牦牛病毒性腹瀉
——黏膜病的診斷及防控

向乾春，尹 苗，彭中美，陳希文

（綿陽(yáng)師范學(xué)院動(dòng)物疫病防控與健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，四川綿陽(yáng)621000）

牦牛可以人工馴化養(yǎng)殖，在當(dāng)?shù)啬撩窈臀覈?guó)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)中有非常重要的地位。牦?？梢阅褪軜O端環(huán)境，全身皆有實(shí)用價(jià)值，被譽(yù)為“高原之舟”[1]。世界上的牦牛均發(fā)源于我國(guó)，在青藏高原及鄰近各省都有分布，總數(shù)約1500萬(wàn)頭，占全世界的90%，其中青海省最多，西藏次之，四川第三[2]。1980年首次報(bào)道的黃病毒科瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉-黏膜病毒（bovineviraldiarrhea-mucosaldisease，BVD-MD），是引起牧民和眾多學(xué)者的研究的一種“牦牛拉稀病”的病原[3]。該病又稱牛黏膜病，遍布世界各大養(yǎng)殖區(qū)域?；疾￡笈３霈F(xiàn)腹瀉、消化道黏膜脫落的主要癥狀，還會(huì)引起牦牛發(fā)育停滯、不孕死亡等嚴(yán)重后果。高雙娣等[4]通過(guò)細(xì)胞中和試驗(yàn)檢測(cè)青海、四川等5個(gè)省牦牛群的牛病毒性腹瀉——黏膜?。˙DV-MD）抗體，結(jié)果顯示，陽(yáng)性檢出率為30.08%，對(duì)牧民和畜牧養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)破壞巨大。

1 病原

BDV 病毒為單股RNA 病毒，具囊膜，黃病毒科、瘟病毒屬，在病料超薄切片中觀察呈現(xiàn)為24～30 nm 的圓球形顆粒。在胎牛的睪丸、腎、氣管、脾、鼻甲、肺、皮膚等組織細(xì)胞中可以分離得到BDV 病毒[5]。BDV 病毒有血清型相同而致病性不同的2種生物類型，如基因組全長(zhǎng)約12.3 kb的 NY-1 株是不會(huì)引起細(xì)胞病變的病毒（Noncytopathogenic，NCP），第2種如12.5 kb的NADL株能造成細(xì)胞核固縮、形成空泡、細(xì)胞變圓和死亡等病變[6]。通過(guò)對(duì)BDV病毒的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，低溫下可以存活數(shù)年，在蔗糖密度梯度中的浮密度為1.13～1.14 g/mL，沉降系數(shù)為85 s左右[7]，對(duì)有機(jī)溶劑（乙醚、氯仿）敏感。病毒用乙醚處理后，TCID 從4.5 減小至1.0 以下?？顾嵩囼?yàn)證明，用0.1 mol/L的鹽酸培養(yǎng)后，TCID從4.5減小至1.0以下，說(shuō)明該病毒不能在酸性條件下存活[2]。胰蛋白酶試驗(yàn)表明，該病毒對(duì)胰蛋白酶具有一定的適應(yīng)性，可以存活。BVD病毒與豬瘟病毒、綿羊邊界病病毒在瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)中有交叉反應(yīng)，這3種病毒可能含有共同的可溶性抗原[8]。BDV 病毒可以入侵呼吸道和黏膜上皮細(xì)胞，進(jìn)入血液形成病毒血癥，也可以通過(guò)胎盤(pán)感染，造成胚胎死亡、產(chǎn)木乃伊胎、弱胎和流產(chǎn)等[9]，還會(huì)產(chǎn)下先天性缺陷小牛，而且BDV會(huì)導(dǎo)致免疫抑制，進(jìn)而作為一種持久隱形的傳播源，對(duì)養(yǎng)殖及防控造成極大困難。

2 流行病學(xué)

2.1 流行時(shí)間

在養(yǎng)殖過(guò)程中，牦牛病毒性腹瀉——黏膜病全年皆可以發(fā)生，其中不同地區(qū)呈現(xiàn)不同季節(jié)的高峰期，如有集中在5～6月發(fā)生的地區(qū)；也有常常在冬、春季發(fā)病較多的地區(qū)；還有于1～5月頻繁患病，且高峰期不固定，可能與當(dāng)?shù)氐臍夂蚣暗乩項(xiàng)l件、人員流動(dòng)有關(guān)。李有智等[10]研究表明，發(fā)病時(shí)間與時(shí)而晴天時(shí)而下雨的這種忽冷忽熱的天氣有關(guān)。

2.2 易感牦牛

該病對(duì)所有年齡階段的牦牛都有一定的感染能力，肉牛更易被傳染，多為隱性感染，其中患病牦牛，普遍為6～18月齡的犢牛，因?yàn)槌跎倏梢垣@得從母體來(lái)的抗體，具有一定的免疫能力[11]。由牦牛的品種和所處的養(yǎng)殖環(huán)境、條件等，易感牦牛也呈現(xiàn)巨大的差異。田文學(xué)等[12]報(bào)道，發(fā)病體現(xiàn)在新生犢牛，成年的母牛不易感染。劉亞剛等[2]報(bào)道，分析3 歲以上的母牛發(fā)病最多，公牛不易感染；而哈利[9]研究齊哈瑪鄉(xiāng)果青村地區(qū)，發(fā)現(xiàn)感染的牦牛與性別無(wú)顯著關(guān)系。在自然條件下，BDV 病毒只感染牛，而人為干擾的情況下，豬、羊等其他牲畜也可以患此病。病程為短至幾天或長(zhǎng)達(dá)半年[13]，且具有較強(qiáng)的傳染性、易復(fù)發(fā)。

2.3 傳染源

牦牛病毒性腹瀉——黏膜病主要的傳染源為患病、帶毒的牦牛，由于不斷的腹瀉或者拉血、各種分泌物的排出體外，造成了大量病毒的傳播，在血、脾、骨髓、腸淋巴結(jié)等組織和呼吸道、眼分泌物、乳汁、精液及糞便等均含活性病毒，還有持續(xù)感染的患病牛會(huì)終生攜帶病毒，對(duì)傳染該病具有極大的促進(jìn)作用，且不易引起關(guān)注。其他牲畜，如羊感染此病因機(jī)體可以產(chǎn)生抗體而一般不會(huì)有典型的臨床癥狀，會(huì)成為一種隱性的持久傳染源[14]。

2.4 傳播途徑

牦牛病毒性腹瀉——黏膜病是一種極易傳染，可通過(guò)直接接觸或間接接觸感染健康牦牛的傳染病。正常牛與病牛直接接觸，或者經(jīng)呼吸道的傳染性飛沫、消化道或交配，都會(huì)完成傳播。該病毒可以穿過(guò)胎盤(pán)屏障從母體進(jìn)入胎兒[14]。在養(yǎng)殖過(guò)程中，牦牛因?yàn)檎`食被病毒污染的飼料、水源等，或者接觸周圍的各種工具、護(hù)欄、養(yǎng)殖場(chǎng)中其他宿主而被感染。對(duì)于一些交通較發(fā)達(dá)的地區(qū)，感染率相對(duì)較高。

3 臨床癥狀

牦牛感染病毒性腹瀉——黏膜病時(shí)有2～14 d 的潛伏期。在發(fā)病初期，病牛心率加快、體溫上升到39.5～42 ℃，出現(xiàn)萎靡不振、精神不佳和進(jìn)食減少的常見(jiàn)情況而未引起養(yǎng)殖人員的重視。再經(jīng)過(guò)2 d左右[10]，病牛的口腔、鼻鏡和眼角就開(kāi)始出現(xiàn)明顯癥狀，如口腔黏膜有糜爛、流清涎、牛舌發(fā)紫而上皮逐漸壞死，有的病牛伴隨牙齦潰爛、充滿泡沫狀唾液；鼻鏡比較干燥、鼻黏膜出現(xiàn)充血潰瘍，前期鼻液為淡黃色漿液，逐漸嚴(yán)重為有臭味的膿性液體，個(gè)別也會(huì)伴隨出血；病牛眼球充血，從流淚到流出黏稠分泌物直至出現(xiàn)視物模糊，嚴(yán)重可失明；該病最明顯的臨床癥狀就是出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉，且隨著腹瀉頻繁而病情越來(lái)越嚴(yán)重，剛腹瀉時(shí)，排出淡黃色清水狀的糞便，然后又呈現(xiàn)出含小氣泡的稀粥樣糞便，顏色發(fā)生變化，且?jiàn)A雜有黏液狀血絲、腸道脫落物，嚴(yán)重時(shí)病牛直接拉出血水，此時(shí)為暗紅色，整個(gè)過(guò)程中彌漫著惡臭氣味。腹瀉可持續(xù)1～3周不等，導(dǎo)致牦牛體重快速減輕、脫水及消瘦，也會(huì)導(dǎo)致不孕、母牛流產(chǎn)和死亡等后果。病毒性腹瀉——黏膜病感染之后，部分牦牛呼吸急促、大量飲水、減少進(jìn)食或絕食跛行、獨(dú)處、痛苦呻吟；母牛同時(shí)會(huì)出現(xiàn)減少產(chǎn)奶或停產(chǎn)；犢牛皮膚干燥，有較多皮屑。發(fā)病后的7～25 d，陸續(xù)死亡[10]，強(qiáng)健牦牛死亡更慢，也有個(gè)別不經(jīng)過(guò)治療的病?？祻?fù)，但是康復(fù)后的免疫力降低，不久也會(huì)死亡。

死亡牦牛解剖可見(jiàn)食道黏膜有豎帶狀的出血斑、氣管上皮黏膜分泌膿液、支氣管有紅色氣泡狀炎癥、整個(gè)肺水腫充血，呈現(xiàn)干酪狀。心臟腫脹、心包積液、瓣膜出血。瘤胃黏膜為紫紅色水腫、糜爛、易剝離，真胃黏膜充血壞死[13]。整個(gè)小腸壁增厚，微紅色的空腸和回腸黏膜出血、潰瘍，嚴(yán)重時(shí)會(huì)脫落，腸內(nèi)有紅色、黑色惡臭物；十二指腸、盲腸和大腸結(jié)末端都存在豎狀出血條紋[15]。肝臟水腫充血，膽囊肥大，有膿汁，腎包膜脫落、出血。全身淋巴病變水腫、外觀為黑灰色，小腸淋巴壞死、發(fā)紫，切面為紅色。流產(chǎn)胎兒的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)都有潰瘍和出血。病牛生產(chǎn)的犢牛，小腦發(fā)育障礙、腦室有積水。

4 診斷

4.1 初步診斷

根據(jù)流行病學(xué)和病牛的表現(xiàn)癥狀，對(duì)照病理學(xué)解剖現(xiàn)象，根據(jù)細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果，排除致病菌感染的原因，同時(shí)從寄生蟲(chóng)病、代謝病等各個(gè)方面進(jìn)行排除，從而初步判斷該牦牛是否患病毒性腹瀉——黏膜病[9]。

4.2 病毒抗原檢測(cè)

采集生病的牦牛的新鮮血液、糜爛組織、眼鼻分泌物、腸道黏膜作為分析樣品，然后用研磨、離心等處理方法對(duì)低溫保存的樣品進(jìn)行抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性則判斷該病毒為病毒性腹瀉病毒。

4.3 血清學(xué)檢查

血清學(xué)檢查可以定性定量的分析，普遍的血清診斷方法有中和抗體試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。采用雙份血清作中和試驗(yàn)，滴度升高4倍以上判為陽(yáng)性[16]。重復(fù)性良好，但一些免疫耐受的牛不分泌牛病毒性腹瀉抗體，檢測(cè)結(jié)果為陰性，造成錯(cuò)誤診斷。

4.4 電子顯微鏡檢測(cè)

采集病牛的新鮮淋巴組織或者使用細(xì)胞培養(yǎng)物，做成超薄切片[17]，在電子顯微鏡下觀察，若是呈陽(yáng)性，則可以看到細(xì)胞質(zhì)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池附近存在許多直徑60 nm左右的圓球形病毒顆粒，也可以直接用負(fù)染法或者鉻投影的電子顯微照相測(cè)量病毒的大小和形態(tài)[18]。

4.5 熒光抗體試驗(yàn)

可以采用熒光抗體技術(shù)對(duì)取自病牛體內(nèi)組織或血液的冰凍切片進(jìn)行檢測(cè)，或者分離感染細(xì)胞培養(yǎng)物，用豬瘟熒光抗體試驗(yàn)來(lái)間接診斷，使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)中是否存在有特異性的熒光綠色顆粒，證明BVD 病毒的存在[14]。

4.6 反轉(zhuǎn)錄-聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）

反轉(zhuǎn)錄-聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法具有高度特異性、靈敏性的特點(diǎn)，首先取病料研磨后的上清液，然后提取核酸，根據(jù)病毒的基因組設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行RT-PCR 擴(kuò)增，電泳檢測(cè)[1]。

5 防治措施

5.1 源頭遏制

BVD 的傳染方式多為直接接觸和血液傳播。牛群中易存在病毒攜帶者，人員的流動(dòng)也具有傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)，所以從源頭上遏制病毒的傳播才具有根本性的防治。對(duì)于進(jìn)口牛要加強(qiáng)檢疫力度，防止病牛的輸入，而且對(duì)產(chǎn)地、運(yùn)輸和畜禽交易市場(chǎng)的檢疫也有相關(guān)的措施，了解國(guó)內(nèi)外的疫情動(dòng)態(tài)，堅(jiān)決防止疫區(qū)相關(guān)牛生物制品、肉制品的流入，同時(shí)對(duì)新購(gòu)牦牛種牛做血清中和試驗(yàn)，阻斷疫情傳播。由于豬瘟病毒與本病毒同屬瘟病毒屬，豬感染此病毒的案例也逐漸增加，所以在檢疫方面要加強(qiáng)對(duì)豬的重視和防范[11]。各養(yǎng)殖牛場(chǎng)要減少病毒傳播機(jī)會(huì)，采用全進(jìn)全出的模式，對(duì)疑似病例及時(shí)隔離和診斷，安全養(yǎng)殖。

5.2 消毒殺菌

采用合適的消毒方法對(duì)圈舍環(huán)境、飼養(yǎng)工具、飼養(yǎng)人員和流動(dòng)車輛定期全面消毒，具體可用強(qiáng)力消毒靈、百毒殺、10%聚維酮碘、10%生石灰溶液、5%的氫氧化鈉溶液、1%的漂白粉等試劑對(duì)牦牛養(yǎng)殖場(chǎng)圈舍內(nèi)外環(huán)境早晚消毒[19]，并用生石灰干燥地面，清理糞便，打開(kāi)通風(fēng)口，使病毒不易存在于環(huán)境中，從而阻止疫情的產(chǎn)生和蔓延。在疫情期間應(yīng)格外注意，做好全方位防護(hù)，限制外來(lái)人員進(jìn)出，對(duì)患病牦牛的排泄物及分泌物做好嚴(yán)格無(wú)害化處理，對(duì)牦牛群活動(dòng)的草場(chǎng)也要定期消毒。哈利[9]采用生物熱消毒，將牦牛糞便堆漚發(fā)酵發(fā)熱，從而造成病原體的滅亡，對(duì)控制疫情傳播具有較好的效果。

5.3 疫苗防御

對(duì)于牦牛腹瀉——黏膜病的有效疫苗尚未研發(fā)完全，我國(guó)普遍使用的疫苗為豬瘟兔化弱毒苗，根據(jù)牦牛的具體情況分劑量進(jìn)行肌肉注射，若出現(xiàn)過(guò)敏等不良現(xiàn)象，及時(shí)注射抗過(guò)敏藥物（磷酸地塞米松鈉、腎上腺素等），注射后的牦牛在一段時(shí)間內(nèi)禁用抗生素類藥物。研究表明，注射疫苗的牦牛體溫正常、食欲良好、生殖方面也未發(fā)現(xiàn)不良影響[2]。舒展等[20]對(duì)疫區(qū)內(nèi)疑似個(gè)體進(jìn)行了緊急疫苗注射，進(jìn)而緩解了疫情。紀(jì)金春等[21]曾用豬瘟兔化弱毒苗對(duì)青海省牦牛養(yǎng)殖場(chǎng)，免疫接種數(shù)萬(wàn)頭牦牛，發(fā)現(xiàn)免疫的牦牛死亡率0.27%，而未注射的高達(dá)3.28%，差異明顯。但牛BVD與豬瘟病毒（CSF）為同一個(gè)屬，二者可能發(fā)生交叉感染，所以是否可以長(zhǎng)期的使用豬瘟疫苗，目前尚無(wú)定論，但可以從分子方面入手，通過(guò)基因工程苗來(lái)研制BVD 新型疫苗，目前已有DNA疫苗研究報(bào)告[6]。

5.4 病情監(jiān)控

根據(jù)該養(yǎng)殖場(chǎng)的牦牛養(yǎng)殖具體情況，制定一套詳細(xì)、科學(xué)的免疫方案，對(duì)有發(fā)病史的牛群全部進(jìn)行疫苗免疫，增強(qiáng)抵抗力。確保孕牛飼料營(yíng)養(yǎng)豐富；新生犢牛可以接種弱毒疫苗，加強(qiáng)免疫能力；定時(shí)抽樣檢測(cè)健康牛群的血清，做好記錄，實(shí)時(shí)監(jiān)控，可以到達(dá)預(yù)測(cè)效果，一旦發(fā)現(xiàn)病牛就及時(shí)隔離，防止病原擴(kuò)散進(jìn)而疫情擴(kuò)大。

5.5 緩解癥狀

對(duì)于已經(jīng)感染病毒的牛表現(xiàn)較輕的癥狀時(shí)，先隔離，然后對(duì)癥下藥，以止瀉、補(bǔ)液、防止脫水、酸中毒等來(lái)提高病牛體內(nèi)免疫力，幫助其盡快恢復(fù)。改善酸中毒，可以注射生理鹽水，加入碳酸氫鈉；調(diào)節(jié)腸胃可以注射反芻靈針劑；保護(hù)腸黏膜，服用活性炭即可。如果有嚴(yán)重的發(fā)炎和腸道出血現(xiàn)象，可用穿心蓮、黃連素等混合維生素C 肌肉注射；采用青霉素注射可以治療呼吸道感染；出現(xiàn)腹瀉，靜脈輸液或者服用溫鹽水，情況嚴(yán)重則喂食藥用炭。哈利[9]做了大量試驗(yàn)，選定牧迪888作為清熱解毒藥物，并在疫區(qū)試用，取得很好的治療成效。做好清潔衛(wèi)生，營(yíng)造干燥通風(fēng)環(huán)境，同時(shí)喂食一定量的青霉素、磺胺類藥物來(lái)避免病牛再繼續(xù)感染其他致病菌，避免造成經(jīng)濟(jì)損失[22]。

5.6 病牛撲殺、死牛填埋

在當(dāng)?shù)卣蚣跋嚓P(guān)獸醫(yī)的協(xié)助下對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行死牛清除，指導(dǎo)當(dāng)?shù)啬撩駥?duì)尸體進(jìn)行無(wú)害化處理，就近填埋，大約深2 m左右，覆蓋一定的燒堿。將所有工具或者污染的環(huán)節(jié)徹底消毒。

5.7 積極宣傳、普及知識(shí)

在養(yǎng)殖片區(qū)進(jìn)行宣傳牦牛病毒性腹瀉——黏膜病的知識(shí)，結(jié)合電視、廣播或者組織培訓(xùn)，讓當(dāng)?shù)啬撩裾J(rèn)識(shí)到牦牛病毒性腹瀉——黏膜病的危害，同時(shí)還可以為養(yǎng)殖戶個(gè)體進(jìn)行專門(mén)調(diào)查，協(xié)助控制病情。