RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP對(duì)口腔正畸治療中牙周病的診斷價(jià)值

閆利輝 陳卓 謝冰 姚海亮 張嫻 劉琳 武時(shí)謙 越楊

作者單位：鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院口腔科，河南，鄭州450000

正畸治療有助于改善患者咬合關(guān)系，促進(jìn)口腔生理功能恢復(fù)，可以幫助患者有效改善患者的牙周組織狀況，減輕患者的牙齒炎癥，增加患者牙齒的穩(wěn)定程度，改變患者牙周袋深度，使患者牙周袋變淺，提升患者的牙齒美觀度以及牙齒功能，但在正畸治療的過程中，患者的牙周組織會(huì)出現(xiàn)改變，長(zhǎng)期使用固定矯治器可能會(huì)增加牙齒清潔難度，改變口腔內(nèi)環(huán)境，導(dǎo)致菌斑大量蓄積，進(jìn)而引發(fā)患者機(jī)體自然產(chǎn)生一定程度的炎癥反應(yīng)。同時(shí)正畸治療過程中，牙周組織的炎癥愈合更為緩慢，牙周纖維、牙槽骨的改建及牙齒的移動(dòng)會(huì)加速牙周病情的發(fā)展［1-3］。相關(guān)研究顯示［4］，牙周局部微環(huán)境改變，可破壞核因子κB 受體活化因子配體（receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand，RANKL）/骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）平衡，引起牙槽骨吸收。單核細(xì)胞炎性蛋白-1α（Macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α）、胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP）均為趨化因子，在免疫炎癥反應(yīng)中起著重要作用［5-6］。本研究嘗試探討RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 在牙周病正畸治療中診斷及轉(zhuǎn)歸中的應(yīng)用價(jià)值，旨在為臨床診治提供一種新途徑。報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院口腔科2017年3月至2020年3月牙周病正畸治療患者24 例為A 組，牙周正常的30 例正畸患者作為B 組，其中女30 例，男24 例，年齡平均（22.49±1.60）歲；體質(zhì)量指數(shù)平均（20.62±1.39）kg/m2；病程平均（15.19±1.36）m；納入標(biāo)準(zhǔn)：①年滿18 周歲，口腔衛(wèi)生習(xí)慣良好，有良好的依從性；②全身狀況：營(yíng)養(yǎng)正常，無(wú)糖尿病、心臟病、血液病、心腦血管疾病、免疫缺陷、骨質(zhì)疏松等系統(tǒng)性疾病，無(wú)長(zhǎng)期用藥史，女性非妊娠期；③既往史：無(wú)正畸治療史，無(wú)頜面部外傷史，無(wú)唇腭裂病史，無(wú)夜磨牙或緊咬牙習(xí)慣；無(wú)囊腫或腫瘤病變者，無(wú)牙體和根尖周病變者，無(wú)不良修復(fù)體；④研究對(duì)象均在同一位正畸醫(yī)師處采用相同的托槽矯治器進(jìn)行正畸治療，口腔衛(wèi)生維護(hù)習(xí)慣良好；⑤其中牙周炎患者為輕、中度慢性牙周炎：根據(jù)1999年牙周疾病新分類法診斷為輕中度慢性牙周炎。穩(wěn)定期診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］：患者能良好的自我控制菌斑無(wú)≥5 mm 牙周袋，附著喪失無(wú)增加，全口探診出血陽(yáng)性位點(diǎn)在20%以下，牙松動(dòng)度無(wú)增加，無(wú)溢膿，無(wú)創(chuàng)傷等。本院倫理委員會(huì)經(jīng)審核評(píng)議同意本研究，研究對(duì)象均知情同意。

1.2 方法

兩組患者均給予基礎(chǔ)治療，保持兩組患者口腔衛(wèi)生，兩組患者均分別于正畸治療前、治療1、3、6 個(gè)月后，先評(píng)估牙齦顏色，牙周探針檢查并記錄牙周探診深度（PD）、牙齦指數(shù)（Gingival index，GI）和菌斑指數(shù)（PLI）；所有研究對(duì)象均取6 顆指數(shù)牙（16、11、26、36、31、46）的近中頰位點(diǎn)，佩戴無(wú)菌手套，常規(guī)清除齦上菌斑、軟垢，隔濕，輕柔吹干，于受試牙近中頰位點(diǎn)插入濾紙條（2 mm×10 mm），遇輕微阻力時(shí)停止，30 s 后取出，若出現(xiàn)血液和唾液污染，則棄置不用，再取。將取完齦溝液后6 根吸潮紙尖置入原離心管稱重，減去原記錄重量即為齦溝液重量，按1 g/mL 換算成體積，收集后封閉離心管，放于-70℃低溫保存，注意上述采集過程均由同一操作者獨(dú)立完成。緩沖液浸潤(rùn)齦溝液紙尖末端，12 000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，取上清液，采用上海滬震實(shí)業(yè)有限公司酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒測(cè)定齦溝液RANKL、OPG、MIP-1α、TSLP水平，將試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至10 μg/mL，取96 孔板每孔加入標(biāo)準(zhǔn)液0.1 mL，4℃條件下過夜；第2 d 加入待測(cè)樣品，5 000 r/min 離心5 min，去除濾紙條，保留上清液，37℃下孵育60 min，加入雙抗，再次孵育30 min，采用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處光密度值。并計(jì)算RANKL/OPG。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)資料以（）表示，t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗(yàn)；齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關(guān)性用Pearson 相關(guān)分析；齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對(duì)牙周病的診斷價(jià)值用受試者工作特征（ROC）曲線分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平

兩組正畸治療前、治療6 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組正畸治療1、3、6 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平呈先升高后降低趨勢(shì)，且均在正畸治療3 個(gè)月后達(dá)到最高峰（P＜0.05）；A 組正畸治療1、3 個(gè)月后RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平高于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平比較（±s）Table 1 levels of RANKL/OPG and MIP-1α、TSLP in GCF before and after orthodontic treatment in 2 groups（±s）

表1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平比較（±s）Table 1 levels of RANKL/OPG and MIP-1α、TSLP in GCF before and after orthodontic treatment in 2 groups（±s）

時(shí)間RANKL/OPG MIP-1α（ng/μL）TSLP（ng/mL）組別A 組B 組t 值P 值A(chǔ) 組B 組t 值P 值A(chǔ) 組B 組t 值P 值n 24 30 24 30 24 30正畸治療前0.57±0.10 0.55±0.12 0.654 0.516 4.76±0.71 4.52±0.66 1.284 0.205 4.04±0.67 3.85±0.62 1.080 0.285正畸治療1 個(gè)月后0.82±0.15 0.68±0.13 3.672 0.001 12.24±2.05 8.73±1.76 6.768＜0.001 6.29±1.28 5.11±1.14 3.579 0.001正畸治療3 個(gè)月后0.96±0.24 0.73±0.18 4.025＜0.001 20.16±4.27 13.29±3.08 6.864＜0.001 8.56±2.34 6.05±1.59 4.682＜0.001正畸治療6 個(gè)月后0.63±0.16 0.60±0.12 0.787 0.435 9.37±2.24 8.81±2.03 0.962 0.305 5.32±0.94 5.01±0.88 1.248 0.218

2.2 兩組正畸治療前后PLI、GI

兩組正畸治療前、治療6 個(gè)月后PLI、GI 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組正畸治療1、3、6 個(gè)月后PLI、GI 呈先升高后降低趨勢(shì)，且均在正畸治療3 個(gè)月后達(dá)到最高峰（P＜0.05）；A 組正畸治療1、3個(gè)月后PLI、GI 高于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組正畸治療前后PLI、GI 比較（±s）Table 2 Comparison of PLI and GI between 2 groups before and after orthodontic treatment（±s）

指標(biāo)PLI GI組別A 組B 組t 值P 值A(chǔ) 組B 組t 值P 值n 24 30 24 30正畸治療前1.03±0.15 1.01±0.13 0.525 0.602 0.40±0.13 0.38±0.12 0.587 0.560正畸治療1 個(gè)月后1.48±0.20 1.31±0.17 3.376 0.001 0.75±0.16 0.60±0.14 3.672 0.001正畸治療3 個(gè)月后2.06±0.41 1.53±0.28 5.632＜0.001 1.04±0.26 0.81±0.22 3.521 0.001正畸治療6 個(gè)月后1.22±0.23 1.17±0.19 0.875 0.386 0.57±0.15 0.53±0.11 1.130 0.264

2.3 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關(guān)性

因兩組齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP及PLI、GI 均于正畸治療3 個(gè)月后達(dá)到最高峰，故選擇該時(shí)間點(diǎn)做相關(guān)性。Pearson 相關(guān)性分析，正畸治療3 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關(guān)性Table 3 RANKL/OPG and MIP-1 in GCF α、Correlation of TSLP with PLI and GI

2.4 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對(duì)牙周病的診斷價(jià)值

因兩組齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP均于正畸治療3 個(gè)月后達(dá)到最高峰，故選擇該時(shí)間點(diǎn)做診斷。ROC 曲線顯示，正畸治療3 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 診斷牙周病的曲線下面積（AUC）分別為0.735、0.871、0.824，聯(lián)合診斷的AUC 為0.907（P＜0.05）。見圖1。

圖1 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對(duì)牙周病的診斷價(jià)值Figure 1 Expression of RANKL/OPG and MIP-1 in gingival crevicular fluid α、Diagnostic value of TSLP level in periodontal disease

3 討論

RANKL、OPG 均為牙周炎牙槽骨吸收的重要調(diào)節(jié)因子，有學(xué)者指出，二者比值是評(píng)估慢性牙周炎牙槽骨吸收嚴(yán)重程度的客觀指標(biāo)之一［8］。本研究數(shù)據(jù)表明，兩組正畸治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG 均較治療前升高，但牙周病患者升高幅度高于正常正畸治療患者，結(jié)合黃俊紅等［9］、張瑞林等［10］研究考慮機(jī)制可能在于牙周病可加重牙周組織損傷程度，降低新骨形成能力，增加骨吸收活性，從而表現(xiàn)為RANKL/OPG 升高。另外，因兩組齦溝液中RANKL/OPG 于正畸治療3 個(gè)月后達(dá)到最高峰，故選擇此時(shí)間點(diǎn)分析上述指標(biāo)對(duì)牙周病的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示，當(dāng)截?cái)嘀翟O(shè)定為0.87 時(shí)，正畸治療3 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG 單一診斷牙周病的敏感度為80.00%，提示齦溝液中RANKL/OPG 具有成為診斷牙周病的敏感指標(biāo)。

MIP-1α 是炎癥介質(zhì)之一，可趨化單核巨噬細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞，并可穿透血管內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)合特異性受體，刺激炎性因子產(chǎn)生，發(fā)揮促炎作用［11］。TSLP 為一類白介素17樣因子，主要衍生于上皮細(xì)胞，通過TSLP 受體，可刺激樹突狀細(xì)胞表達(dá)，調(diào)控促炎因子水平，促使Th細(xì)胞亞群分化［12］。本研究通過對(duì)比研究可知，牙周病患者正畸治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后齦溝液中MIP-1α、TSLP水平均高于正常正畸治療患者，結(jié)合黃懷榮等［13］、林浩［14］研究推測(cè)這可能是由于正畸治療可引起牙周病原菌大量堆積，刺激牙齦上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及炎癥期牙齦中肥大細(xì)胞，從而造成MIP-1α、TSLP 異常分泌，間接誘導(dǎo)CD4+T 細(xì)胞前體轉(zhuǎn)化，促進(jìn)白三烯、花生四烯酸、白介素等炎性因子釋放，進(jìn)而介導(dǎo)牙周炎性免疫反應(yīng)。PLI、GI是評(píng)估牙周炎病情程度的重要牙周臨床指標(biāo)［15］。本研究結(jié)果顯示，正畸治療3個(gè)月后齦溝液中MIP-1α、TSLP 與牙周病患者PLI、GI 均存在正相關(guān)關(guān)系，佐證了齦溝液中MIP-1α、TSLP對(duì)判斷牙周病炎癥程度亦具有一定價(jià)值。然而正畸治療3 個(gè)月后齦溝液中MIP-1α、TSLP 單一診斷牙周病敏感度較低，存在一定局限性，故本研究通過繪制聯(lián)合曲線發(fā)現(xiàn)，正畸治療3 個(gè)月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP聯(lián)合診斷牙周病AUC＞0.900。提示共同檢測(cè)齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 有望為牙周病提供一種有效診斷手段，可幫助臨床醫(yī)生合理調(diào)整治療策略。

綜上所述，齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP聯(lián)合可為臨床診斷口腔正畸治療中牙周病提供科學(xué)指導(dǎo)。但本研究樣本量小，且受年齡、力的作用點(diǎn)等因素影響，不用個(gè)體齦溝液中細(xì)胞因子水平差較大，研究結(jié)果可能存在一定偏移，今后需擴(kuò)大樣本量，開展分子生物學(xué)及動(dòng)物體內(nèi)研究，進(jìn)一步論證本研究結(jié)果。