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    動(dòng)物疫病監(jiān)測的常用樣品采集方法及注意事項(xiàng)

    2021-12-04 20:29:24吳學(xué)青王志遠(yuǎn)李華林
    養(yǎng)殖與飼料 2021年1期
    關(guān)鍵詞:冷藏器官寧夏

    吳學(xué)青 王志遠(yuǎn) 李華林

    1.寧夏吳忠市利通區(qū)扁擔(dān)溝鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站,寧夏吳忠751100;2.寧夏吳忠市利通區(qū)金積鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站,寧夏吳忠751100;3.寧夏吳忠市利通區(qū)東塔寺鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)工作站,寧夏吳忠751100

    1 監(jiān)測采樣的一般原則

    1)應(yīng)該遵循適時(shí)、典型、無菌、適量和生物統(tǒng)計(jì)的原則。

    2)凡是急性死亡病例、發(fā)現(xiàn)有血液凝固不良、口鼻、肛門天然孔出血、尸僵不全等疑似炭疽癥狀表現(xiàn)的,應(yīng)先采集耳尖血液制作血涂片染色鏡檢,發(fā)現(xiàn)呈竹節(jié)狀排列的大桿菌確診為炭疽病的,嚴(yán)禁解剖。

    3)采樣時(shí)應(yīng)先采集無菌心、肺、肝等實(shí)質(zhì)器官,再采集胃腸、糞便等容易污染的組織,避免交叉感染。

    4)要根據(jù)不同的檢驗(yàn)?zāi)康囊蠛蛯Σ±某醪脚袛喾治霾杉瘶悠?。采集的病料樣品?yīng)具有代表性,采集的組織器官病變要明顯。病因不明時(shí),可對組織器官、分泌物、排泄物等進(jìn)行全面采集。

    5)采集血液、O-P 液等樣品應(yīng)提前禁食4~6 h。采集血樣應(yīng)根據(jù)不同采樣對象、檢驗(yàn)項(xiàng)目及所需血量多少采取不同方法與部位。

    6)采樣時(shí)做好個(gè)人生物安全防護(hù),穿好防護(hù)服,佩戴好口罩、帽子、膠套、手套等防護(hù)用品,避免人畜共患病感染或環(huán)境污染發(fā)生。

    7)采樣數(shù)量要求:診斷時(shí),可采樣1~3 只(頭)病死動(dòng)物的組織器官;疫苗免疫注射抗體效果主動(dòng)監(jiān)測時(shí),免疫后21 d 每個(gè)場(戶)采集30 份血樣;種群疫病監(jiān)測凈化,制定方案確定采樣次數(shù)和采樣日期,逐頭采樣。疫情監(jiān)測或流行病學(xué)調(diào)查時(shí),采樣數(shù)量要符合生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。

    2 常用監(jiān)測樣品的采集方法及技術(shù)要求

    1)抗凝血:即加抗凝劑的血液,常用來作細(xì)菌或病毒檢驗(yàn)樣品。采集的血液立即與抗凝劑充分混勻,防止凝固,密封貼上標(biāo)簽,冷藏。

    2)非抗凝血:即不需要加抗凝劑的血液,待血液凝固后血清析出,常用來作血清學(xué)試驗(yàn)。血清制備方法:血樣在室溫下(不能冷藏)傾斜放置2~4 h(有利于血清析出),待血液凝固自然析出血清,再經(jīng)離心機(jī)離心5 min,分離出血清,將血清移入2 mL 塑料離心管中,封口貼標(biāo),4 ℃冷藏。若需長期保存,將血清置于-20 ℃冷凍。

    3)禽泄殖腔拭子:將滅菌的拭子插入泄殖腔大約深1.5~5.0 cm 旋轉(zhuǎn)并刮取黏膜表層的組織或糞便,立即將樣品端置于含有多種抗生素、15%以上甘油的PBS 液的2 mL 離心管中,做好標(biāo)記,密封低溫保存。主要用來監(jiān)測高致病性禽流感等疫病。

    4)禽喉氣管拭子:將消毒滅菌的棉拭子從口腔插入至咽的后部直達(dá)喉氣管,輕柔擦拭并緩慢旋轉(zhuǎn),將拭子置于保存緩沖液之中。主要用來監(jiān)測高致病性禽流感等疫病。

    5)鼻腔拭子:主要用來監(jiān)測羊小反芻獸疫、非洲豬瘟等疫病。用滅菌的棉拭子伸入鼻腔采集分泌物,隨即將拭子置于有雙抗的PBS 保存液中,密封低溫保存。

    6)牛羊O-P 液(咽食道分泌物):探杯在采樣前經(jīng)0.2%檸檬酸或1%~2%氫氧化鈉溶液中浸泡3~5 min,再用與動(dòng)物體溫一致的清水沖洗探杯后使用,每采集完1 頭后,探杯要進(jìn)行消毒并反復(fù)清洗以防止酸堿灼傷動(dòng)物食道。采樣時(shí)要保定好動(dòng)物,將探杯隨吞咽動(dòng)作小心插入食道5~10 cm 處,輕輕來回抽動(dòng)2~3 次,然后將探杯拉出,取出5~10 mL O-P 液,倒入含有等量細(xì)胞培養(yǎng)液或磷酸緩沖液的滅菌瓶或離心管中,充分搖勻密封,冷藏送檢。主要用于PCR試驗(yàn),監(jiān)測動(dòng)物口蹄疫等疫病。

    7)皮膚樣品:活體動(dòng)物的病變皮膚,如有新鮮的水泡皮、結(jié)節(jié)、痂皮等可直接剪取3~5 g,置于保存液中。疑似口蹄疫發(fā)病后期,采樣直接取舌體皮膚檢測效果好。

    8)實(shí)質(zhì)器官:動(dòng)物心、肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)等實(shí)質(zhì)器官,病料要求新鮮、無污染。必須采用無菌操作技術(shù)和已消毒的配套器械,若器械污染,在取組織樣品之前,應(yīng)用酒精燈火焰消毒手術(shù)刀、剪、鑷等器械,所采樣品分別放入滅菌袋中,密封貼標(biāo),注明動(dòng)物、組織名稱、日期,防止病料相互感染,冷藏送檢。若運(yùn)送時(shí)間較長,可作冰凍狀態(tài)保存。

    9)腸管的采集:在病變腸管兩端用縫合線扎緊打結(jié),從結(jié)扎線外側(cè)端剪斷,把該段腸管放置于滅菌袋或器皿中,冷藏送檢。

    10)牛、羊腦采集:主要用于海綿狀腦病的監(jiān)測。在枕骨大孔處用剪刀剪開腦硬膜,目的是便于插入采樣勺。然后用食指伸入枕骨大孔中,沿著腔壁轉(zhuǎn)1 圈,目的是分離切斷腦髓與腔壁相連的神經(jīng)和血管,以便于腦髓順利挖出。緊貼枕骨大孔的腔壁插入采樣勺,以免破壞腦髓。插入5~7 cm 深度(羊腦則為4 cm),然后扳住勺子手柄,往外挖出腦組織,延腦即可完整取出,注意腦組織采樣需在動(dòng)物死亡之后盡快采集并-70 ℃冷凍保存。

    3 樣品采集、保存、記錄、運(yùn)送環(huán)節(jié)注意事項(xiàng)

    1)心、肝、腎等實(shí)質(zhì)器官采樣,必須包括病灶及臨近正常組織,以便于對照。死亡動(dòng)物要盡快采樣,夏天高溫不能超過6 h,冬天不得超過24 h。

    2)血液、O-P 液等樣品在采集前禁食8~12 h,可少量飲水,以免胃內(nèi)容物反流污染O-P 液。

    3)樣品信息記錄要填寫完整:所有樣品都要認(rèn)真填寫采樣表,包括場戶名、場址、畜種、年齡、聯(lián)系人及電話、采樣數(shù)量、名稱、編號、養(yǎng)殖規(guī)模、免疫情況、臨床表現(xiàn)、發(fā)病數(shù)量、死亡數(shù)量及時(shí)間、治療用藥記錄、飼料類型等。不同樣品應(yīng)獨(dú)立密封包裝,樣品標(biāo)簽用記號筆注明樣品名稱、編號、采樣日期,采樣人和被采樣單位簽字或蓋章確認(rèn),應(yīng)將采樣表及所采樣品一起送實(shí)驗(yàn)室。

    4)樣品保存:血清、咽-泄殖腔拭子等樣品為便于保存,可加入青霉素、鏈霉素防止腐敗、抑制雜菌繁殖。

    5)樣品運(yùn)送:采集的樣品以最快最直接的途徑送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。樣品24 h 內(nèi)送達(dá),可放在4 ℃冷藏箱內(nèi)運(yùn)送;24 h 內(nèi)不能送達(dá)的可把樣品進(jìn)行冷凍,并以此狀態(tài)運(yùn)送。

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