馮曉衛(wèi) 胡 琦
淋巴瘤是原發(fā)于淋巴結(jié)、結(jié)外淋巴組織或器官的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤,在我國惡性腫瘤病死率中排名第10位[1]。分為霍奇金病(Hodgkin′s disease,HD)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma,NHL)兩類,NHL約占90%,臨床以淋巴結(jié)腫大、淋巴結(jié)外器官受累,或伴發(fā)熱、盜汗、瘙癢、消瘦等全身癥狀為主要表現(xiàn),現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要采用化療、放療、手術(shù)、移植、生物免疫和靶向治療等為主的綜合治療方案。約10%~60%患者一線化療無效或治療緩解后復(fù)發(fā),還有部分患者因高齡或全身合并癥而不適合、不耐受此類治療。中藥復(fù)方辨治淋巴瘤,具有能延長生存時間、提高生存質(zhì)量、不良反應(yīng)少等優(yōu)勢,挖掘中藥復(fù)方治療淋巴瘤的臨床價值意義重大。
淋巴瘤在中醫(yī)對應(yīng)病名有“惡核”、“石疽”等,最主要的病理因素為痰、毒、瘀、虛,主要證型有痰熱蘊(yùn)結(jié)、氣血兩虛、肝腎陰虛、氣郁痰結(jié)、脾虛痰濕等,治以清熱解毒、化痰散結(jié)、滋補(bǔ)肝腎、健脾益氣,軟堅(jiān)散結(jié)等法?,F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),中藥存在多成分多靶點(diǎn)的特性,可能通過多條信號通路達(dá)到較好的治療效果,改善預(yù)后情況。本文擬通過整理近十年中藥在調(diào)控淋巴瘤相關(guān)信號通路分子的研究展開綜述,對淋巴瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡等相關(guān)的通路及關(guān)鍵分子,如PD-1/PD-L1信號通路、PI3K-Akt-mTOR信號通路、p38-MAPK信號通路、JAK-STAT信號通路、經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路、NF-κB信號通路等6條信號通路,以期為闡明中醫(yī)藥治療淋巴瘤的作用靶點(diǎn),探索中西藥物協(xié)同機(jī)制,提高淋巴瘤的療效提供幫助。
程序性死亡受體-1(programmed cell death-1,PD-1)為Ⅰ型跨膜糖蛋白,是重要的免疫共抑制受體,PD-L1(programmed cell death ligand 1)是PD-1的配體之一,當(dāng)PD-1與PD-L1通路激活時,通過PD-L1介導(dǎo)的抗凋亡信號促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活,抑制識別腫瘤抗原的T細(xì)胞活化和增殖,最終導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞和記憶細(xì)胞生成減少,進(jìn)而誘導(dǎo)T細(xì)胞耗竭,從而實(shí)現(xiàn)腫瘤的免疫耐受[2]。PD-L1在血液系統(tǒng)惡性腫瘤及各種實(shí)體瘤中上調(diào)并表達(dá),使用免疫組織化學(xué)(IHC)可以檢測細(xì)胞表面上的PD-1和PD-L1表達(dá)[3]。PD-1及PD-L1的單克隆抗體可阻斷PD-1及PD-L1在淋巴瘤中的高表達(dá)情況,具有抑制腫瘤細(xì)胞惡性增殖,改善T淋巴細(xì)胞功能等作用,在經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma,CHL)、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)中表現(xiàn)出較好的療效[4]。
消瘰丸出自《醫(yī)學(xué)心悟》,由玄參、牡蠣、貝母組成,具有軟堅(jiān)散結(jié)、清潤化痰的功效,其散結(jié)之力較強(qiáng),在現(xiàn)代藥理學(xué)上對于治療體表腫塊、腫瘤、瘰疬、淋巴結(jié)腫大等病運(yùn)用較多。劉群英等[5]用消瘰丸與PD-L1阻斷劑對淋巴瘤患者T細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),發(fā)現(xiàn)消瘰丸聯(lián)合PD-L1阻斷劑組對T細(xì)胞的抑制作用高于PD-L1阻斷劑組,表明消瘰丸可以增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的活性,促進(jìn)PD-1陽性表達(dá)。
人參皂苷Rg3是人參皂苷中的一種,屬于人參中的活性成分,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)它可以提高機(jī)體免疫力,還具有一定的抗腫瘤作用。郭奕維等[6]用人參皂苷Rg3與PD-1抑制劑合用,發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3可促進(jìn)PD-1抑制劑恢復(fù)T細(xì)胞的增殖作用,減少T細(xì)胞凋亡,增加細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ的分泌,增強(qiáng)PD-1抑制劑對彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的抗腫瘤作用。
磷脂酰肌醇3-激酶 (phosphatidylin-ositol-3-kinase,PI3K)-蛋白激酶 B(protein kinase B,PKB,又稱 AKT)-雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ,mTOR),此信號通路通過Ser/Thr蛋白激酶轉(zhuǎn)導(dǎo),與細(xì)胞的增殖、凋亡等過程關(guān)系密切,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色,廣泛存在于淋巴瘤、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤中[7~9]。馬濤等[10]研究發(fā)現(xiàn),此信號通路與細(xì)胞生長、蛋白質(zhì)翻譯、細(xì)胞周期及血管生成等密切相關(guān),與DLBCL、套細(xì)胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的發(fā)病密切相關(guān)。
益氣除痰方以黨參、白術(shù)、云苓補(bǔ)氣健脾,半夏、枳實(shí)、瓜蔞皮化痰消積,魚腥草、露蜂房解毒散結(jié),張江召等[11]用益氣除痰方干預(yù)小鼠,制備含藥血清,用不同分?jǐn)?shù)的含藥血清處理NK-T淋巴瘤細(xì)胞SNK-6后,下調(diào)了p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白的表達(dá),表明益氣除痰方對NK-T細(xì)胞淋巴瘤具有抑制生長的機(jī)制與PI3K-AKT-mTOR信號通路有關(guān)。
夏枯草有散結(jié)消腫、清熱瀉火、明目之功效,現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),其散結(jié)消腫之功在治療淋巴結(jié)腫大、乳腺增生、甲狀腺腫大等時效果較好。劉新奎等[12]研究發(fā)現(xiàn),夏枯草具有較好的體外抗淋巴瘤增殖和誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡的作用,這種抑制作用可能是通過激活JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,抑制AKT通路激活實(shí)現(xiàn)的。
白花蛇舌草具有清熱解毒、清利濕熱、消癰等功效,現(xiàn)代在消炎、提高免疫力、抗腫瘤等方面具有良好特性。李華等[13]研究發(fā)現(xiàn),白花蛇舌草與PI3K通路抑制劑LY294002對人淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖的抑制效果相似,而聯(lián)合LY294002對人淋巴瘤Raji細(xì)胞處理時,比單用LY294002對Raji細(xì)胞的增殖抑制效果更顯著,PI3K-AKT信號通路中p-PI3K、p-AKT蛋白含量降低更明顯,提示其作用機(jī)制可能與抑制此信號通路活化相關(guān)。
絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)是細(xì)胞內(nèi)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,參與細(xì)胞增殖、凋亡及基因表達(dá)調(diào)控,在多種受體信號傳遞途徑中起著關(guān)鍵作用。p38-MAPK信號通路為MAPK家族的重要成員, 最早因與氧化應(yīng)激相關(guān)而被關(guān)注,不僅在炎癥、應(yīng)激反應(yīng)中具有重要作用,近年研究發(fā)現(xiàn)它在淋巴瘤、胃癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞中,與凋亡的啟動、細(xì)胞周期等密切相關(guān)[14~16]。
謝會霞等[17]研究發(fā)現(xiàn),雷公藤內(nèi)酯醇可以誘導(dǎo)皮膚T細(xì)胞淋巴瘤Hut102細(xì)胞凋亡,在加入p38MAPK特異性抑制劑SB203580后淋巴瘤細(xì)胞的凋亡作用顯著減弱,提示雷公藤內(nèi)酯醇誘導(dǎo)淋巴瘤Hut102細(xì)胞凋亡可能與激活p38MAPK信號通路有關(guān)。
傅士龍[18]研究發(fā)現(xiàn),木蝴蝶苷B通過誘導(dǎo)MKK3表達(dá)升高來激活p38-MAPK 這條信號通路,進(jìn)而激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的重要抑瘤基因DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子DDIT3,從而導(dǎo)致淋巴瘤細(xì)胞脹亡和凋亡。并且在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示木蝴蝶苷B能有效地抑制淋巴瘤生長,并且其毒性和不良反應(yīng)都相對較小。
Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(the janus kinase/signal transducer and activator of transcriptions,JAK/STAT)信號通路是眾多細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同途徑,參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及炎癥等過程,酪氨酸激酶相關(guān)受體、酪氨酸激酶JAK和轉(zhuǎn)錄因子STAT是其通路的主要3個成分,此信號通常產(chǎn)生于細(xì)胞膜表面的受體,然后傳輸至細(xì)胞核內(nèi),STAT在細(xì)胞核內(nèi)與特異性的DNA啟動子結(jié)合,在多種腫瘤細(xì)胞和組織中都有激活,如NHL、乳腺癌和白血病等各種腫瘤中[19~21]。
芪貞歸脾湯為歸脾湯的加減方,張影等[22]通過高通量組學(xué)基因芯片技術(shù)探究芪貞歸脾湯對淋巴瘤細(xì)胞的可能作用靶點(diǎn),研究發(fā)現(xiàn),芪貞歸脾湯在基因水平上顯著抑制JAK-STAT、PI3K-AKT這兩條信號通路,且實(shí)時熒光定量PCR驗(yàn)證與基因芯片結(jié)果一致,通過這兩條信號通路抑制淋巴瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡,并抑制遷移和侵襲。
夏枯草提取物可以抑制漸變性淋巴瘤Karpas299細(xì)胞增殖,并誘導(dǎo)淋巴瘤Karpas299細(xì)胞發(fā)生早期凋亡,李偉明[23]采用TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探索夏枯草提取物對淋巴瘤細(xì)胞蛋白表達(dá)變化,經(jīng)質(zhì)譜鑒定上調(diào)164個蛋白和下調(diào)244個蛋白的表達(dá),并用免疫組化和Western blot法驗(yàn)證,結(jié)果顯示其作用機(jī)制主要是下調(diào)p-JAK3、p-STAT3、p-JAK3、p-AKT、Bcl-2、cyclinD3、mTOR蛋白的表達(dá),上調(diào)TNF-α、Bax、caspase-3蛋白的表達(dá),通過JAK-STAT、PI3K-AKT、JNK-cJun這3條信號通路發(fā)揮抗腫瘤效果。
白藜蘆醇是一種非黃酮類多酚有機(jī)化合物,具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎等作用。姬穎華等[24]研究發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇(resveratrol, RES)在伯基特淋巴瘤細(xì)胞株中,對IL-6/JAK2/STAT3信號通路的抑制作用可能通過下調(diào)由IL-6引起的p-JAK2、p-STAT3的表達(dá),提高促凋亡因子的表達(dá),降低抗凋亡因子的表達(dá),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,發(fā)揮抗腫瘤的作用。
經(jīng)典Wnt (canonical Wnt/β-catenin pathway, Wnt/β-catenin)信號通路在正常成熟細(xì)胞中呈關(guān)閉狀態(tài),其異常持續(xù)性激活與很多腫瘤的發(fā)病有關(guān)。Wnt蛋白與細(xì)胞表面受體復(fù)合物跨膜蛋白結(jié)合后,破壞蛋白酶體復(fù)合物形成,使胞質(zhì)中β-catenin逃脫降解,并轉(zhuǎn)位細(xì)胞核與T細(xì)胞因子(TCF)結(jié)合形成復(fù)合物,再和其他轉(zhuǎn)錄輔助因子如CREB結(jié)合蛋白(CBP)共同啟動下游靶基因的活化包括c-myc、cyclinD1、PPAR、COX2、CD44和MMP7等。張文迪等[25]研究發(fā)現(xiàn),Wnt/β-catenin信號通路的激活能夠促進(jìn)MCL細(xì)胞的增殖及侵襲性生長。在淋巴瘤的形成和耐藥上,Wnt/β-catenin信號通路在T細(xì)胞、B 細(xì)胞淋巴瘤上都具有調(diào)節(jié)作用[26]。
Kawahara等[27]研究發(fā)現(xiàn),含黃酮類中藥化合物具有抑制淋巴瘤細(xì)胞增殖、調(diào)控細(xì)胞周期,并有效阻斷經(jīng)典Wnt信號通路的作用,經(jīng)典Wnt信號通路可能是導(dǎo)致NHL的分子作用機(jī)制之一。
核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信號通路是一種廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子,它參與機(jī)體的炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答、腫瘤的發(fā)生及發(fā)展、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激反應(yīng)等。NF-κB首先在B淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),是一種能與B淋巴細(xì)胞免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異性相結(jié)合的蛋白,在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用。
胡施煒等[28]研究發(fā)現(xiàn),大黃酸可以抑制彌漫大B細(xì)胞OCI-LY8 細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡,其作用機(jī)制主要下調(diào)Rip2表達(dá)后,減弱IκBα磷酸化和IKK復(fù)合體的形成,使IκBα降解量減少,最終也相應(yīng)的減少了游離入核的p65/p52二聚體數(shù)量,抑制了NF-κB信號通路的持續(xù)性活化。
毛萼乙素能顯著抑制淋巴瘤細(xì)胞的增殖,降低增殖蛋白的表達(dá),上調(diào)凋亡蛋白的表達(dá)。使磷酸化NF-κB和激活因子IκB激酶表達(dá)減少,抑制NF-κB信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)[29]。漢黃芩素是唇形科植物黃芩的主要活性成分之一,在多種疾病和實(shí)體瘤中表現(xiàn)出高效低毒的抗腫瘤效果。研究發(fā)現(xiàn),漢黃芩可以通過下調(diào)NF-κB的表達(dá)來抑制淋巴瘤Raji細(xì)胞的生長,通過LMP1/NF-κB/miR-155/PU.1途徑誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞Raji細(xì)胞的凋亡[30]。
本文闡述了近年來包括PD-1/PD-L1信號通路、PI3K-AKT-mTOR信號通路、p38-MAPK信號通路、JAK-STAT信號通路、經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路、NF-κB信號通路等6條淋巴瘤信號通路及中藥干預(yù)的相關(guān)研究進(jìn)展,中藥單體及復(fù)方制劑對于淋巴瘤的作用機(jī)制及實(shí)驗(yàn)研究取得了很大的進(jìn)展。但是,中藥復(fù)方目前還缺乏可靠的RCT支撐,如果能利用網(wǎng)絡(luò)大數(shù)據(jù)(網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué))、系統(tǒng)生物學(xué)基因測序、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)等研究方法對淋巴瘤多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)體系的上下游調(diào)控基因以及靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行更系統(tǒng)深入的研究,探索與開發(fā)針對不同信號通路的有效藥物,更全面揭示中醫(yī)藥治療淋巴瘤的作用機(jī)制并優(yōu)化組方、提高臨床療效。與此同時,將中藥復(fù)方的實(shí)驗(yàn)研究與臨床實(shí)踐中相融合,可以充分展現(xiàn)中醫(yī)藥的可靠性和科學(xué)性,對推動中醫(yī)藥走向世界具有積極意義,對淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制有更多的發(fā)現(xiàn),引導(dǎo)探索與開發(fā)針對不同信號通路淋巴瘤治療的有效藥物。