年12月3日凍胚使用鋁制支架儲存法，每提所容納載桿數(shù)通過培養(yǎng)室胚胎冷凍保存位置本進(jìn)行登記。2016年12月4日至2021年1月26日使用菊花筒儲存法，在EXCEL表中設(shè)置固定格式，將每日所用載桿數(shù)填入表格，自動計算，最后將上下兩層菊花筒載桿數(shù)相加即為每提籃總數(shù)。

1.3.2編排冷凍位置時間 由負(fù)責(zé)編排冷凍位置的責(zé)任護(hù)士記錄每提籃從空至滿使用天數(shù)及每日編排冷凍位置用時，如當(dāng)日使用2個提籃盛放支架/菊花筒(先用的提籃滿載，需重新啟用另一提籃)，則將上述兩項數(shù)據(jù)均記錄在當(dāng)日編排冷凍位置較多的提籃。因每提籃使用天數(shù)不同，本研究取每提籃每日編排冷凍位置用時平均值(以下簡稱平均值)作為觀察指標(biāo)。具體過程如下。(1)鋁制支架儲存法。從責(zé)任護(hù)士開始編排當(dāng)日第1例患者冷凍信息計時，至所有患者冷凍信息編排結(jié)束及所使用鋁制支架(含粘貼橡皮膏膠布和未粘貼橡皮膏膠布兩種支架)編號標(biāo)記完為止，連續(xù)記錄至各提籃滿載。(2)菊花筒儲存法。從責(zé)任護(hù)士開始編排當(dāng)日第1例患者冷凍信息計時，至所有患者冷凍信息編排結(jié)束并在菊花筒存放位置及用量EXCEL表格登記完為止，連續(xù)記錄至各提籃滿載。(3)數(shù)據(jù)計算。每提籃每日編排冷凍位置用時總和除以每提籃使用天數(shù)為平均值，以min為單位。

2 結(jié)果

菊花筒儲存組每提載桿數(shù)多于鋁制支架儲存組，每次編排冷凍位置平均用時短于鋁制支架儲存組(P<0.05)。見表1。

表1 兩種方法每提籃容納載桿數(shù)和每次編排冷凍位置平均用時比較

3 討論

研究結(jié)果顯示，菊花筒容納載桿數(shù)約是鋁制支架的2.7倍(均滿載)。隨著體外受精-胚胎移植周期數(shù)的不斷增長，冷凍胚胎數(shù)量的增加，菊花筒儲存法在空間利用度和容納載桿數(shù)等方面優(yōu)勢日趨顯著。自2016年12月4日起，除新增液氮罐全部配備菊花筒外，本中心對舊液氮罐中已經(jīng)多次進(jìn)行胚胎凍融解凍移植的提籃，逐步使用菊花筒替換鋁制支架，即選取菊花筒下層部分扇環(huán)形管用于存放之前剩余胚胎，下層其余扇環(huán)形管以及上層全部扇環(huán)形管均可再次放置新冷凍胚胎載桿。利用菊花筒替換鋁制支架，2019—2020年新凍胚胎大部分存放在舊液氮罐中，節(jié)減了近2 a的液氮罐使用量，延緩了冷凍室面積飽和進(jìn)程。

從表1可以看出，菊花筒儲存法編排冷凍位置用時少于鋁制支架儲存法。使用鋁制支架儲存法，因每一支架容納載桿數(shù)較少(一般不超過5根)，緩存空間較小。責(zé)任護(hù)士在編排冷凍位置時，不僅要登記患者第3天冷凍胚胎個數(shù)及載桿數(shù)，還要根據(jù)第3天胚胎質(zhì)量，預(yù)測第5天或第6天可能形成囊胚數(shù)，耗時較長。另外隨著促排卵方案和實驗室技術(shù)的改進(jìn)[8-9]，很多患者凍存胚胎數(shù)較多，多數(shù)患者胚胎需使用2個或2個以上支架裝載載桿，即同一天需使用多個編號才能完成胚胎位置存放。護(hù)理人員在為每個支架粘貼橡皮膏膠布時，手工操作較多，需使用較長時間。使用菊花筒儲存法，每個扇環(huán)形管最多可容納19根載桿，緩存空間較大。編排位置時，同一扇環(huán)形管可放置多例患者的胚胎冷凍載桿，節(jié)省了護(hù)理人員頻繁尋找冷凍位置時間。另外，菊花筒是成品，首次使用前已將所需筒杯放入提籃內(nèi)，編排位置時可直接根據(jù)EXCEL表進(jìn)行編輯，無需手工操作。每筒容納載桿數(shù)、載桿顏色及剩余空間數(shù)等直觀可視。

傳統(tǒng)的鋁制支架和套管組合的方式進(jìn)行存儲時，確定罐號和提籃號后，需在整個提籃內(nèi)查找相應(yīng)支架編號，且隨著胚胎凍存時間的延長，鋁制支架頭端的橡皮膏膠布字跡會逐漸變淺，使實驗室人員在查詢或挑選胚胎時耗時較長。另外如提籃中存放支架較多，挑選胚胎時鋁制支架凹槽面容易將臨近支架帶出，給工作帶來不便。菊花筒扇環(huán)形管均勻排列于筒杯內(nèi)側(cè)并由中心白色圓柱狀管固定，各接觸面平滑且位置固定。因容納載桿數(shù)較多，同一患者凍胚均存放在相同扇環(huán)形管內(nèi)。根據(jù)詳細(xì)位置標(biāo)識，查找時可直接定位至最后一級位置，即冷凍載桿的顏色和患者信息標(biāo)識。在實際操作過程中，不僅容易查找患者胚胎，且規(guī)避帶出其他位置冷凍載桿。

綜上，相較于鋁制支架儲存法，菊花筒儲存法在空間利用和胚胎凍存管理方面有較大優(yōu)勢，可有效改善胚胎凍存空間壓力，減少液氮罐用量，節(jié)約冷凍室面積，縮短護(hù)理人員的有效工作時間，提高工作效率，在實際臨床操作中更加安全、便利，更適用于胚胎庫的管理和實現(xiàn)自動化管理。