蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

陳炎歡，劉賢釗，江志鵬，黃照榮，李美珍

（無(wú)限極（中國(guó)）有限公司，廣東江門 529100）

蘆根是禾本科植物蘆葦（Phragmites communisTrin.）的新鮮或干燥根莖，性寒味甘，具有清熱瀉火、生津止嘔、除煩、利尿的功效[1-5]。蘆根提取物是蘆根藥材采用適宜的工藝制備而成，目前尚無(wú)官方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),本研究對(duì)9批次的蘆根提取物的感官、鑒別，理化、香豆酸、微生物和重金屬指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定與分析評(píng)價(jià)，初步確立了蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為蘆根提取物質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與儀器

1.1 儀器

HP1200 型高效液相色譜儀（包括二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司），KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

對(duì)香豆酸（CAS號(hào)501-98-4，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純（德國(guó)Merck公司）；其他試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 材料

蘆根提取物由適量蘆根藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。9批蘆根提取物來(lái)源于2個(gè)廠家，編號(hào)1-9。

2 試驗(yàn)方法

2.1 感官測(cè)定

取本品嗅其氣味、嘗其滋味；另取試樣適量置于白色瓷盤中觀察其色澤、外觀，并檢查有無(wú)異物。

2.2 藥材及樣品配制

2.2.1 對(duì)照藥材溶液配制

取蘆根對(duì)照藥材1.0 g，置于錐形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超聲（250 W，40 kHz）處理20 min，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液配制

取本品粉末約8.0 g，置于錐形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超聲（250 W，40 kHz）處理20 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿軇┎⒍ㄈ葜?.5 mL，即得。

2.3 薄層色譜測(cè)定

分別吸取蘆根對(duì)照品藥材溶液35 μL，供試品溶液20～25 μL，點(diǎn)于同一硅膠板上，以石油醚（60～90 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（20∶10∶2，體積比）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在110 ℃加熱至斑點(diǎn)或條帶顯色清晰，置可見(jiàn)光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)上。

2.4 理化指標(biāo)測(cè)定

水分按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3—2016）規(guī)定的第一法進(jìn)行測(cè)定。灰分按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測(cè)定》（GB 5009.4—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定。粒度按照《中華人民共和國(guó)藥典（2020版）》第四部通則粒度和粒度分布測(cè)定法第二法（篩分法）進(jìn)行測(cè)定，過(guò)100目篩。

2.5 對(duì)香豆酸的含量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品約1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.5.2 供試品溶液制備

精密稱取本品約1.0 g于50 mL小燒杯中，加水20 mL，加熱使溶解，取出，放至室溫，轉(zhuǎn)移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45 μm的針式過(guò)濾器過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.6 色譜條件

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.2%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按18∶82比例（體積比）進(jìn)行洗脫；波長(zhǎng)310 nm；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；理論塔板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)不低于5 000。

2.7 線性關(guān)系考察

精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品1.411 mg置于50 mL容量瓶中，按2.5.1項(xiàng)下制備方法加甲醇溶解制成儲(chǔ)備液，再精密吸取該儲(chǔ)備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分別至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，按2.6項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定峰面積。

3 結(jié)果與分析

3.1 感官測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)觀察結(jié)果為：9批蘆根提取物為黃棕色至棕褐色干燥均勻粉末，色澤均勻，具有蘆根特有的氣味，無(wú)異味，無(wú)正常視力可見(jiàn)外來(lái)異物。

3.2 蘆根提取物薄層色譜測(cè)定結(jié)果

S為蘆根對(duì)照藥材。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 蘆根提取物薄層色譜圖

3.3 理化指標(biāo)測(cè)定

蘆根提取物水分、灰分、粒度測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 蘆根提取物水分、灰分、粒度測(cè)定結(jié)果

3.4 線性關(guān)系考察

以對(duì)香豆酸對(duì)照品的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程：Y=1.327 9X-0.093 6，R2=0.999 9。結(jié)果表明對(duì)香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取2.5.1項(xiàng)下制備的對(duì)香豆酸對(duì)照品溶液（濃度11.209 0 μg/mL），重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算峰面積及保留時(shí)間的RSD值，保留時(shí)間和峰面積的RSD值分別為0.04%和0.06%。不對(duì)稱度以對(duì)香豆酸計(jì)不高于1.2。理論塔板數(shù)，以對(duì)香豆酸計(jì)約12 000。表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656）按2.5.2項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果供試品中對(duì)香豆酸峰面積的RSD為0.43%（n=6），表明本品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656）同一天內(nèi)按2.5.2項(xiàng)下制備的6份供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，對(duì)香豆酸平均含量為0.018%，RSD為1.88%。分離度大于1.5。表明該方法重復(fù)性良好。

3.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656，對(duì)香豆酸含量為0.018%）約0.5 g于9個(gè)50 mL小燒杯中。另取對(duì)香豆酸對(duì)照品（純度99.3%）1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容（此對(duì)照品溶液含對(duì)香豆酸17.109 4 μg/mL），分別吸取該對(duì)照品溶液 2.5 mL（以對(duì)香豆酸計(jì) 42.773 5 μg）、5.0 mL（以對(duì)香豆酸計(jì)85.547 0 μg）、7.5 mL（以對(duì)香豆酸計(jì)128.320 4 μg），分3組加入含樣品的9個(gè)50 mL小燒杯中，按2.5.2項(xiàng)下制成供回收率測(cè)定用供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算對(duì)香豆酸的回收率，平均回收率為98.09%（95%～105%），RSD值為0.72%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

3.9 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。根據(jù)所得對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中對(duì)香豆酸峰面積計(jì)算供試品中待測(cè)組分對(duì)香豆酸含量。結(jié)果見(jiàn)表3，9批蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量按干燥品計(jì)算分別不低于0.01%。

表3 蘆根提取物對(duì)香豆酸含量測(cè)定結(jié)果

3.10 重金屬指標(biāo)測(cè)定

重金屬指標(biāo)按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中多元素的測(cè)定》（GB 5009.268—2016）第一法電感耦合等離子質(zhì)譜法（ICP-MS）規(guī)定的方法測(cè)定鉛、砷、鎘、汞含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 蘆根提取物鉛、砷、鎘、汞測(cè)定結(jié)果

3.11 微生物檢查

菌落總數(shù)的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》（GB 4789.2—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行；霉菌和酵母的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB 4789.15—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行；大腸埃希氏菌的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)》（GB 4789.38—2012）規(guī)定的方法進(jìn)行。沙門氏菌的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 蘆根提取物微生物檢查結(jié)果

4 結(jié)論與討論

根據(jù)對(duì)蘆根提取物中的鑒別、水分、灰分、粒度、對(duì)香豆酸含量、重金屬和微生物測(cè)定結(jié)果，結(jié)合食品和藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定原則和相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及產(chǎn)品特性、市場(chǎng)要求制定本標(biāo)準(zhǔn)初步制定了蘆根提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見(jiàn)表6。本研究初步建立的蘆根提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高了其質(zhì)量評(píng)價(jià)的客觀性與專屬性，為進(jìn)一步規(guī)范蘆根提取物生產(chǎn)、銷售行業(yè)提供了科學(xué)依據(jù)。