葉雨?yáng)|
(廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院,廣西 柳州,545005)
結(jié)核病屬于臨床較為常見(jiàn)的傳染性疾病,主要由于機(jī)體感染致病菌(結(jié)核分枝桿菌)所致,可累及至機(jī)體多個(gè)臟器,其中以肺部感染結(jié)核最為多見(jiàn)[1]。肺結(jié)核患者主要臨床表現(xiàn)包括咳嗽、咳痰、低熱(午后顯著)、咯血、胸痛及胸悶或呼吸困難等[2]。結(jié)核病是由T細(xì)胞介導(dǎo)的保護(hù)性免疫反應(yīng)與病理學(xué)免疫反應(yīng)調(diào)控失衡所引發(fā)的免疫疾病,人體免疫功能特別是細(xì)胞免疫狀態(tài)對(duì)本病發(fā)生起到一定誘導(dǎo)作用,并在病程進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[3]。故通過(guò)檢測(cè)結(jié)核感染T細(xì)胞變化情況可為臨床疾病診斷提供一定依據(jù)。本研究對(duì)我院肺結(jié)核患者開(kāi)展結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè),并探討其臨床診斷價(jià)值,內(nèi)容如下。
1.1 一般資料 選取2019年9月~2020年9月我院115例疑似肺結(jié)核患者與98例非結(jié)核患者;甲組男女比例68:47,年齡18~65歲,均值(41.54±3.65)歲;乙組男女比例58:40,年齡 19~64歲,均值(41.56±3.62)歲,以上一般資料(P>0.05),此項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]:均符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn);所有受檢者均知情同意參與本次實(shí)驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn):檢測(cè)不合格者;合并其他病毒性感染者;入組前應(yīng)用免疫抑制劑者。
1.2 方法 所有受檢者均接受痰涂片抗酸染色鏡檢:抗酸桿菌染色嚴(yán)格依據(jù)《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》開(kāi)展相關(guān)操作,試劑由珠海貝索公司提供。隨后開(kāi)展T-SPOT.TB檢測(cè):嚴(yán)格按照購(gòu)自廣州迪澳醫(yī)療科技有限公司的T-SPOT.TB試劑盒相關(guān)說(shuō)明書(shū)執(zhí)行規(guī)范操作,測(cè)定方法為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法。采集受檢者靜脈血4mL,室溫(18~22℃)放置4h內(nèi)完成分離,標(biāo)本內(nèi)加入生理鹽水混勻后再加至淋巴細(xì)胞分離液內(nèi),于22℃、1800g離心20min后分離得到單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs);提取PBMCs細(xì)胞層,使用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)齊至12mL進(jìn)行10min離心,棄上清、再補(bǔ)齊至5mL經(jīng)吹打沉淀重懸后開(kāi)展10min離心,棄上清、加入1mL無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重懸細(xì)胞沉淀后,取10μL細(xì)胞懸液加入0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液中,混勻后取混合液加入血球計(jì)數(shù)板,顯微鏡下計(jì)數(shù);無(wú)血清培養(yǎng)基配置至少400μL的細(xì)胞懸液(濃度為2.5×106個(gè)/ml)待用。
1.3 觀察指標(biāo) (1)T-SPOT.TB陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):參照試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)抗原A和(或)抗原B孔內(nèi)反應(yīng)結(jié)果實(shí)施判定,①陰性對(duì)照孔沒(méi)有或不超過(guò)10個(gè)斑點(diǎn)而陽(yáng)性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)20個(gè);②陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0~5時(shí)且(抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù))-(陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù))≥6;③陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為6~10個(gè)時(shí),待測(cè)樣本應(yīng)為抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)≥2倍的陰性對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù),符合以上標(biāo)準(zhǔn)判斷為陽(yáng)性,即有反應(yīng)性[5]。其中6~10個(gè)斑點(diǎn)數(shù)表示輕度陽(yáng)性、11~50個(gè)表示明顯陽(yáng)性、>50個(gè)表示超強(qiáng)陽(yáng)性。(2)敏感度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)*百分比;特異性=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)*百分比;診斷準(zhǔn)確率=(真陽(yáng)性+真陰性)*百分比[6]。
1.4 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0計(jì)算數(shù)據(jù),[n(%)]表示計(jì)數(shù)資料,行χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有意義。
2.1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果比較 甲組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)A抗原及B抗原陽(yáng)性率顯著高于乙組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),如表1所示:
表1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]
2.2 兩種檢驗(yàn)方式與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì) 痰涂片檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)得出真陽(yáng)性81例,假陽(yáng)性6例,真陰性8例,假陰性20例;T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)得出真陽(yáng)性93例,假陽(yáng)性1例,真陰性13例,假陰性8例,如表2、3所示:
表2 痰涂片檢查與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對(duì)結(jié)果
表3 T-SPOT.TB檢測(cè)與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對(duì)結(jié)果
2.3 不同檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值 T-SPOT.TB檢測(cè)的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值均高于痰涂片檢查,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),如表4所示:
表4 兩種檢驗(yàn)方式的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值比較[n(%)]
既往采用的抗酸染色盡管具有良好的特異度,但其陽(yáng)性率偏低。臨床所有肺結(jié)核患病群體中涂陰肺結(jié)核占比可達(dá)40%-60%,如何早期明確診斷、及時(shí)對(duì)涂陰肺結(jié)核開(kāi)展針對(duì)性治療成為目前控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵[7]。穿刺病理組織檢測(cè)存在有創(chuàng)性、患者耐受性差、病變部位等問(wèn)題,導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到一定限制;且與其他肉芽腫病變的鑒別難度也較大。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)存在耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)的弊端,例如羅氏培養(yǎng)至少需要8周才可明確標(biāo)本是否為陽(yáng)性,嚴(yán)重影響臨床治療的開(kāi)展。故積極探索更為科學(xué)且高效的檢查方法以明確臨床診斷顯得尤為必要。
研究指出,肺結(jié)核患者疾病發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體T淋巴細(xì)胞比例密切相關(guān);而淋巴細(xì)胞比例失衡可受到多種因素影響,其中激素及免疫抑制藥物應(yīng)用對(duì)機(jī)體T細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用,從而破壞外周血T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡[8]。石衛(wèi)武[9]等學(xué)者報(bào)道中,T-SPOT.TB在活動(dòng)性結(jié)核病診斷中具有良好的輔助作用,結(jié)核病陽(yáng)性率(85.71%)、疑似結(jié)核病陽(yáng)性率(72.31%)及非結(jié)核病陽(yáng)性率(28.63%)存在明顯差異。T-SPOT.TB檢測(cè)開(kāi)展期間結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激,促使其大量釋放IFN-T,可重點(diǎn)檢測(cè)活細(xì)胞的功能;且刺激原ESAT-6、CFP-IO抗原基因均嚴(yán)格限制于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群及4種非結(jié)核分枝桿菌,一定程度上保證試驗(yàn)的特異度。本研究結(jié)果顯示,T-SPOT.TB檢測(cè)的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值均顯著高于痰涂片檢查,分析原因可能為T(mén)-SPOT.TB檢測(cè)主要通過(guò)刺激致敏淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ,與微孔板上的IFN-γ抗體結(jié)合后借助顯色反應(yīng)后進(jìn)行結(jié)果判定;且該試驗(yàn)不易受到外界因素(如T淋巴細(xì)胞數(shù)量、非結(jié)核桿菌及卡介苗)的影響、靈敏度較高。本研究中,甲組A抗原及B抗原陽(yáng)性率均高于乙組,充分說(shuō)明T-SPOT.TB檢測(cè)能夠有效區(qū)分肺結(jié)核與非結(jié)核患者。此外,還有學(xué)者發(fā)現(xiàn),高斑點(diǎn)數(shù)時(shí)A抗原陽(yáng)性率相對(duì)較高,其認(rèn)為A抗原斑點(diǎn)數(shù)可能與結(jié)核活動(dòng)性存在相關(guān)性[10]。不過(guò)值得注意的是,T-SPOT.TB檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核病的敏感度及特異度可能受抗酸染色及培養(yǎng)結(jié)果、結(jié)核病灶部位、陳舊性結(jié)核病灶、非結(jié)核分枝桿菌感染等因素影響,故臨床醫(yī)師診斷仍需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析。
綜上所述,T-SPOT.TB檢測(cè)在臨床應(yīng)用后獲得滿(mǎn)意效果,不僅能夠顯著提高肺結(jié)核患者的陽(yáng)性檢出率,且具有較高的敏感度,特異性良好,從而有助于臨床診斷準(zhǔn)確率提高,值得臨床采納與推廣。