一例水貂流感病毒與綠膿桿菌混合感染的診斷

●趙會光（安丘市畜牧業(yè)發(fā)展中心 山東 安丘 262100）

1 臨床癥狀與剖檢病變

主訴水貂發(fā)病半個月左右，有尖叫、咬籠等神經(jīng)癥狀，死亡水貂口鼻流血。經(jīng)調(diào)查，該養(yǎng)殖場的水貂在分窩后正常免疫水貂腸炎與犬瘟熱疫苗，未免疫肺炎疫苗；水貂飼料中包括未熟制的鴨架、鴨腸等，且發(fā)病之前更換過飼料。

病死水貂外觀口鼻處有鮮紅色血液，營養(yǎng)狀況良好。剖檢發(fā)現(xiàn)：肺嚴(yán)重出血、水腫，呈黑紅色，氣管環(huán)出血；脾臟腫大，有出血斑；肝臟腫大、質(zhì)脆；腎腫大出血；腦膜出血。部分水貂胃底有潰瘍灶，腸道黏膜出血。

2 檢測方法

2.1 細(xì)菌分離鑒定

取病死水貂的肺臟及肝臟組織，接種于TSA（胰蛋白胨大豆瓊脂）平板，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h。

取單菌落接種于PDP（綠膿菌素測定培養(yǎng)基）斜面，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察斜面有無色素，在試管內(nèi)加入氯仿提取液，然后加濃度為1moL/L的鹽酸1mL，振搖后靜置并觀察顏色變化。同時取單菌落過夜搖菌后，以通用引物[1]進(jìn)行16S rDNA的PCR擴(kuò)增，預(yù)期擴(kuò)增片段大小為1 428bp，將擴(kuò)增產(chǎn)物送至測序公司測序，測序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行BLAST比對。

2.2 可疑病毒病檢測

采集病死水貂的肺、肝、腦、淋巴結(jié)等組織，用組織研磨儀研磨后，12 000rpm/min離心5min，取上清液按照核酸提取試劑盒的操作說明提取核酸。參照文獻(xiàn)[2]及國家標(biāo)準(zhǔn)《犬瘟熱診斷技術(shù)》（GB/T 27532-2011）、國家標(biāo)準(zhǔn)《犬細(xì)小病毒病診斷技術(shù)》（GB/T 27533-2011），使用特異性檢測引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分別檢測流感病毒、犬瘟熱病毒、水貂腸炎病毒，預(yù)期擴(kuò)增片段大小分別為229bp、455bp、609bp。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌分離鑒定

病死水貂肺臟和肝臟組織均在TSA平板上分離得到中等大小、圓形、黃綠色、有特殊芳香的菌落，綠膿菌素測定試驗為陽性（鹽酸溶液呈粉紅色）。16S rDNA擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測序比對發(fā)現(xiàn)，該分離菌為銅綠假單胞菌，又稱綠膿桿菌。

3.2 可疑病毒病檢測

經(jīng)PCR檢測，流感病毒擴(kuò)增得到約為229bp的目的條帶，犬瘟熱病毒及水貂腸炎病毒無目的條帶。

4 討論

綜合臨床癥狀、剖檢病變及實驗室檢測結(jié)果，確診該病為流感病毒與綠膿桿菌混合感染所致，經(jīng)更換飼料、給予抗菌治療一段時間后，該病得到基本控制。當(dāng)前水貂養(yǎng)殖行業(yè)困頓，囿于成本壓力，該養(yǎng)殖場水貂的養(yǎng)殖環(huán)境和飼料來源都沒有得到很好的控制。流感病毒在養(yǎng)殖水禽（鴨、鵝）中多為隱性感染，未經(jīng)熟制消毒，則很可能通過飼料感染水貂。若此時養(yǎng)殖場環(huán)境高溫、高濕，流感病毒與綠膿桿菌二者共同作用，加重病情，就會造成更嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

近年來研究表明單純的綠膿桿菌感染很難導(dǎo)致水貂出血性肺炎[3]，嚴(yán)重的出血性肺炎伴隨神經(jīng)癥狀往往都是混合感染。出血性肺炎在臨床上之所以難治、屢治不愈，有兩個方面的原因：一是抗生素濫用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥嚴(yán)重，這需要我們在給藥前針對分離菌株做藥敏試驗，合理選擇藥物，并遵守用藥劑量和療程；另一方面就是由于混合感染的存在，往往易只發(fā)現(xiàn)一種而忽略了其他致病因素，因此在診斷和治療過程中應(yīng)該特別注意考慮混合感染。