一例豬鏈球菌感染的診斷體會

周彥軍

(江蘇省射陽縣動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇 射陽 224300)

0 引言

豬鏈球菌病是由豬源鏈球菌所引起的一種急性、烈性、高致死性的傳染病，該病在全球范圍內(nèi)呈廣泛性分布，幾乎在所有養(yǎng)豬的國家和地區(qū)都有報道。該病首次于1951年在荷蘭被發(fā)現(xiàn)可以感染仔豬，并于1996年從仔豬的敗血癥腦膜炎和關(guān)節(jié)炎中分離出其病原，1987年研究人員用過化學(xué)分類法及DNA同源性研究認(rèn)為該病原是一種新種鏈球菌，隨后該病在歐洲、美洲、大洋洲、亞洲等多個國家和地區(qū)都有報道。在我國該病首次暴發(fā)于長江三角洲地區(qū)，隨后全國大多數(shù)省市均有報道，且隨著大規(guī)?；B(yǎng)殖場數(shù)量的上升，養(yǎng)殖密度增加，該病的發(fā)展情況趨于嚴(yán)重，且在不少地區(qū)呈暴發(fā)性流行，是危害我國及全球養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要傳染病之一，被我國主管部門規(guī)定為二類動物疫病。

引起豬鏈球菌的病原豬鏈球菌是一種革蘭氏陽性球菌，屬于球菌科鏈球菌屬，根據(jù)其莢膜多糖的成分不同可以將其分為35個不同的血清型，其中2型豬鏈球菌是目前已知的致病性最強(qiáng)、影響范圍最大的血清型，且多數(shù)豬鏈球菌病均是由2型豬鏈球菌引起。豬鏈球菌同樣是一類危害性極強(qiáng)的人畜共患病病原，可以引起人的敗血癥、關(guān)節(jié)炎及腦膜炎等癥狀，嚴(yán)重者可以引起死亡。臨床上豬鏈球菌常與其他包括細(xì)菌、病毒及寄生蟲等病原微生物引起混合或繼發(fā)感染，這進(jìn)一步增大了預(yù)防和治療的難度，常會導(dǎo)致較高病死率，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，我國有關(guān)部門將其定為二類疫病。

2021年2月，本地某農(nóng)戶購入的新生仔豬突然發(fā)病死亡，經(jīng)專業(yè)獸醫(yī)師診斷為豬鏈球菌感染引起的豬鏈球菌病，經(jīng)過有效的治療疫情得到有效的控制。

1 發(fā)病情況

2021年2月，本地某農(nóng)戶自行購入的新生仔豬突然出現(xiàn)體溫升高、精神沉郁、食欲減退或廢絕、呼吸困難、糞便干結(jié)等現(xiàn)象，部分病程嚴(yán)重的仔豬有角弓反張、抽搐等神經(jīng)癥狀，且在發(fā)病后第3天便有發(fā)病仔豬死亡。發(fā)病后農(nóng)戶主使用阿莫西林及雙黃連等藥物進(jìn)行緊急治療，并未取得明顯效果。筆者在接到農(nóng)戶電話問診后便前往豬場進(jìn)行實(shí)地調(diào)查，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)豬場為全封閉設(shè)計，豬舍內(nèi)溫度低、濕度高，通風(fēng)不足，糞便清理不及時，有明顯的刺激性氣味。在豬舍內(nèi)出現(xiàn)發(fā)病仔豬后，農(nóng)戶主并未及時將發(fā)病仔豬與新生仔豬進(jìn)行嚴(yán)格的隔離飼養(yǎng)，且經(jīng)筆者詢問后得知，該批仔豬為農(nóng)戶主經(jīng)私人購得，未經(jīng)正規(guī)渠道，免疫情況不清楚。

2 臨床表現(xiàn)

發(fā)病初期，發(fā)病仔豬主要癥狀為發(fā)燒，體溫升高至41℃～43℃，精神萎靡不振，不喜動。食欲減退或廢絕，喜喝臟水。糞便干結(jié)發(fā)硬，排出黑色干硬糞便。呼吸困難，可視黏膜因缺氧而發(fā)紺。眼瞼分泌物增多，鼻孔流出大量濃稠鼻液。隨著病情的延長出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大、跛行等癥狀。部分病情嚴(yán)重仔豬出現(xiàn)角弓反張，抽搐，盲目行走等神經(jīng)病癥。在發(fā)病后第3天部分發(fā)病仔豬開始死亡。

3 解剖變化

對病死仔豬進(jìn)行剖檢后可見明顯的敗血癥的病理變化，全身多臟器及黏膜大面積充血、出血。打開胸腔后可發(fā)現(xiàn)肺臟大面積充血淤血，肺間質(zhì)增寬。心臟病變嚴(yán)重，心包內(nèi)有大量的漿液滲出物，心外膜有出血點(diǎn)。打開腹腔后可發(fā)現(xiàn)肝臟腫大淤血；脾臟腫大，脾臟被膜及邊緣有大量黑色梗死灶；腎臟腫脹淤血，切開后可發(fā)現(xiàn)腎皮質(zhì)和腎髓質(zhì)上有明顯的出血斑點(diǎn)。胃底部有出血斑，表面有大量的黃色分泌物，腸道黏膜大面積出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大。

4 病原鑒定

無菌采集發(fā)病死亡仔豬的脾臟、肺臟等臟器，制備臟器觸片后進(jìn)行固定和革蘭氏染色，鏡檢可見大量的球型菌革蘭氏陽性菌，且細(xì)菌呈單個散在或呈長度不等的鏈狀分布。將無菌采集的臟器接種于含5%兔鮮血的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)基上長出邊緣整齊且表面光滑濕潤的半透明露珠樣小菌落，且細(xì)菌具有溶解紅細(xì)胞的能力，菌落周圍呈β溶血。挑去單個菌落后進(jìn)行染色鏡檢，可發(fā)現(xiàn)與臟器觸片鏡檢相似的革蘭氏陽性球型菌。結(jié)合觸片檢測及病原培養(yǎng)的特性，初步推斷本次分離的病原微生物為豬源鏈球菌，但是否有其他病原微生物混合感染仍需要進(jìn)一步檢測。

5 生化鑒定

為了對分離得到的病原微生物進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，將分離得到的病原微生物接種于含有5%兔血的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，待連續(xù)鏡檢2次視野下見不到其他形狀的微生物時可確定為純化完全。將純化好的病原微生物接種于含有5%兔血的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18～24 h，使用無菌的生理鹽水將細(xì)菌培養(yǎng)物洗下，對比麥?zhǔn)勘葷峁苓m當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)物濃度后接種于細(xì)菌微量生化堅定管中，37℃培養(yǎng)18～24 h后，將生化檢測結(jié)果與伯杰氏手冊進(jìn)行比對。病原分離物的生化鑒定結(jié)果為葡萄糖“+”，乳糖“-”，蔗糖“+”，麥芽糖“+”，淀粉“+”，山梨醇“-”，甘露醇“-”，水楊苷“-”，木糖“-”，阿拉伯糖“-”，甘油“-”，VP試驗“-”，MR試驗“+”，觸酶試驗“+”。生化鑒定結(jié)果符合鏈球菌的生化特性，可確定本次分離的病原微生物為豬源鏈球菌。

6 其他病原檢測

豬鏈球菌常與其他病原微生物造成混合感染或繼發(fā)感染，造成診斷及治療困難。為了確定本次疫情是否有其他病原微生物感染，參考文獻(xiàn)設(shè)計了豬瘟及豬繁殖呼吸綜合征等豬常見病毒病原的鑒定引物。使用商品化試劑盒提取病死仔豬的脾臟、肺臟的總RNA，并反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行PCR檢測，PCR檢測結(jié)果為豬瘟及豬繁殖呼吸綜合征陰性?？纱_定本次疫情僅為豬源鏈球菌感染引起，無其他病原微生物混合感染存在。

7 藥敏試驗

為了篩選針對本次分離的豬鏈球菌的高度敏感藥物，防止細(xì)菌產(chǎn)生多重耐藥性，筆者采用K-B藥敏紙片對本次分離的豬源鏈球菌的耐藥譜進(jìn)行鑒定。藥敏結(jié)果顯示本次分離的豬源鏈球菌對氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻呋4種抗生素高度敏感，對強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、阿米卡星3種抗生素中度敏感，對慶大霉素、林可霉素、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、大觀霉素、鏈霉素、環(huán)丙沙星、多粘菌素和磺胺嘧啶9種抗生素耐藥。本次分離的豬源鏈球菌是一株耐藥譜較廣的多重耐藥菌株，其原因可能與生產(chǎn)養(yǎng)殖中抗生素濫用有關(guān)，這對有關(guān)疾病的治療會帶來巨大的難度。對病情較輕的仔豬可以使用高度敏感的抗生素進(jìn)行治療，如氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟及頭孢噻呋4種抗生素高度敏感中的2～3種進(jìn)行聯(lián)合給藥或交替給藥。

8 防治與體會

1)當(dāng)豬群中出現(xiàn)疑似病例時應(yīng)及時將健康仔豬和發(fā)病仔豬隔離飼養(yǎng)，并嚴(yán)格控制兩個區(qū)域之間的人員和物品流動，以有效地切斷病原傳播途徑。而本次疫情中農(nóng)戶主的隔離意識不強(qiáng)，在發(fā)現(xiàn)有可疑發(fā)病仔豬后未及時將發(fā)病仔豬與健康仔豬隔離飼養(yǎng)，病原微生物可以經(jīng)發(fā)病仔豬感染其他免疫力較低的健康仔豬，導(dǎo)致疫情的進(jìn)一步擴(kuò)大。

2)豬鏈球菌在養(yǎng)殖場的污染環(huán)境中可以長期存活，其中在豬的糞便中可以存活長達(dá)3個月，因此在豬場暴發(fā)豬鏈球病后要對豬舍環(huán)境及飼養(yǎng)用具進(jìn)行徹底消毒，同時對糞便和病死仔豬尸體進(jìn)行無害化處理，防止殘留的病原感染新的豬群。

3)本次發(fā)病仔豬為農(nóng)戶主經(jīng)私人購得，沒有正規(guī)手續(xù)，且仔豬的免疫規(guī)程不清楚，發(fā)生疫病的風(fēng)險極高。因此豬場在養(yǎng)殖活動中，為了防止疫情的發(fā)生，最好做到自繁自養(yǎng)，如必須外購生豬時，必須選擇有正規(guī)手續(xù)、免疫完善的正規(guī)渠道。

9 與其他常見類似疫病的鑒別診斷

因為臨床上豬鏈球菌感染與豬丹毒絲菌、豬瘟病毒及豬李氏桿菌感染具有相似的臨床癥狀，因此常容易混淆，對臨床診斷造成困難。因此，為了降低因疫病診斷錯誤造成的預(yù)后不良，需要對上述幾種疫病做好臨床上的鑒別診斷。豬丹毒是由豬丹毒絲菌引起的一種急性、熱性傳染病，它會導(dǎo)致發(fā)病豬皮膚出現(xiàn)方形、菱形或圓形的紅紫色疹塊，剖檢后可見脾臟腫大、充血且呈櫻桃紅色。豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病。豬瘟病豬常會出現(xiàn)食欲減退、飲欲增加的臨床癥狀，且病豬皮膚表面會出現(xiàn)大量的小的出血點(diǎn)或出血斑，大多數(shù)患豬結(jié)膜會出現(xiàn)膿性炎癥，部分患豬會表現(xiàn)出腹瀉的癥狀并排出惡臭稀糞。剖檢后可發(fā)現(xiàn)豬瘟病豬的腸系膜淋巴結(jié)腫大且呈暗紅色，切開后呈大理石花紋，扁桃體出血性壞死，胃和腸黏膜呈卡他性炎性。

經(jīng)過緊急合理的診治與防控，雖部分發(fā)病豬只死亡，但經(jīng)過合理的抗生素治療，剩余發(fā)病仔豬逐漸痊愈，本次疫情得到了有效的控制。