酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率以及養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響

宋紫菱 楊烜懿,2* 趙旭民 王光輝 遲淑艷,2,4**

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，湛江 524088；2.南方海洋科學(xué)與工程廣東省實驗室(湛江)，湛江 524013；3.宜昌華太生物科技有限公司，宜昌 443500；4.廣東省水產(chǎn)動物精準(zhǔn)營養(yǎng)高效飼料工程研究中心，湛江 524088)

中國是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)大國，2019年全國水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量近5 080萬t，占水產(chǎn)品總產(chǎn)量的78%[1]。魚粉因其蛋白質(zhì)含量高、抗?fàn)I養(yǎng)因子少、富含動物生長所必需的氨基酸且易被消化吸收，一直是水產(chǎn)養(yǎng)殖動物飼料中不可或缺的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源[2]。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展以及魚粉資源量的限制，魚粉價格不斷攀升，給飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)帶來了沉重的成本壓力[3]。非魚粉蛋白質(zhì)源的使用可降低魚粉的壓力，但同時也產(chǎn)生了消化利用率低的問題，豆粕、棉籽粕、菜籽粕、花生粕等植物蛋白質(zhì)源在水產(chǎn)飼料中消化利用率相對偏低[4]，抗?fàn)I養(yǎng)因子、氨基酸組成不平衡和適口性差是導(dǎo)致水產(chǎn)養(yǎng)殖動物對植物蛋白質(zhì)源消化利用率低的主要因素[5-6]。此外，魚類對飼料中的蛋白質(zhì)無法完全消化吸收，在一定程度上會造成氮的流失。飼料殘餌的溶失、水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的排泄物增大了水體中氮、磷含量，加速了養(yǎng)殖水體的惡化，影響?zhàn)B殖環(huán)境[7-8]。因而，緩解魚粉資源短缺帶來的成本壓力，改善養(yǎng)殖水體污染，尋找符合水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)綠色、健康可持續(xù)發(fā)展需求的新型蛋白質(zhì)源迫在眉睫。

動物蛋白質(zhì)來源廣泛、抗?fàn)I養(yǎng)因子少、蛋白質(zhì)含量高、碳水化合物含量低且氨基酸含量豐富，是水產(chǎn)飼料的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源。其中，雞肉粉蛋白質(zhì)含量高，氨基酸組成平衡，利用率高[9]。適量雞肉粉可替代一定比例的魚粉而不影響卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)[9-10]、異育銀鯽(CarassiusauratusgibelioBloch)[11]、馬拉巴石斑魚(Epinephelusmalabricus)[12]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[13-14]、尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)[15]和北美鯧(Trachinotuscarolinus)[16]等的生長。與雞肉粉相比，酶解雞肉粉(enzyme-digested poultry by-product meal，EP)中富含小肽和游離氨基酸，可以直接被機體吸收利用，提高蛋白質(zhì)的消化吸收效率，具有改善動物生長性能的作用[17-18]。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

在基礎(chǔ)飼料配方的基礎(chǔ)上降低魚粉和豆粕的添加量，逐量添加酶解雞肉粉，配制酶解雞肉粉添加量分別為0(EP0組，作為對照組)、3%(EP3組)、6%(EP6組)、9%(EP9組)、12%(EP12組)、15%(EP15組)和18%(EP18組)的7種等氮等脂試驗飼料(表1)。飼料原料經(jīng)粉碎后過60目篩，按表1稱取，經(jīng)V型立式混合機(JS-14S型，浙江正泰電器股份有限公司)充分混勻，用雙螺桿膨化機(TSE65型，北京現(xiàn)代洋工機械科技發(fā)展有限公司)加工成直徑為3.00 mm的顆粒狀飼料，晾干后于-20 ℃冰箱中儲存?zhèn)溆?。魚粉和酶解雞肉粉的常規(guī)養(yǎng)分含量見表2，酶解雞肉粉的肽譜見圖1。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

續(xù)表1項目Items酶解雞肉粉添加量EPaddition/%0369121518植酸酶Phytase0.100.300.300.300.300.300.30微晶纖維素Microcrystallinecellulose0.680.070.681.281.902.503.11合計Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平Nutrientlevels2)水分Moisture10.2710.5310.2510.7410.0410.2910.22粗蛋白質(zhì)CP49.8249.4149.6550.0450.1349.9150.03粗脂肪EE10.4810.3510.5910.5110.6910.7410.90粗灰分Ash9.399.239.038.738.428.127.82

表2 魚粉和酶解雞肉粉常規(guī)養(yǎng)分含量(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Proximate nutrient contents of fish meal and EP (air-dry basis) %

圖1 酶解雞肉粉的肽譜Fig.1 EP peptide mapping

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

試驗用珍珠龍膽石斑魚購自廣東湛江東南碼頭珍珠龍膽石斑魚苗場，在湛江海洋高新科技園水泥池中暫養(yǎng)馴化2周，期間投喂商業(yè)飼料(廣東粵海飼料集團股份有限公司產(chǎn)品，粗蛋白質(zhì)含量為50.0%)。養(yǎng)殖試驗在室內(nèi)海水魚靜水養(yǎng)殖系統(tǒng)(300 L玻璃鋼養(yǎng)殖桶)中進行。試驗開始前禁飼24 h，之后挑選健康、規(guī)格一致的珍珠龍膽石斑魚[初始體重為(7.51±0.02)g]630尾，隨機分為7組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30尾，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于玻璃鋼養(yǎng)殖桶中。每天08:00和17:00表觀飽食投喂試驗飼料，根據(jù)攝食情況適當(dāng)調(diào)整投喂量，養(yǎng)殖期為8周。在試驗期間，養(yǎng)殖水溫為30～32 ℃，pH為6.8～7.2，氨氮含量不高于0.2 mg/L，溶解氧含量不低于5.0 mg/L。

1.3 樣本采集與指標(biāo)測定

1.3.1 營養(yǎng)成分含量測定

飼料原料、試驗飼料和糞便中養(yǎng)分含量測定參照AOAC(1995)[20]的方法。其中，水分含量采用105 ℃烘干失重法測定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法(KjeltecTM8400，瑞典)測定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測定，粗灰分含量采用箱式電阻爐550 ℃灼燒恒重法測定，鈣和磷含量使用ICP-OES電感耦合等離子光譜儀(美國鉑金埃爾默，Perkin Elmer Optima 8000)測定。

1.3.2 生長性能測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束，禁飼24 h后稱重、計數(shù)，用于計算成活率(SR)、增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、飼料系數(shù)(FCR)、蛋白質(zhì)效率(PER)和攝食率(FR)。

SR(%)=100×末尾數(shù)/初尾數(shù)；WGR(%)=100×(末均重-初均重)/初均重；SGR(%/d)=100×(ln末均重-ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù)；FCR=攝食飼料干重/(末均重-初均重)；PER=(末均重-初均重)/(飼料攝食量×粗蛋白質(zhì)含量)；FR(%/d)=100×投飼總量/[(初均重+末均重)×飼養(yǎng)天數(shù)/2]；

1.3.3 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率測定

從養(yǎng)殖試驗第4周開始收集糞便，直到養(yǎng)殖試驗結(jié)束。投料前清理殘餌及排泄物，在投料4 h后進行糞便收集。用鑷子挑選新鮮、外表帶有包膜的完整糞便，蒸餾水漂洗后用濾紙吸干水分，置于50 mL離心管中于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。測定前使用冷凍干燥機(CHRIST，Alpha 2-4 LDplus，德國)將糞便干燥后粉碎過60目篩。委托上海微譜化工技術(shù)服務(wù)有限公司測定糞便中三氧化二釔(Y2O3)含量，以計算飼料干物質(zhì)表觀消化率(ADCDM)、粗蛋白質(zhì)表觀消化率(ADCCP)、鈣表觀消化率(ADCCa)和磷表觀消化率(ADCP)。

ADCDM(%)=100×(1-飼料中Y2O3含量/糞便中Y2O3含量)；某營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率(%)=100×(飼料中該營養(yǎng)物質(zhì)的含量-糞便中該營養(yǎng)物質(zhì)的含量)/飼料中該營養(yǎng)物質(zhì)的含量。

1.3.4 養(yǎng)殖水體水質(zhì)測定

在養(yǎng)殖試驗第7周的第1天早晨各養(yǎng)殖桶換完水后，08:00投喂飼料，分別于投料后1、5、9、13、17和21 h采用虹吸法在養(yǎng)殖桶中采集水樣進行溫度及水質(zhì)指標(biāo)的測定，虹吸管用顏色標(biāo)識，以便確保在同一深度處采集水樣。采集完的水樣裝入500 mL白色聚乙烯瓶和250 mL棕色磨口玻璃瓶內(nèi)，放置陰涼避光處密閉保存，參照GB 17378.42007《海洋監(jiān)測規(guī)范第4部分海水分析》[21]在24 h內(nèi)測定pH以及溶解氧、總氮、亞硝氮、氨氮、硝氮、總磷含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若存在顯著性差異，則采用Tukey氏法多重比較檢驗組間的差異顯著性。試驗數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚生長性能的影響

由表3可見，珍珠龍膽石斑魚的FBW、WGR、SGR隨著酶解雞肉粉添加量的增加呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。EP3組的FBW、WGR和SGR顯著高于EP0、EP12、EP15和EP18組(P<0.05)，且該組的PER、FCR和FR與EP0組相比差異不顯著(P>0.05)；EP18組的FBW、WGR和SGR顯著低于其他組(P<0.05)，且該組的PER顯著低于EP0、EP3、EP6和EP9組(P<0.05)，同時FR和FCR顯著高于EP0、EP3和EP6組(P<0.05)。各組SR差異不顯著(P>0.05)。

表3 珍珠龍膽石斑魚的生長性能Table 3 Growth performance of hybrid grouper (n=3)

2.2 酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表4可知，EP0、EP3和EP6組的ADCDM和ADCCP無顯著差異(P>0.05)，但是均顯著高于EP9、EP15和EP18組(P<0.05)。EP3和EP12組的ADCCa顯著高于其他組(P<0.05)。EP12組的ADCP顯著高于EP0、EP9和EP15組(P<0.05)。

表4 珍珠龍膽石斑魚的營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率Table 4 Apparent digestibility coefficients of nutrients of hybrid grouper (n=3) %

2.3 酶解雞肉粉替代部分魚粉對養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響

2.3.1 養(yǎng)殖水體溫度

由表5可知，各組養(yǎng)殖水體溫度變化范圍為30.83～31.77 ℃。各組養(yǎng)殖水體溫度隨時間的推移均呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(圖2)。在攝食后9～13 h，各組養(yǎng)殖水體溫度均達到最高。EP3和EP6組養(yǎng)殖水體溫度在各時間點均與EP0組差異不顯著(P>0.05)。在攝食后5～9 h，EP0組養(yǎng)殖水體溫度顯著高于EP9、EP12、EP15和EP18組(P<0.05)。

圖2 養(yǎng)殖水體溫度隨時間的變化Fig.2 Cultured water temperature changes with time

表5 養(yǎng)殖水體溫度隨時間的變化Table 5 Changes of cultured water temperature with time (n=3) ℃

2.3.2 養(yǎng)殖水體pH

由圖3可知，各組養(yǎng)殖水體pH隨時間的推移均呈現(xiàn)出先降低后升高的趨勢，變化范圍為6.82～7.16。表6顯示，EP0組養(yǎng)殖水體pH除在攝食后5和13 h顯著高于EP3和EP6組外(P<0.05)，其余各時間點均與EP3和EP6組差異不顯著(P>0.05)。在攝食后1 h，各組養(yǎng)殖水體pH相對集中且均達到最高，在攝食后13～17 h各組水體pH達到最低。

圖3 養(yǎng)殖水體pH隨時間的變化Fig.3 Changes of cultured water pH with time

表6 養(yǎng)殖水體pH隨時間的變化Table 6 Changes of cultured water pH with time (n=3)

2.3.3 養(yǎng)殖水體溶解氧含量

由表7和圖4可知，各組養(yǎng)殖水體溶解氧含量在6.52～7.62 mg/L內(nèi)波動，無顯著差異(P>0.05)，處于相對穩(wěn)定狀態(tài)。

表7 養(yǎng)殖水體溶解氧含量隨時間的變化Table 7 Changes of dissolved oxygen content in cultured water with time (n=3) mg/L

圖4 養(yǎng)殖水體溶解氧含量隨時間的變化Fig.4 Changes of dissolved oxygen content in cultured water with time

2.3.4 養(yǎng)殖水體氮、磷含量

由表8和圖5-A可知，隨著時間的推移，各組養(yǎng)殖水體總氮含量整體呈上升趨勢，在攝食后1～17 h，各組養(yǎng)殖水體總氮含量差異不顯著(P>0.05)。在攝食后21 h，各組養(yǎng)殖水體總氮含量均達到最高，EP0、EP3、EP12、EP15和EP18組之間差異不顯著(P>0.05)，而EP6和EP9組顯著高于EP0和EP18組(P<0.05)。

表8 養(yǎng)殖水體總氮含量隨時間的變化Table 8 Changes of total nitrogen content in cultured water with time (n=3) mg/L

由表9和圖5-B可知，隨著時間的推移，各組養(yǎng)殖水體總磷含量變化相對穩(wěn)定，變化范圍為0.068 7～0.183 3 mg/L。在攝食后1～21 h，EP3和EP0組養(yǎng)殖水體總磷含量均差異不顯著(P>0.05)，在攝食后1～17 h，EP3組養(yǎng)殖水體總磷含量相較于EP0組降低了1.9%～27.1%。EP18組養(yǎng)殖水體總磷含量除在攝食后9和17 h顯著低于EP0組(P<0.05)外，其余各時間點與EP0組均差異不顯著(P>0.05)

圖5 養(yǎng)殖水體總氮和總磷含量隨時間的變化Fig.5 Changes of total nitrogen and total phosphorus contents in cultured water with time

表9 養(yǎng)殖水體總磷含量隨時間的變化Table 9 Changes of total phosphorus content in cultured water with time (n=3) mg/L

續(xù)表9時間Time/h組別GroupsEP0EP3EP6EP9EP12EP15EP1850.1157±0.0097bcxy0.0843±0.0017cyz0.0810±0.0083bz0.1003±0.0078xyz0.0873±0.0049cyz0.1030±0.0040xyz0.1207±0.0078abx90.1310±0.0010abcx0.1183±0.0113abcxy0.1153±0.0038abxy0.1227±0.0038xy0.0990±0.0023bcy0.1160±0.0091xy0.0940±0.0075by130.1447±0.0222ab0.1067±0.0107bc0.1050±0.0083ab0.1237±0.01010.1047±0.0072abc0.1247±0.00770.1103±0.0169ab170.1833±0.0149ax0.1527±0.0160abxy0.1167±0.0052abxy0.1287±0.0178xy0.1497±0.0154axy0.1187±0.0162xy0.0963±0.0049by210.1507±0.0124ab0.1653±0.0194a0.1473±0.0116a0.1250±0.01040.1433±0.0172ab0.1360±0.00920.1517±0.0151a

由表10和圖6-A可知，隨著時間的推移，各組養(yǎng)殖水體硝氮含量整體呈上升趨勢。在攝食后各時間點，EP0、EP3和EP6組養(yǎng)殖水體硝氮含量均差異不顯著(P>0.05)。在攝食后9～21 h，EP18組養(yǎng)殖水體硝氮含量一直低于其他組且上升趨勢相對緩慢。各組養(yǎng)殖水體硝氮含量在攝食后21 h均達到最高且顯著高于同組攝食后1～13 h(P<0.05)。

表10 養(yǎng)殖水體硝氮含量隨時間的變化Table 10 Changes of nitrate nitrogen content in cultured water with time (n=3) mg/L

由圖6-B可知，隨著時間的推移，各組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量整體呈上升趨勢。EP18組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量一直低于其他組且上升趨勢相對緩慢。由表11可知，在攝食后1～9 h和21 h時，EP0、EP3和EP6組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量差異不顯著(P>0.05)。在攝食后13～17 h，EP0與EP6組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于EP3組(P<0.05)。EP18組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量除在攝食后13 h顯著低于其他組外(P<0.05)，其余時間點與EP0組差異不顯著(P>0.05)。各組養(yǎng)殖水體亞硝氮含量在攝食后21 h顯著高于同組攝食后其他時間點(P<0.05)。

表11 養(yǎng)殖水體亞硝氮含量隨時間的變化Table 11 Changes of nitrous nitrogen content in cultured water with time (n=3) mg/L

由表12和圖6-C可知，隨著時間的推移，各組養(yǎng)殖水體氨氮含量整體呈上升趨勢。各組養(yǎng)殖水體氨氮含量在除攝食后17 h外的其他時間點均差異不顯著(P>0.05)。在攝食后17 h，EP9組養(yǎng)殖水體氨氮含量顯著低于EP6和EP15組(P<0.05)，其他組間差異不顯著(P>0.05)。各組養(yǎng)殖水體氨氮含量均在攝食后21 h達到最高且顯著高于同組攝食后1～9 h(P<0.05)。EP3組養(yǎng)殖水體氨氮含量總體上升趨勢相對緩慢且始終低于EP0組。在除攝食后9 h外的各時間點，EP3組養(yǎng)殖水體氨氮含量相較于EP0組降低了0.6%～21.0%。

圖6 養(yǎng)殖水體硝氮、亞硝氮和氨氮含量隨時間的變化Fig.6 Changes of nitrate nitrogen,nitrous nitrogen and ammonia nitrogen contents in cultured water with time

表12 養(yǎng)殖水體氨氮含量隨時間的變化Table 12 Changes of ammonia nitrogen content in cultured water with time (n=3) mg/L

3 討 論

3.1 酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚生長性能的影響

已有研究顯示，飼料中雞肉粉添加量超過21%時，卵形鯧鲹的生長會受到抑制[10]，然而，飼料中雞肉粉添加量增加至32%時，并未對大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼魚[22]和黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)幼魚[23]的WGR和SGR產(chǎn)生顯著負(fù)面影響，表明不同魚種對雞肉粉的利用率不同。本試驗條件下，珍珠龍膽石斑魚的WGR和SGR均EP3組達到最大值。酶解蛋白富含小肽和游離氨基酸，能提高魚蝦類的食欲，提高飼料轉(zhuǎn)化率，對機體的生長、發(fā)育和飼料利用有著顯著的促進作用[24-28]。小肽轉(zhuǎn)運速度快、耗能低、載體不易飽和、能夠改善氨基酸的轉(zhuǎn)運速度[29]，可以被動物的肝臟、腸道和皮膚等多種器官直接利用，提高了動物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用效率，使得珍珠龍膽石斑魚對飼料中蛋白質(zhì)的吸收利用效率增高，本試驗中EP3組珍珠龍膽石斑魚的PER高于EP0組，表明飼料中適量添加酶解雞肉粉有利于蛋白質(zhì)沉積。隨著飼料中酶解雞肉粉添加量增加至15%，珍珠龍膽石斑魚的生長性能和FCR始終保持穩(wěn)定，未出現(xiàn)顯著差異，這可能是因為：一方面，酶解雞肉粉富含小肽，能減少氨基酸之間的拮抗作用，避免游離氨基酸吸收過程中發(fā)生吸收競爭，改善動物對飼料的利用[30]；另一方面，飼料配方中補充了限制性氨基酸賴氨酸和蛋氨酸，充分滿足了魚體的生長發(fā)育需求。本試驗中EP18組的WGR和SGR均顯著低于其他組，這可能是由于酶解雞肉粉添加量過高對魚類的生長產(chǎn)生負(fù)面影響所致。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加5.5%的水解魚蛋白[31]或10%的磷蝦水解物[32]可以提高大菱鲆對飼料中氨基酸的利用；飼料中添加19%的酶解磷蝦粉可以提高珍珠龍膽石斑魚幼魚的WGR和SGR[33]；飼料中魚蛋白水解物添加量超過28.8%后，軍曹魚(Rachycentroncanadum)的WGR隨添加量的升高而降低[34]。在酶解雞肉粉替代部分魚粉的狀態(tài)下，飼料中潛在的促生長因子減少[22]，而酶解雞肉粉添加量過高導(dǎo)致飼料中小肽和游離氨基酸含量也逐漸增高至過量，出現(xiàn)了肽和蛋白至混合物比例不平衡的情況[35]，而游離氨基酸被魚體吸收需要一定的位點，當(dāng)游離氨基酸含量過高時，會出現(xiàn)轉(zhuǎn)運位點競爭抑制現(xiàn)象，造成吸收不同步，使這些營養(yǎng)物質(zhì)在消化吸收過程中過多流失[36]，以致PER、WGR和SGR逐漸降低，F(xiàn)CR逐漸升高[37]。在本試驗條件下，F(xiàn)CR隨酶解雞肉粉添加量增加呈現(xiàn)出上升的趨勢，可能是因為添加酶解雞肉粉增加了飼料中小肽的含量，增加了飼料的適口性和誘食性。酶解產(chǎn)生的氨基酸殘基[38]和生物活性肽[39]對水生動物有特殊的誘食作用，可促進金鱸(Latescalcarifer)[40-41]、星斑川鰈(Platichthysstellatus)幼魚[42]、鮭魚(Salmosalar)[43]、珍珠龍膽石斑魚[27]的FCR升高，表明酶解雞肉粉中的小肽具有一定的促進攝食的功效。

3.2 酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

在飼料中添加適量的酶解磷蝦粉和家禽副產(chǎn)物酶解肽能夠顯著改善珍珠龍膽石斑魚[27]和大菱鲆[44]的ADCDM，這說明酶解產(chǎn)生的小分子肽及氨基酸有利于提高水產(chǎn)動物對飼料的消化率。值得注意的是，隨著飼料中酶解肽添加量的增加，大菱鲆的ADCCP先穩(wěn)定后降低，ADCDM顯著降低[45]。在本試驗中，隨著酶解雞肉粉添加量的增加，珍珠龍膽石斑魚的ADCDM和ADCCP也呈現(xiàn)出類似現(xiàn)象，即先穩(wěn)定后降低。較多的酶解雞肉粉使飼料中小肽和游離氨基酸的含量過高，過多的酶解肽反而會導(dǎo)致魚類對飼料的消化率降低[44]，游離氨基酸含量過高則導(dǎo)致位點競爭出現(xiàn)了吸收抑制情況，兩者共同作用使得魚類對蛋白質(zhì)和干物質(zhì)的消化吸收降低。崔家軍等[46]的試驗表明，隨著飼料中酶解蛋白肽添加量的增加，豬的ADCCa呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。這與本試驗研究結(jié)果類似，本試驗中EP3、EP6和EP12組珍珠龍膽石斑魚的ADCCa和ADCP高于EP0組，說明適量酶解雞肉粉促進了鈣和磷的消化，這可能是因為小肽有促進礦物元素消化吸收的作用[47]。

3.3 酶解雞肉粉替代部分魚粉對養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響

陳思[48]的研究表明，珍珠龍膽石斑魚最適生長水溫為30.20～31.29 ℃，當(dāng)養(yǎng)殖水溫超過33 ℃時，石斑魚的攝食量隨溫度的升高呈下降趨勢。養(yǎng)殖水體溫度的差異對魚類攝食[49]、消化[50]和蛋白質(zhì)合成率[51]均有直接或間接的影響。在外界溫度對水溫的影響一致的情況下，體增熱越少，用于機體生長的凈能越多。在08:00表觀飽食投喂試驗飼料后，隨著外界環(huán)境溫度的升高以及珍珠龍膽石斑魚攝食后體內(nèi)產(chǎn)熱量的增加，養(yǎng)殖水體溫度逐漸升高，養(yǎng)殖水體溫度變化范圍為30.83～31.77 ℃，間接提示飼料中魚粉、豆粕等蛋白質(zhì)源添加量下降而酶解雞肉粉添加量的增加對珍珠龍膽石斑魚的體增熱影響不顯著，對養(yǎng)殖水體溫度未產(chǎn)生顯著影響。

糞便和殘餌會對養(yǎng)殖水體pH產(chǎn)生影響[52]。養(yǎng)殖水體pH下降可能是氨氧化菌等微生物將氨氮轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽的過程中產(chǎn)生酸性物質(zhì)所致[53]，也可能是因為魚體的新陳代謝和排泄物導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中總氮、氨氮、硝氮和亞硝氮的含量逐漸上升，與更多的氫氧根離子(OH-)結(jié)合發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，引起水體pH下降。本試驗中，在攝食17～21 h后，養(yǎng)殖水體溫度降低，一方面，可能是二氧化碳溶解度下降，與水分子結(jié)合生成碳酸的量減少，導(dǎo)致水體pH上升；另一方面，隨著酶解雞肉粉替代魚粉比例的增加，ADCCP逐漸降低，魚體代謝排出的糞便中氮的含量逐漸增加，以致攝食含酶解雞肉粉飼料組養(yǎng)殖水體pH低于EP0組。魚蝦類養(yǎng)殖水體的適宜pH在6.5～8.5，水體生物呼吸作用以及飼料的溶失會對水體pH產(chǎn)生一定影響，本試驗中同一時間點各組之間以及同組各時間點之間養(yǎng)殖水平pH均在6.82～7.16，盡管存在一定的差異，但保持在適宜范圍內(nèi)，表明飼料中魚粉、豆粕和酶解雞肉粉添加量的變化未對養(yǎng)殖水體pH產(chǎn)生不良影響。

養(yǎng)殖水體氨氮含量除了取決于養(yǎng)殖水體pH、溫度、鹽度等因素外，還受到魚體對食物消化利用程度的影響[54]。相比于攝食人工飼料，大口黑鱸(Micropterussalmoides)[55]與大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[56]攝食鮮雜魚后，養(yǎng)殖水體中總氮和總磷含量會有所上升。氮、磷排放率與食物中的氮、磷含量呈正相關(guān)[57]，投喂低氮、磷含量的飼料提高了斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)的蛋白質(zhì)消化率，降低了對氮、磷的排放率，有效減少了養(yǎng)殖水體中氮、磷的含量。EP3組ADCP高于EP0組且EP3組的生長性能也優(yōu)于其他組，這表明添加適量酶解雞肉粉后，磷被魚類利用的效率更高，在水中殘留更少，在一定程度上有效降低了磷對水體的污染。由此可見，食物的消化利用效率直接影響?zhàn)B殖水體水質(zhì)。而水質(zhì)不僅直接關(guān)系到魚類的健康生長和成活率，還會決定藻類的生長，過量的氮、磷排放會使水體藻類繁殖旺盛，處于富營養(yǎng)化的狀態(tài)，引起赤潮、水華的發(fā)生[58]，對構(gòu)建穩(wěn)健平衡的養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)起著重要影響[59]。

養(yǎng)殖水體中氨氮、亞硝氮和硝氮的含量是衡量水質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)，而氨氮又是養(yǎng)殖水環(huán)境中最重要的污染脅迫因子。由水中殘餌、有機廢物經(jīng)細(xì)菌分解所產(chǎn)生的氨氮能直接對水生動物的鰓組織造成損害，甚至影響水生動物的生理代謝功能，從而抑制其生長[60]。養(yǎng)殖水體氨氮含量低時，魚體生長發(fā)育正常，而氨氮含量過高時，魚體攝食量明顯下降，甚至出現(xiàn)死亡現(xiàn)象[60-61]。在本試驗中，珍珠龍膽石斑魚攝食含有酶解雞肉粉的飼料1 h后，EP3和EP0組養(yǎng)殖水體總氮、氨氮、硝氮、亞硝氮和總磷含量均無顯著差異。酶解雞肉粉添加量超過6%時，養(yǎng)殖水體氨氮、硝氮和亞硝氮含量升高，且ADCCP和ADCP也低于EP0組。有研究發(fā)現(xiàn)，添加適量的酶解大豆蛋白和雞肉粉對幼建鯉(Cyprinuscarpiovar.Jian)[62]和大菱鲆幼魚[63]的生長有促進作用，使飼料中更多的能量用于生長，提高了飼料中氮、磷的利用率，而當(dāng)酶解大豆蛋白和雞肉粉添加量過高時，會引起飼料中氨基酸不平衡，導(dǎo)致氮、磷代謝失調(diào)，使魚類攝入的蛋白質(zhì)用于生長的量減少，而用于新陳代謝和排泄的量增加，多余的氨基酸通過脫氨基作用排出體外[64]，導(dǎo)致魚體對飼料的消化利用能力下降，引起氮、磷排泄率升高。由此可見，飼料中添加3%的酶解雞肉粉替代部分魚粉不僅可以促進珍珠龍膽石斑魚的生長發(fā)育，還能改善養(yǎng)殖水體水質(zhì)。

綜合上述結(jié)果分析，飼料中添加適量的酶解雞肉粉替代部分魚粉可以有效降低養(yǎng)殖水體中亞硝氮、氨氮、硝氮和總磷的含量，降低飼料對水體的污染，從而推進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的綠色發(fā)展，保護水域生態(tài)環(huán)境。

4 結(jié) 論

① 飼料中添加3%的酶解雞肉粉替代部分魚粉能夠提高珍珠龍膽石斑魚的生長性能。

② 飼料中添加3%的酶解雞肉粉替代部分魚粉對珍珠龍膽石斑魚的ADCDM和ADCCP未造成負(fù)面影響，并且提高了ADCCa和ADCP。

③ 飼料中添加3%的酶解雞肉粉替代部分魚粉可通過提高珍珠龍膽石斑魚對氮、磷的消化吸收，減少氮、磷在水體中的排放，有效減輕水產(chǎn)養(yǎng)殖對水質(zhì)的污染。