生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)小細(xì)胞肺癌患者腫瘤標(biāo)志物及T淋巴細(xì)胞亞群水平的影響

李龍，鄭振東,劉渤娜,高霄麗,蘆洪波

小細(xì)胞肺癌是特殊類型肺癌，占所有肺癌類型20%左右，其病情發(fā)展速度快且易發(fā)生轉(zhuǎn)移。臨床上治療小細(xì)胞肺癌方法以手術(shù)、放療及化療為主[1-2]。化學(xué)治療及放射治療受小細(xì)胞肺癌獨(dú)特生物學(xué)行為影響，近期治療效果較好，但容易復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，且由于患者過度接受放化療使其機(jī)體免疫能力下降，加速死亡[3]。近年來，生物免疫療法越來越多應(yīng)用于臨床治療，通過提取患者血清單核細(xì)胞，經(jīng)相關(guān)技術(shù)進(jìn)行體外培養(yǎng)，獲得具有識(shí)別和殺滅腫瘤功能的細(xì)胞，通過靜脈注射進(jìn)行回輸，達(dá)到更好的治療效果，同時(shí)還可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)可以進(jìn)行有效免疫監(jiān)控[4-6]。現(xiàn)觀察生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)SCLC患者的治療效果及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的影響，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年12月—2019年12月北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院腫瘤科治療小細(xì)胞肺癌患者62例，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為放療組、聯(lián)合治療組(聯(lián)合組)，每組31例。放療組男17例，女14例，年齡44～57(50.5±5.2)歲；病程2～8 (5.1±2.5)個(gè)月；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期7例，Ⅲ期12例，Ⅳ期12例。聯(lián)合組男13例，女18例，年齡47～63(55.0±6.4)歲；病程3～8 (5.5±2.1)個(gè)月；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期5例，Ⅲ期14例，Ⅳ期12例。2組患者性別、年齡、病程、分期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)影像學(xué)、細(xì)胞學(xué)檢查確診為小細(xì)胞肺癌患者，且首次接受治療。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①病例資料不全患者；②患有先天性疾?。虎劬窦膊』颊?；④合并心腦血管、肝腎等原發(fā)性疾病。

1.3 治療方法 放療組：放射前對(duì)患者采用CMS治療計(jì)劃系統(tǒng)進(jìn)行CT定位，以Varian2100C/D直線加速器6MV-X射線對(duì)肺部原發(fā)病灶、肺門及縱隔采用胸部照射野，劑量DT=40 Gy/20次，每次2 Gy，1次/d，1周5次；4周后局部加量，追加DT 10～30 Gy 1～3周，總量DT為50～70 Gy。鎖骨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移照射6周，DT=60 Gy。聯(lián)合組：在放療組治療基礎(chǔ)上聯(lián)合生物免疫療法，放療結(jié)束后，對(duì)患者采用多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)生物免疫法。采取靜脈血50 ml，分離單核細(xì)胞，0.9%氯化鈉洗滌3次。使用RPMI1640培養(yǎng)基密度調(diào)節(jié)為2×106/ml，于第1天加入2 000 U/ml重組干擾素，常溫環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。第2天加入濃度為1 000 U/ml白介素2及5μg/ml抗CD3單抗。每3天更換營養(yǎng)液，補(bǔ)充白介素，測定單個(gè)核細(xì)胞。用自體血清培養(yǎng)皿培養(yǎng)后，收集CIK，洗滌后加入5%人白蛋白、白介素2。靜脈滴注定容250 ml氯化鈉溶液，每次回輸細(xì)胞109個(gè)，每次間隔1 d，3次為1個(gè)療程?；剌斍熬M(jìn)行無菌檢測，達(dá)標(biāo)后回輸。

1.4 治療效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[7]CR：腫瘤組織完全消失；PR：腫瘤直徑縮小50%；SD：腫瘤組織得到一定的縮減但沒有達(dá)到部分緩解的程度，或有一定的增加且增加不明顯；PD：腫瘤組織增長25%或出現(xiàn)新腫瘤組織?？傆行?(CR+PR)/總例數(shù)×100%。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 血清細(xì)胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)水平測定：采用免疫透射比濁法檢測，治療前后抽取患者空腹肘靜脈血6 ml，離心分離上層血清，-70℃環(huán)境中保存待檢。標(biāo)記3個(gè)試管為空白管、測定管和標(biāo)準(zhǔn)管，分別加入蒸餾水、血清、 LIF標(biāo)準(zhǔn)液各25 μl，均加入緩沖液350 μl并搖晃均勻，常溫下靜置5～10 min，隨后使用SR-722型分光光度計(jì)(上海舍巖儀器有限公司生產(chǎn))對(duì)其進(jìn)行比色，在500 nm波長處以空白管凋零為準(zhǔn)，記錄吸光度，計(jì)算血清CYFRA21-1、CEA水平[8]。

1.5.2 血清VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3水平檢測： 治療前后分別抽取患者清晨空腹肘靜脈血4 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3水平進(jìn)行檢測。

1.5.3 T淋巴細(xì)胞亞群水平檢測：對(duì)待測標(biāo)本做抗凝處理，分為2管，分別加入CD8+、CD4+、CD3+單克隆抗體20 μl，室溫環(huán)境下孵育30 min后在各管中加入溶血?jiǎng)渫耆苎筮M(jìn)行離心處理， 棄上清液，使用洗滌液對(duì)其進(jìn)行洗滌后在各管中加入固定劑150 μl，使用0.5 ml PBS混合均勻制備為懸液，使用流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞亞群CD4+、CD25+水平。

1.5.4 不良反應(yīng)發(fā)生情況：對(duì)治療過程中出現(xiàn)的白細(xì)胞減少、食管炎、骨髓抑制等不良反應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。

2 結(jié) 果

2.1 2組治療效果比較 聯(lián)合組患者治療總有效率為80.65%，高于放療組的54.84%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組患者治療效果比較 [例(%)]

2.2 2組治療前后血清CYFRA21-1、CEA水平比較 治療前2組血清CYFRA21-1、CEA水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；療程結(jié)束后，2組血清CYFRA21-1、CEA水平均降低，且聯(lián)合組低于放療組(P<0.01)，見表2。

表2 2組患者治療前后血清CYFRA21-1、CEA水平比較

2.3 2組治療后血清VEGFR水平比較 治療前，2組血清VEGFR水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；療程結(jié)束后，2組血清VEGFR水平均降低，且聯(lián)合組低于放療組(P<0.01)，見表3。

表3 2組患者治療前后血清VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3水平比較

2.4 2組治療前后血清T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 治療前,2組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；療程結(jié)束后，2組CD4+水平升高，CD8+水平降低，且聯(lián)合組升高/降低較放療組更明顯(P<0.01)，見表4。

表4 2組患者治療前后血清CD4+、CD8+水平比較

2.5 2組不良反應(yīng)發(fā)生率比較 放療組患者不良反應(yīng)率為35.48%，高于聯(lián)合組的12.90%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.039，P=0.037)，見表5。

表5 2組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 [例(%)]

3 討 論

小細(xì)胞肺癌是一種起源于支氣管黏膜或腺體的一種惡性腫瘤，小細(xì)胞肺癌的胞質(zhì)具有神經(jīng)分泌顆粒，其能夠分泌激肽、組胺等物質(zhì)。支氣管鏡下的小細(xì)胞肺癌浸潤生長最為明顯，病變侵及范圍廣，與正常組織之間的邊界極其模糊，導(dǎo)致支氣管表面腫脹，有時(shí)可見血性分泌物[9-10]。小細(xì)胞癌的增長速度極快，該病的發(fā)病病因和發(fā)病機(jī)制目前還沒有明確，目前研究表明，與空氣污染、吸煙、飲食和遺傳基因有關(guān)[11]。生物免疫療法由患者靜脈采集外周血，經(jīng)過體外分離后培養(yǎng)，獲得更加有效和特異性抗腫瘤殺傷細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)后，分次進(jìn)行回輸，有效殺死腫瘤情況下，保證機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及功能不受損傷，提高機(jī)體免疫能力。生物免疫療法是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一種治療腫瘤的方法，其可以控制腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)患者的免疫功能[12-14]。

相關(guān)資料顯示，作為腫瘤標(biāo)志物的CYFRA21-1在小細(xì)胞肺癌患者血清中表達(dá)出現(xiàn)異常，其水平變化與小細(xì)胞肺癌分期及腫瘤組織大小等具有密切聯(lián)系，具有重要診斷價(jià)值。CYFRA21-1異常表達(dá)與小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)CYFRA21-1水平檢測能夠有效對(duì)患者治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。CEA屬于光譜血清腫瘤標(biāo)志物，是具有抗原特性的糖蛋白，腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展與其水平表達(dá)關(guān)系密切。CEA進(jìn)入血液導(dǎo)致其血清濃度增加，最終導(dǎo)致機(jī)體臟器中細(xì)胞發(fā)生癌變，對(duì)CEA水平進(jìn)行檢查可以輔助對(duì)小細(xì)胞肺癌的診斷[15]。本研究結(jié)果顯示，通過生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)SCLC患者進(jìn)行治療，可有效調(diào)控腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1、CEA水平，對(duì)診斷及預(yù)后具有重要作用。

VEGF是一種具有高度生物活性的二聚體陽離子糖蛋白，特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，有效提升機(jī)體血管通透性、促進(jìn)血管形成。VEGF作為促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的重要因子對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖具有重要作用，因此對(duì)VEGF進(jìn)行檢測可以有效直觀的對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3屬于VEGF受體，對(duì)癌組織新生血管形成具有重要影響，與癌細(xì)胞的生長具有密切聯(lián)系[16-17]。本研究結(jié)果顯示，通過生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)SCLC患者進(jìn)行治療，血清VEGFR水平降低，對(duì)癌組織的發(fā)生發(fā)展具有明顯抑制作用。

T細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中扮演重要角色，臨床與研究證明，小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展會(huì)對(duì)機(jī)體免疫功能造成損傷[18]。CD4+是T細(xì)胞輔助細(xì)胞，對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫功能具有明顯輔助效果。作為細(xì)胞毒T細(xì)胞或T抑制細(xì)胞，CD8+主要作用包括抑制細(xì)胞毒作用及免疫作用。相關(guān)研究資料顯示，通過治療對(duì)小細(xì)胞肺癌患者T淋巴細(xì)胞亞群水平進(jìn)行調(diào)控，能夠有效提高免疫功能[19]。本研究結(jié)果顯示，通過生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)SCLC患者進(jìn)行治療，能夠有效調(diào)控T淋巴細(xì)胞亞群水平，達(dá)到改善免疫功能的治療效果。

綜上所述，通過生物免疫療法聯(lián)合放療對(duì)SCLC患者進(jìn)行治療，可有效調(diào)控腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1、CEA水平，提高自身機(jī)體免疫能力，有效抑制癌組織及癌組織細(xì)胞新生血管的生長，治療效果顯著，對(duì)小細(xì)胞肺癌的診斷及預(yù)后具有一定參考價(jià)值。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

李龍：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；鄭振東：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核;劉渤娜：實(shí)施研究過程，資料搜集整理，論文修改;高霄麗：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;蘆洪波：課題設(shè)計(jì)，論文撰寫