鄂藥坎庫拉的化學(xué)成分研究

楊敏飛，張昌龍，劉 杏，高 陽，張海龍*

(1.西安市第五醫(yī)院，西安 710082；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061；3.西安市高陵區(qū)婦幼保健院，西安 710200)

坎庫拉(HeracleumdissectumLedeb.)又稱興安獨活、牛防風(fēng)、山芹菜、老山芹等，是傘形科獨活屬的多年生草本植物，其自然生長環(huán)境主要是山坡針闊葉混交林及雜木林下，主要分布在我國黑龍江和吉林等地區(qū)[1-3]。該植物高度一般在60～150 cm，莖單一且較為直立，分支很少，根莖頂端較密集，1年生坎庫拉早期葉片大概有3～5片，從第2年開始開出白花并結(jié)出果實，到了夏季會長出長莖，開出的花呈傘形。該植物全株可入藥，味甘辛，性涼，是鄂倫春族的一種常用民族藥，可用于降血脂、降血壓和降血糖，同時具有抗疲勞、抗輻射和減肥益智等功能；此外，該植物對風(fēng)濕、類風(fēng)濕、心血管病、癌癥化療及化療后的康復(fù)具有顯著的食療效果。坎庫拉也是美味的山野菜，具有獨特香氣，被譽為山野菜中的“綠色黃金”，含有豐富的營養(yǎng)和膳食纖維，可促進胃腸蠕動，清理腸道垃圾。目前，除本課題組前期的研究成果外，國內(nèi)外尚未見其系統(tǒng)化學(xué)成分及藥理活性的研究報道。為進一步闡明坎庫拉的化學(xué)成分，本課題組運用各種色譜技術(shù)對坎庫拉的甲醇提取物進行研究，分離鑒定出12個化合物，其中8個化合物為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Puri Master 5000型高效液相色譜儀(上?？普苌萍加邢薰?；Megres C18型分析色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Megres C18型半制備型色譜柱(250 mm×10.0 mm，5 μm)，江蘇漢邦科技有限公司；AVANCE Ⅲ HD 400 MHz型核磁共振儀、AVANCE Ⅲ HD 600 MHz型核磁共振儀和RP-C18，均購自德國Merck公司。

1.2試藥 坎庫拉于2012年采集于黑龍江省通北林業(yè)局南北河林場，經(jīng)西安交通大學(xué)生藥教研室牛曉峰教授鑒定為坎庫拉(HeracleumdissectumLedeb.)的根，樣品現(xiàn)保存于西安交通大學(xué)藥學(xué)院(編號120809)；柱層析硅膠(100～200目，200～300目)，青島海洋化工有限公司；氘代甲醇(CD3OD)、重水(D2O)和氘代氯仿(CDCl3)，均購自上海務(wù)勝生物科技有限公司；甲醇、氯仿、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等均為分析純，均購自天津市大茂化學(xué)試劑廠。

2 提取與分離

2.1坎庫拉的提取 取坎庫拉根6.5 kg，干燥后剪成小段，甲醇冷浸2 d，加熱回流提取3次，每次3 h，合并提取液，減壓濃縮回收溶劑，得總浸膏1.016 kg(提取率為15.63%)，取浸膏(560.5 kg)，用水懸浮分散，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取，分別減壓濃縮后得到石油醚萃取物68.3 g、氯仿萃取物84.4 g、乙酸乙酯萃取物9.4 g、正丁醇萃取物130.1 g和水層253.9 g。

2.2化學(xué)成分分離 取正丁醇萃取物111.6 g，使用硅膠(200～300目，850.0 g)柱層析進行分離，以氯仿-甲醇(1∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、8∶1、6∶1、3∶1、2∶1、1∶1、0∶1)梯度洗脫，合并后得到30個流份(Bu-1～Bu-30)。Bu-5經(jīng)反相硅膠柱色譜進一步分離，以甲醇-水(5∶95、100∶0)進行梯度洗脫，得到21個流份(Bu-5-1～Bu-5-21)。Bu-5-4經(jīng)HPLC(甲醇∶水=5∶95)分離純化得到化合物1(6.0 mg)，Bu-5-3經(jīng)HPLC(甲醇∶水=5∶95)分離純化得到化合物2(151.0 mg)和化合物3(6.0 mg)，Bu-5-13經(jīng)HPLC(甲醇∶水=35∶65)分離純化得到化合物4(5.2 mg)，Bu-5-6經(jīng)HPLC(甲醇∶水=15∶85)分離純化得到化合物5(2.7 mg)，Bu-3經(jīng)反相硅膠柱色譜(ODS)進一步分離，以甲醇-水(10∶95，100∶0)進行梯度洗脫，得到5個流份(Bu-3-1～Bu-3-5)，Bu-3-1經(jīng)HPLC(甲醇∶水=50∶50)分離純化得到化合物6(2.5 mg)。

取乙酸乙酯萃取物9.4 g，使用硅膠(200～300目，180 g)柱層析進行分離，以氯仿-甲醇(1∶0、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1、0∶1)梯度洗脫合并后得到19個流份(EA-1～EA-19)，EA-14經(jīng)ODS柱色譜進一步分離，以甲醇-水(10∶90、30∶70、50∶50、70∶30、80∶20、90∶10、100∶0)進行梯度洗脫，得到15個流份(EA-14-1～EA-14-15)。EA-14-8經(jīng)HPLC(甲醇∶水=30∶70)分離純化得到化合物7(24.0 mg)，EA-14-6經(jīng)HPLC(甲醇∶水=20∶80)分離純化得到化合物8(9.6 mg)，EA-14-3經(jīng)HPLC(甲醇∶水=5∶95)分離純化得到化合物9(7.3 mg)。

取氯仿萃取物81.1 g，使用硅膠(200～300目，795 g)柱層析進行分離，以氯仿-甲醇(1∶0、200∶1、100∶1、50∶1、30∶1、10∶1、2∶1、0∶1)梯度洗脫合并后得到33個流份(C-1～C-33)。C-13經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇(100∶1、80∶1、50∶1、30∶1、15∶1、10∶1、0∶1)進行梯度洗脫，得到11個流份(C-13-1～C-13-11)。C-13-5經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)進行洗脫得到2個流份(C-13-5-1～C-13-5-2)，C-13-5-2經(jīng)石油醚-乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物10(15.4 mg)；C-7經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(15∶1)進行洗脫，得到4個流份(C-7-1～C-7-4)，C-7-1經(jīng)HPLC(甲醇-水=60∶40)分離純化得到化合物11(8.0 mg)；C-6經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(20∶ 1、10∶1、2∶1)進行梯度洗脫，得到8個流份(C-6-1～C-6-8)，C-6-3經(jīng)HPLC(甲醇∶水=60∶40)分離純化得到化合物12(17.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C6H6O3。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH9.54 (1H，s，H-1)，7.38 (1H，d，J=3.5 Hz，H-3)，6.58 (1H，d，J=3.5 Hz，H-4)，4.61 (2H，s，H-6)。13C-NMR(150 MHz，CD3OD)，δC179.4 (C-1)，163.2 (C-2)，124.8 (C-3)，110.9 (C-4)，153.9 (C-5)，57.6 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[4]，故鑒定化合物1為5-羥甲基糠醛。

化合物2無色針晶，易溶于甲醇，分子式為C9H18O6。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH4.38 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.40 (1H，m，H-2′)，3.31 (2H，m，H-3′，4′)，3.19 (1H，m，H-5′)，3.89 (1H，dd，J=11.9，1.8 Hz，H-6′a)，3.71 (1H，dd，J=11.9，5.4 Hz，H-6′b)，4.08 (1H，hept，J=6.2 Hz，H-2)，1.27 (3H，d，J=6.3 Hz，H-1)，1.23 (3H，d，J=6.2 Hz，H-3)。13C-NMR(150 MHz，CD3OD)，δC102.4 (C-1′)，75.0 (C-2′)，78.0 (C-3′)，71.6 (C-4′)，77.7 (C-5′)，62.7 (C-6′)，22.0 (C-1)，72.5 (C-2)，23.8 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[5]，故鑒定化合物2為1-O-isopropyl-β-D-glucopyranoside。

化合物3無色油狀，易溶于甲醇，分子式為C9H18O6。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH4.25 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.34 (1H，m，H-2′)，3.26 (2H，m，H-3′，4′)，3.17 (1H，m，H-5′)，3.86 (1H，m，H-6′a)，3.66 (1H，m，H-6′b)，3.86 (1H，m，H-1a)，3.50 (1H，m，H-1b)，1.64 (2H，m，H-2)，0.95 (3H，t，J=7.4 Hz，H-3)。13C-NMR(150 MHz，CD3OD)，δC104.4 (C-1′)，75.2 (C-2′)，77.9 (C-3′)，72.5 (C-4′)，78.1 (C-5′)，62.8 (C-6′)，71.7 (C-1)，24.0 (C-2)，10.8 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[5]，故鑒定化合物3為1-O-propyl-β-D-glucopyranoside。

化合物4無定形粉末，易溶于甲醇，分子式為C16H28O7。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)，δH5.04 (1H，dd，J=10.8 Hz，H-1a)，5.20 (1H，d，J=17.5 Hz，H-1b)，5.91 (1H，dd，J=17.4，10.8 Hz，H-2)，2.09 (2H，m，H-4)，1.54 (2H，m，H-5)，5.48 (1H，t，J=7.1 Hz，H-6)，4.03 (1H，d，J=11.5 Hz，H-8a)，4.19 (1H，d，J=11.5 Hz，H-8b)，1.25 (3H，s，H-9)，1.67 (3H，s，H-10)，4.24 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.20 (1H，m，H-2′)，3.34 (1H，m，H-3′)，3.27 (1H，m，H-4′)，3.22 (1H，m，H-5′)，3.66 (1H，dd，J=11.8，5.6 Hz，H-6′a)，3.85 (1H，m，H-6′b)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)，δC112.1 (C-1)，146.2 (C-2)，73.8 (C-3)，42.9 (C-4)，23.5 (C-5)，130.1 (C-6)，132.9 (C-7)，75.9 (C-8)，27.6 (C-9)，14.1 (C-10)，102.6 (C-1′)，75.1 (C-2′)，78.2 (C-3′)，71.7 (C-4′)，77.9 (C-5′)，62.8 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[6]，故鑒定化合物4為betulalbuside A。

化合物5無定形粉末，易溶于甲醇，分子式為C10H20O6。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH4.23 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.18 (1H，m，H-2′)，3.32 (2H，m，H-3′，H-6′b)，3.27 (1H，m，H-4′)，3.24 (1H，m，H-5′)，3.67 (2H，m，H-1b，H-6′a)，3.86 (1H，d，J=11.8 Hz，H-1a)，1.89 (1H，m，H-2)，0.93 (6H，t，J=6.0 Hz，H-3，4)。13C-NMR (150 MHz，CD3OD)，δC104.6 (C-1′)，75.2 (C-2′)，78.2 (C-3′)，71.7 (C-4′)，77.9 (C-5′)，62.8 (C-6′)，77.5 (C-1)，29.7 (C-2)，19.7 (C-3，4)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[7]，故鑒定化合物5為1-O-isobutyl-β-D-glucopyranoside。

化合物6白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C20H24O9。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH6.19 (1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，7.86 (1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，7.40 (1H，d，J=8.3 Hz，H-5)，6.77 (1H，d，J=8.3 Hz，H-6)，3.51(1H，m，H-1′a)，3.15 (1H，m，H-1′b)，4.93 (1H，dd，J=9.7，8.5 Hz，H-2′)，1.36 (3H，s，H-4′)，1.38 (3H，s，H-5′)，4.59 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.12 (1H，m，H-2″)，3.33 (1H，m，H-3″)，3.31 (1H，m，H-4″)，3.35 (1H，m，H-5″)，3.52(1H，dd，J=11.9，5.1 Hz，H-6″a)，3.45(1H，dd，J=11.8，2.5 Hz，H-6″b)。13C-NMR (150 MHz，CD3OD)，δC165.6 (C-2)，112.4 (C-3)，146.3 (C-4)，114.5 (C-4a)，130.3 (C-5)，107.9 (C-6)，163.2 (C-7)，115.5 (C-8)，152.6 (C-8a)，28.3 (C-1′)，91.9 (C-2′)，79.2 (C-3′)，23.8 (C-4′)，22.4 (C-5′)，98.9 (C-1″)，75.1 (C-2″)，77.5 (C-3″)，71.4 (C-4″)，78.2 (C-5″)，62.4 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[8]，故鑒定化合物6為isopraerosid Ⅳ。

化合物7白色晶體，易溶于甲醇，分子式為C17H16O9。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)，δH6.39 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，8.01 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.32 (1H，s，H-5)，7.91 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.16 (1H，d，J=1.8 Hz，H-3′)，5.19 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，3.42 (1H，m，H-2″)，3.54 (3H，m，H-3″，4″，5″)，3.92(1H，dd，J=12.1，1.9 Hz，H-6″a)，3.71(1H，dd，J=12.1，5.9 Hz，H-6″b)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)，δC161.5 (C-2)，113.5 (C-3)，145.4 (C-4)，109.0 (C-5)，140.4 (C-6)，146.6 (C-7)，118.3 (C-8)，143.4 (C-9)，113.9 (C-10)，147.3 (C-2′)，103.5 (C-3′)，101.4 (C-1″)，73.5 (C-2″)，76.7 (C-3″)，69.9 (C-4″)，77.1 (C-5″)，61.2 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，故鑒定化合物7為heratomol-6-β-D-glucopyranoside。

化合物8白色粉末，易溶于水，分子式為C10H13N5O4。1H-NMR (400 MHz，D2O)，δH8.19 (1H，s，H-2)，8.29 (1H，s，H-8)，6.03 (1H，d，J=6.1 Hz，H-1′)，4.76 (1H，m，H-2′)，4.41 (1H，s，H-3′)，4.27 (1H，s，H-4′)，3.90 (1H，d，J=12.8 Hz，H-5′a)，3.82 (1H，d，J=13.0 Hz，H-5′b)。13C-NMR(100 MHz，D2O)，δC152.3 (C-2)，148.2 (C-4)，118.8 (C-5)，155.3 (C-6)，140.4 (C-8)，88.3 (C-1′)，70.6 (C-2′)，73.7 (C-3′)，85.7 (C-4′)，61.4 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[10]，故鑒定化合物8為腺苷。

化合物9白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C9H12N2O6。1H-NMR (600 MHz，CD3OD)，δH5.71 (1H，d，J=7.7 Hz，H-5)，8.02 (1H，d，J=7.7 Hz，H-6)，5.91 (1H，d，J=2.6 Hz，H-1′)，4.16 (1H，m，H-2′)，4.19 (1H，m，H-3′)，4.02 (1H，m，H-4′)，3.85 (1H，d，J=12.2 Hz，H-5′a)，3.75 (1H，d，J=12.1 Hz，H-5′b)。13C-NMR(150 MHz，CD3OD)，δC152.5 (C-2)，166.2 (C-4)，102.7 (C-5)，142.7 (C-6)，90.7 (C-1′)，71.3 (C-2′)，75.7 (C-3′)，86.4 (C-4′)，62.3 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[11]，故鑒定化合物9為尿苷。

化合物10無定形粉末，易溶于甲醇，分子式為C16H16O6。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)，δH6.36 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，7.99 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.52 (1H，s，H-5)，7.87 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.93 (1H，d，J=2.2 Hz，H-3′)，4.74 (1H，dd，J=10.3，2.7 Hz，H-1″a)，4.44 (1H，dd，J=10.3，8.2 Hz，H-1″b)，3.86 (1H，dd，J=8.2，2.7 Hz，H-2″)，1.28 (3H，s，H-4″)，1.24 (3H，s，H-5″)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)，δC162.7 (C-2)，115.0 (C-3)，144.2 (C-4)，114.8 (C-5)，127.9 (C-6)，149.1 (C-7)，133.1 (C-8)，146.7 (C-9)，118.0 (C-10)，148.5 (C-2′)，107.9 (C-3′)，76.5 (C-1″)，78.3 (C-2″)，72.7 (C-3″)，26.8 (C-4″)，25.0 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物10為獨活屬醇。

化合物11白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C16H14O5。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)，δH6.37 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，8.01 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.55 (1H，s，H-5)，7.88 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.95 (1H，d，J=2.2 Hz，H-3′)，4.42 (1H，dd，J=11.1，8.5 Hz，H-1″a)，4.51 (2H，m，H-1″b，2″)，5.12 (1H，m，H-4″a)，4.96 (1H，m，H-4″b)，1.83 (3H，s，H-5″)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)，δC162.7 (C-2)，115.0 (C-3)，146.7 (C-4)，118.0 (C-4a)，115.0 (C-5)，127.9 (C-6)，149.2 (C-7)，132.9 (C-8)，144.3 (C-8a)，148.5 (C-2′)，108.0 (C-3′)，77.4 (C-1″)，75.3 (C-2″)，145.7 (C-3″)，113.1 (C-4″)，18.9 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物11為isogosferol。

化合物12無色晶體，易溶于甲醇，分子式為C12H8O4。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)，δH6.28 (1H，d，J=9.8 Hz，H-3)，8.17 (1H，d，J=9.8 Hz，H-4)，7.15 (1H，s，H-8)，7.60 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.03 (1H，d，J=2.3 Hz，H-3′)，4.28 (3H，s，5-OCH3)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)，δC161.6 (C-2)，112.6 (C-3)，139.5 (C-4)，149.7 (C-5)，112.8 (C-6)，158.5 (C-7)，94.0 (C-8)，152.8 (C-9)，106.5 (C-10)，145.0 (C-2′)，105.2 (C-3′)，60.2 (5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[14]，故鑒定化合物12為佛手柑內(nèi)酯。

4 討論

民族藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分，是各族人民在長期與疾病斗爭過程中積累的寶貴經(jīng)驗，是民族文化的瑰寶。繼承和發(fā)揚我國的民族醫(yī)藥，尤其是少數(shù)民族醫(yī)藥，運用現(xiàn)代科技闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制，不僅可以推動民族地區(qū)經(jīng)濟增長，而且可以促進我國當(dāng)代醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展?？矌炖嵌鮽惔鹤宄Ｓ玫拿褡逅帲哂酗@著的抗糖尿病和抗高血壓的作用。本研究結(jié)果以及本課題組前期研究結(jié)果[15-18]均表明，鄂藥坎庫拉中的化學(xué)成分主要是香豆素類化合物，具有廣泛的生物活性[19-20]。本研究中得到的12個化合物中有8個為首次從該植物中分離得到，這為闡明坎庫拉的化學(xué)成分研究奠定了基礎(chǔ)，也為坎庫拉的綜合開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。