超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源基質(zhì)中地塞米松的殘留量

楊毅青，王莉佳，馬增輝，王 祺

（山西省食品藥品檢驗所，山西太原 030001）

地塞米松又名氟美松、氟甲強地松龍、德沙美松，是糖皮質(zhì)類激素。其衍生物有氫化可的松、潑尼松等，其藥理作用主要是抗炎、抗毒、抗過敏、抗風濕，臨床使用較廣泛[1-2]。而在獸醫(yī)治療中被廣泛應(yīng)用于治療母畜代謝病，是畜禽飼養(yǎng)中普遍的藥物之一[3]。激素的頻繁使用會在畜禽體內(nèi)殘留，不僅給動物源食品安全帶來隱患，而且對人們的健康及環(huán)境危害嚴重[4]。因此，世界各國嚴格禁止地塞米松作為生長激素使用，且限制該藥物用于動物源性食品中，并提出了嚴格的限量要求[5]。

目前，國內(nèi)外有關(guān)地塞米松殘留的檢測方法較多，主要采用酶聯(lián)免疫法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、超液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法等。本研究參照國家標準GB/T 21981—2008[6]，建立了一種快捷、簡便、回收率好的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測不同動物源基質(zhì)中地塞米松殘留量的方法，為快速高效檢測動物源性食品中地塞米松的殘留提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 試驗樣品

新鮮牛奶、雞蛋，均購置于某超市。

1.1.2 主要試劑

地塞米松標準品（中國食品藥品檢定研究院，含量99.8%）；氫化可的松-d3（阿爾塔科技有限公司，含量98.0%）；甲醇、二氯甲烷、甲酸（美國Fisher公司，色譜純）；乙酸、乙酸鈉（NaAC·4H2O）（國藥集團，分析純）；β-葡萄糖醛酸酶4.5 U/mL（德國默克公司）；實驗室一級超純水。ENVICarb固相萃取柱（500 mg/6 mL）和氨基固相萃取柱（500 mg/6 mL）（艾杰爾科技公司）。

1.1.3 儀器與設(shè)備

LCMS-8050液質(zhì)聯(lián)用儀（日本島津公司）；UB-7pH計（丹佛儀器）；V2S025渦旋混合器（德國ZKA）；HC-3018離心機（安徽中科中佳科學儀器）；氮吹濃縮儀（天津安特塞恩斯）。

1.2 試驗方法

1.2.1 液相條件

色譜柱：YMC C18（100 mm×2.1 mm，3 μm）；流動相：0.1%甲酸水溶液+甲醇溶液，梯度洗脫，見表1；流速：0.2 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

表1 液相色譜的梯度洗脫條件

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI-；質(zhì)譜掃描模式：多反應(yīng)檢測（MRM）；電噴霧電壓：-3 000 V；離子源溫度：300 ℃；加熱氣流量：10 L/min；干燥氣流量：10 L/min；輔助氣壓力：60 psi；其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 質(zhì)譜參數(shù)

1.2.3 提取與凈化

稱取均質(zhì)試樣5 g，置于50 mL離心管中，準確加入內(nèi)標工作液100 μL和10 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶100 μL，于（37±1）℃振蕩酶解12 h。取出冷卻至室溫，加入25 mL甲醇超聲提取30 min，0～4 ℃下，10 000 r/min離心10 min。將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯，加水100 mL，混勻后待凈化。

依次用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液，6 mL甲醇，6 mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱。提取液以2～3 mL/min的速度上樣于活化過的ENVI-Carb固相萃取柱。將小柱減壓抽干。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液活化氨基固相萃取住。將活化好的氨基柱串聯(lián)在ENVI-Carb固相萃取柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，取下ENVI-Carb柱，再用2 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮氣流下吹干，用1 mL甲醇-水溶液溶解殘渣，供儀器測定。用空白樣品，不加入內(nèi)標，按上述步驟制備空白樣品提取液。

1.2.4 標準溶液配制

（1）標準儲備溶液。地塞米松標準品稱量前于105 ℃干燥箱干燥至恒重，經(jīng)折算相當于11.0479 mg地塞米松的標準品，用甲醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為110.479 0 μg/mL的標準儲備液。此儲備液可在-18 ℃以下避光存放12個月。

（2）內(nèi)標工作液。取適量氫化可的松-d3內(nèi)標溶液，配制出濃度為100 ng/mL的內(nèi)標工作液。

（3）標準工作中間液。取適量地塞米松標準儲備溶液配制成濃度為1.1047 9 μg/mL的標準工作中間液。

（4）標準工作液。取適量標準儲備溶液配制得濃度為110.479 0 ng/mL的標準工作液。

1.2.5 系列標準工作溶液配制

分別取標準工作中間液0 mL、0.015 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.400 mL，用甲醇定容至10 mL，配制成系列標準工作溶液。標準工作液中含內(nèi)標濃度為10 ng/mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及定量限

以地塞米松的定量離子峰面積與內(nèi)標峰面積的比值為縱坐標（y），相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線，得出該樣品在0～44.191 4 ng/mL濃度范圍內(nèi)的線性方程為y=0.204 1x-0.027 6，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，線性良好。取空白樣品按照方法定量限（濃度為0.4 μg/kg）水平進行加標試驗，制備好的試樣溶液上機測定，信噪比大于10，滿足檢測要求。

2.2 回收率和重復性

取空白樣品，添加不同濃度的地塞米松標準溶液進行加標回收試驗，其余操作同上述供試品溶液制備，每個濃度平行測定6次，計算加標回收率和重復性RSD，結(jié)果見表3。（牛奶和雞蛋的方法定量限為0.4 μg/kg；最高殘留限量分別為0.3 μg/kg和不得檢出）。

表3 牛奶、雞蛋基質(zhì)中加標回收率

3 結(jié)論

本研究通過對不同基質(zhì)中地塞米松殘留量進行質(zhì)譜分析，建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法，能同時快速檢測出牛奶和雞蛋不同基質(zhì)中添加的地塞米松殘留量，并從線性關(guān)系、重復性、回收率、精密度等方面對方法進行了考察，結(jié)果表明，該方法測定動物源食品中的地塞米松殘留量，方法穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠，為研究動物源食品地塞米松殘留量的檢測提供了一定的參考依據(jù)。