丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制

夏杰，賈巧君，葉子弘，楊東風(fēng)，侯卓妮，肖藝，張曉丹

〔摘要〕 目的 根據(jù)GB/T15000.3-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3）標(biāo)準(zhǔn)樣品：定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》和GB/T15000.5-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（5）標(biāo)準(zhǔn)樣品：化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)樣品技術(shù)通則》中指導(dǎo)要求，在國家標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)管理委員會批準(zhǔn)立項(xiàng)的基礎(chǔ)上，開展關(guān)于丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制。方法 以唇形科鼠尾草屬藥用植物陜南道地丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）為原料通過醇提、硅膠柱色譜分離、制備色譜得到丹參新酮純品;采用紅外分光光度分析法（IR）、紫外光譜（UV）、核磁共振（NMR）和質(zhì)譜（MS）等波譜技術(shù)對其進(jìn)行定性分析和結(jié)構(gòu)確證。將樣品分裝成100瓶（10 mg/瓶），采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)以及聯(lián)合定值分析。結(jié)果 經(jīng)檢驗(yàn)該樣品在95%的置信區(qū)間范圍內(nèi)均勻性良好;在0～4 ℃的條件下，24個月內(nèi)穩(wěn)定性良好;采用多個實(shí)驗(yàn)室協(xié)作試驗(yàn)定值，丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的純度為99.350%，擴(kuò)展不確定度0.053%。結(jié)論 丹參新酮達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)樣品的技術(shù)要求，丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品批號GSB 11-3803-2020可以用于丹參藥材及其副產(chǎn)品中丹參新酮含量的測定、結(jié)構(gòu)的確定、質(zhì)量甄別、檢測方法的校正和質(zhì)量控制，為藥材和產(chǎn)品成分檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、對比性、可溯性提供參考。

〔關(guān)鍵詞〕 丹參新酮; 標(biāo)準(zhǔn)樣品;均勻性;穩(wěn)定性;定值;不確定度

〔中圖分類號〕R284? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.11.011

Preparation of Miltirone Standard Sample

XIA Jie1， JIA Qiaojun1，2， YE Zihong3， YANG Dongfeng1，2， HOU Zhuoni1，2， XIAO Yi4， ZHANG Xiaodan1，2*

（1. College of Life Sciences and Medicine， Zhejiang Sci-Tech University， Hangzhou， Zhejiang 310012， China; 2. Laboratory of Plant Secondary Metabolism and Regulation of Zhejiang Province， Hangzhou， Zhejiang 310012， China; 3. College of Life Sciences， China Jiliang University， Hangzhou， Zhejiang 310012， China; 4. Yizhonghe Medicinal Plants Research Institute of Zhejiang Ningbo， Ningbo， Zhejiang 315000， China）

〔Abstract〕 Objective According to the guiding requirements of GB/T15000.3-2008 Guidelines for Standard Samples （3）： General Principles and Statistical Methods of Fixed Value and GB/T15000.5-2008 Guidelines for Standard Samples （5）： Technical General Rules of Chemical Composition Standard Samples， on the basis of the approval of the project by the National Standardization Technical Management Committee， the standard sample of miltirone was developed. Methods Salvia miltiorrhiza Bge， a medicinal plant of Salvia of Labiatae， was used as raw material. The pure miltirone was obtained by alcohol extraction， silica gel column chromatography， preparative chromatography respectively. Infrared spectrophotometry （IR）， ultraviolet spectroscopy （UV）， nuclear magnetic resonance （NMR） and mass spectrometry （MS） were used for qualitative analysis and structural confirmation. The samples were divided into 100 bottles （10 mg/bottle）， and then the uniformity and stability were tested by high performance liquid chromatography （HPLC） method， and the combined fixed value analysis was carried out. Results The results of the study indicated that the sample had good uniformity within 95% confidence interval. It was stable within 24 months at 0～4 ℃. Multiple laboratories were used to cooperate to test the setting value， the purity of standard sample of miltirone was 99.35% and the expanded uncertainty was 0.053%. Conclusion Miltirone meets the technical requirements of national standard samples， and the standard sample batch number GSB 11-3803-2020 can be used for the determination of the content of salvia miltiorrhiza Bge and its by-products， the determination of the structure， the quality screening， the calibration and quality control of the detection method， and provide reference for the accuracy， comparability and traceability of the detection results of the medicinal materials and the product components.

〔Keywords〕 miltirone; standard sample; uniformity; stability; constant value; uncertaint

丹參（Salvia miltiorrhiza Bge），味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)，為唇形科植物丹參的干燥根和根莖，廣泛分布在全國各地，是重要的大宗藥材[1-2]。其次生代謝產(chǎn)物丹參酮類物質(zhì)是主要有效成分群，丹參酮的藥理作用極其廣泛[3-4]，近年來隨著研究的不斷深入，在抗腫瘤方面取得了顯著成果，此外還具有心腦血管藥理作用，天然抗氧化作用及抗菌消炎作用等。丹參新酮是丹參酮類物質(zhì)的重要組分，目前研究報(bào)道表明，丹參新酮在抗炎、抗癌、心腦血管防治等方面均具有藥效，科學(xué)家們也紛紛從藥理角度去闡釋藥效的產(chǎn)生[5-12]。然而，作為丹參酮類物質(zhì)的重要組成之一，隨著藥理藥效藥動力學(xué)方面的研究越來越深入，國內(nèi)外對丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品研制方法的報(bào)道卻較少，也無市售丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品，由于標(biāo)準(zhǔn)樣品的缺乏，使丹參新酮產(chǎn)業(yè)化發(fā)展受到制約，丹參新酮相關(guān)研究與開發(fā)受到限制。為滿足丹參新酮及相關(guān)產(chǎn)品的檢測開發(fā)需求，按照國家標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則[13]，成功研制出丹參新酮國家標(biāo)準(zhǔn)樣品。

1 材料與方法

1.1? 儀器與設(shè)備

Waters E2695液相色譜儀（沃特世科技（上海）有限公司公司）;Rotavapor R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi有限公司）;冷凍干燥儀（寧波Scientz生物技術(shù)股份有限公司）;C-815中壓液相色譜儀（瑞士Buchi有限公司）;Waters Prep150 System快速純化制備色譜[沃特世科技（上海）有限公司（Waters）公司];UV-2500PC紫外吸收圖譜分析儀器（日本京都Shimadzu有限公司）;Necolit iS傅立葉紅外光譜儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）;布魯克Q-Tof micro質(zhì)譜儀（德國Bruker·Daltonic有限公司）;Bruker Avance 600 MHz核磁共振儀（德國Bruker·Daltonic有限公司）。

1.2? 材料與試劑

丹參根采集于陜西省商洛市，由浙江理工大學(xué)浙江省植物次生代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室張曉丹副教授鑒定為唇形科鼠尾草屬植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）。乙酸乙酯、石油醚、冰醋酸等純度為99.990%的質(zhì)譜純（杭州高晶精細(xì)化工有限公司）;200～300目硅膠（青島海洋化工廠）;乙腈、甲醇（質(zhì)譜純-德國默克股份公司）。

1.3? 丹參新酮樣品的制備

原料為陜南道地藥材丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）的根，將30 kg藥材干品用6倍量95%乙醇回流提取3次（每次2 h），2～5 ℃靜置析晶后抽濾得丹參酮粗品。取粗品進(jìn)行硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫（V/V，100∶1，80∶1，60∶1，40∶1），合并收集丹參新酮斑點(diǎn)段。干燥濃縮后采用中壓液相色譜二次純化，乙腈和去離子水梯度洗脫，最后用甲醇洗脫，經(jīng)薄層層析檢測后根據(jù)Rf值（正向薄層層析（TLC）Rf=0.380，反向薄層層析Rf=0.500）合并相同組分進(jìn)行真空濃縮，得到純度90%以上的丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)品。用Waters快速純化制備色譜，在檢測波長254 nm，色譜流動相A為乙腈，B為0.2%乙酸水，C為甲醇。梯度洗脫：0～10 min，25%～50% A （20% C）;10～40 min，50%～60% A （20% C）;40～60 min，60% A （20% C）。合并收集丹參新酮斑點(diǎn)段，合并濃縮，冷凍干燥，得到純度高于99%的丹參新酮標(biāo)品。

1.4? 純度分析法

純度分析是評價標(biāo)準(zhǔn)樣品的重要指標(biāo)之一。標(biāo)準(zhǔn)樣品中的水分含量通過傳統(tǒng)的卡爾·費(fèi)休法測定[14]，然后通過使用不同有機(jī)溶劑展開體系的薄層色譜、高效液相色譜法（HPLC）、高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）等不同方法開展對丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品多方位的純度檢驗(yàn)[15-17]。

1.5? 結(jié)構(gòu)鑒定

對于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定，通常采用四大波譜進(jìn)行綜合測定，即采用紅外分光光度分析法（IR）、紫外光譜（UV）、核磁共振（NMR）、HPLC-MS進(jìn)行綜合定性分析，對制備的樣品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，分析條件如下。

UV：溶劑為乙醇，光譜帶寬2.000 nm，紫外可見光區(qū)（200～400nm）全波長掃描。

IR：溴化鉀壓片后對吸收峰進(jìn)行分析。

HPLC-MS實(shí)驗(yàn)：儀器：布魯克Q-Tof micro質(zhì)譜儀，質(zhì)譜條件：電離方式ESI+，毛細(xì)管電壓4.5 kV，載氣：普氮，載氣溫度：180 ℃，載氣流速：4.000 L/min，掃描范圍為m/z=50～800。

NMR實(shí)驗(yàn)：以氘代氯仿為溶劑，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行測定。

1.6? 均勻性檢驗(yàn)

均勻性是評價標(biāo)準(zhǔn)樣品空間分布特征最基本的屬性，通過均勻性考察特定值在每個部分是否均勻，明確標(biāo)準(zhǔn)樣品特定值在每個部分的分散程度，從而確定其是否滿足國家標(biāo)準(zhǔn)樣品研制標(biāo)準(zhǔn)。對于丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品研制而言，以標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則第7章有關(guān)樣品均勻性檢驗(yàn)和判斷為指導(dǎo)，分裝某一批次研制出的丹參新酮樣品?？偣渤闃訑?shù)目為10個，將樣品以1～10進(jìn)行編號，從10瓶樣品中以3種不同程序從上述編號的樣品，分別各稱取0.250 mg樣品3份，并以1.000 mL色譜乙醇作為溶劑溶解后進(jìn)行HPLC分析，以HPLC面積歸一法進(jìn)行測定樣品純度值。3次的抽樣樣品編號順序?yàn)?、3、5、7、9、2、4、6、8、10瓶;10、9、8、7、6、5、4、3、2、1號瓶;2、4、6、8，10、1、3、5、7、9號瓶。對每個樣品重復(fù)測定3次。

1.7? 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

穩(wěn)定性是指標(biāo)準(zhǔn)樣品在某些外界因素影響下隨時間變化規(guī)律的試驗(yàn)方法。將丹參新酮樣品進(jìn)行分裝，在4 ℃冰箱條件下保存兩年進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品長期穩(wěn)定性檢驗(yàn)。分別于0、1、2、3、6、9、12、18、24個月時間隨機(jī)抽取3個樣品，按照色譜條件進(jìn)樣測定，每份試樣以測定3次的平均值為其定值結(jié)果，用峰面積歸一化法求出純度。以直線模型作為經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用t檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)對穩(wěn)定性獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

1.8? 定值

定值是指采用技術(shù)上有效的方法，確定樣品的一個或多個特征值的程序。采用多個實(shí)驗(yàn)室協(xié)作試驗(yàn)的聯(lián)合定值方式，分別對隨機(jī)抽取24個樣品進(jìn)行檢測，對所采集的測定結(jié)果采用格拉布斯檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)、公式計(jì)算丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)值和不確定度。

2 結(jié)果與討論

2.1? 丹參新酮純度分析

薄層色譜純度分析采用兩種展開體系進(jìn)行檢測，正向硅膠薄層彩色圖譜展開劑為石油醚：乙酸乙酯=20∶1，Rf=0.380;反向硅膠薄層色譜圖展開劑為甲醇，Rf=0.500;符合薄層檢測的要求，顯色后結(jié)果顯示樣品純凈，未見雜質(zhì)。正向硅膠和反向硅膠薄層色譜圖見圖1和圖2。

丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)品扣除溶劑色譜峰后，對樣品色譜峰進(jìn)行面積歸一法定量，經(jīng)積分，丹參新酮純度為99.480%。丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)品梯度洗脫，流動相：A為乙腈，B為0.2%乙酸水，C為甲醇。梯度調(diào)：0～10 min，25%～50% A （20% C）;10～40 min，50%～60% A （20% C）;40～60 min，60%A （20% C）。HPLC中丹參新酮的保留時間為46.5 min。扣除溶劑色譜峰后，對樣品色譜峰進(jìn)行面積歸一法定量，經(jīng)積分，丹參新酮純度為99.330%，未發(fā)現(xiàn)明顯的雜質(zhì)峰存在。

依據(jù)GB606-2003《化學(xué)試劑水分測定通用方法卡爾·費(fèi)休法》[18]，使用卡爾·費(fèi)休法測定水分含量。用瑞士萬通KF915水分測定儀，卡爾費(fèi)休試劑滴定，以純水標(biāo)定滴定度為4.176 mg·mL-1。平行測定3次，取平均值測定結(jié)果為：（0.171±0.003）%。

2.2? 丹參新酮的結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1? 熔點(diǎn)和元素分析? 采用梅特勒熔點(diǎn)儀MP50測得熔點(diǎn)：96～97 ℃;采用元素分析儀vario micro cube測定得元素分析測定值：C（80.230±0.130）%，H（7.678±0.100）%;元素分析計(jì)算值：C 80.810%，H 7.854%。

2.2.2? UV光譜分析? 該化合物在240～280 nm，258.000 nm （0.781），358.000 nm （0.071）處有紫外吸收。這些吸收峰為典型的鄰二苯醌吸收特征，其中258.000 nm處的強(qiáng)吸收峰為醌樣結(jié)構(gòu)引起的，240～280 nm及358 nm為苯樣結(jié)構(gòu)引起的。

2.2.3? IR光譜分析? IR（cm-1）：3 445.470（羥基的伸縮振動），2 961.970，2 937.550（-CH3、-CH2的伸縮振動），1 666.990（羰基-C=O尖銳吸收峰），1 655.920 （羰基-C=O尖銳吸收峰），650～900，1 456.560～1 63 2.33 0，3 000～3 100（苯核的骨架特征吸收峰）。

2.2.4? MS分析? 使用Agilent1200&6120 Quadrupole

LC/MS儀器，Agilent InfinityLab Poroshell 120EC-C18（50 mm×3.0 mm，2.7 μm）色譜柱;MS條件：ESI+離子源，正離子模式，毛細(xì)管電壓3.0 kV，載氣：氮?dú)?，載氣流速：12 L/min，載氣溫度：350 ℃，掃描范圍為m/z=100～1 000。ESI+-MS模式下得到正離子質(zhì)譜分析圖測量值m/z=305.151[M+Na]+，理論計(jì)算值m/z=305.1512[M+Na]+。

2.2.5? NMR分析? 通過將高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)和核磁共振譜分析結(jié)果與已經(jīng)報(bào)道過的文獻(xiàn)對比，所鑒定化合物的質(zhì)譜和核磁共振數(shù)據(jù)均與丹參新酮的文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，即化合物是丹參新酮核磁數(shù)據(jù)歸屬見表1和表2。

2.3? 均勻性實(shí)驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)樣品的均勻性，是標(biāo)準(zhǔn)樣品的基本屬性之一，在標(biāo)準(zhǔn)樣品研制過程中是不可或缺的步驟。對樣品丹參新酮樣品進(jìn)行分裝后，對其進(jìn)行純度均勻性檢驗(yàn)，均勻性檢驗(yàn)結(jié)果見表3與表4。

綜上，以υ1（即組間）=9及υ2（即組內(nèi)）=20查F界值表，得F0.05（9，20）=2.390，由于F=MS間/MS內(nèi)=1.570

瓶間方差用下式計(jì)算：

s■■=■=0.000 553

瓶間標(biāo)準(zhǔn)偏差是該方差的平方根：

sbb=0.023 500

重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差可由MSwithin計(jì)算：

sr=■=0.054 220

均勻性檢驗(yàn)的不確定度ubb=sbb=0.023 500

2.4? 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

對丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)品的長期穩(wěn)定性進(jìn)行檢驗(yàn)，0、1、2、3、6、9、12、18、24個月時間隨機(jī)抽取3個樣品檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果如表5所示。

上述數(shù)據(jù)表明，不同采樣時間測得的樣品純度平均值并在沒有隨時間的變化而發(fā)生明顯的改變，按照計(jì)算所示，測定值應(yīng)在且均在（99.250±0.050）%內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)樣品在兩年內(nèi)是穩(wěn)定的。

用t檢驗(yàn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析：

丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品隨時間變化而均勻發(fā)生變化，經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪褂玫氖侵本€形式，通過觀察設(shè)定經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭本€的斜率是否在特定時期內(nèi)發(fā)生差異的大小來判定丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的相對穩(wěn)定性，相關(guān)數(shù)據(jù)分析過程如下所示：

斜率可以用下式計(jì)算：

b1=■=■=0.000 885

式中：■=99.25? ■=8.33

下式計(jì)算截距：

b0=■-b1■=99.25-（-0.000 885）×8.33=99.26

直線上的點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算：

s2=■=■=0.002 70

取其平方根s=0.051 9，與斜率相關(guān)的不確定度用下式計(jì)算：

s（b1）=■=■=0.002 2

自由度為n-2和p=0.95（95%置信水平）的分布t因子等于2.365

由于：|b1|=0.000 885

即 |b1|<0.005 23

結(jié)果顯示該方程斜率變化無顯著性差異的。證明丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品在兩年內(nèi)是穩(wěn)定的。

F檢驗(yàn)：上表數(shù)據(jù)（0～24個月）經(jīng)線性擬合，得到上表的結(jié)論。

通過以上結(jié)果分析，在測定時間為24個月內(nèi)測定樣品的直線回歸方程的擬合度較好。直線回歸的方差分析為F=0.160小于方差分析臨界值F0.05（1，7）=5.59。所以在4 ℃的儲存條件下，所制備的丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品在24個月內(nèi)是穩(wěn)定的。見表6。

2.5? 定值結(jié)果及其不確定度評價

2.5.1? 定值結(jié)果? 根據(jù)GB/T 15000-2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3）標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》中說明的標(biāo)準(zhǔn)樣品定值方法，選擇了多個實(shí)驗(yàn)室分別測定，各實(shí)驗(yàn)室反饋結(jié)果見表7。

收集整理8家實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)排列方式為由大至小的順序，用格拉布斯法（Grubbs）進(jìn)行檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)符合規(guī)定，未發(fā)現(xiàn)異常值。各實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的正態(tài)性采用峰度法檢驗(yàn)，同樣未檢出異常值。將各家實(shí)驗(yàn)室測得的數(shù)據(jù)作為無偏估計(jì)值，計(jì)算8家測定結(jié)果的平均值及標(biāo)準(zhǔn)偏差。對表7的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表8。計(jì)算加權(quán)平均值作為定值結(jié)果，總平均值為99.86%。

2.5.2? 定值分析的不確定度評價? 根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)樣品指導(dǎo)準(zhǔn)則GB/T 15000.3-2008標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，定值結(jié)果包括兩部分，標(biāo)準(zhǔn)值和不確定度丹參新酮特性標(biāo)準(zhǔn)值的計(jì)算不確定度由標(biāo)準(zhǔn)值定值實(shí)驗(yàn)引入的不確定度、均勻性檢驗(yàn)引入的不確定度和穩(wěn)定性檢驗(yàn)引入的不確定度。根據(jù)全部測定結(jié)果，計(jì)算丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的特性標(biāo)準(zhǔn)值和不確定度。

標(biāo)準(zhǔn)值定值實(shí)驗(yàn)引入的不確定度uchar=u（）=0.096 91%;瓶間均勻性引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為ubb=0.023 5%;穩(wěn)定性檢驗(yàn)引入的不確定度為ults=0.605 31%扣除水分灰分后標(biāo)準(zhǔn)樣品純度：P=（1-Pm-Pa）PHPLC=（1-0.171%-0）×99.35%=99.180%其中：Pm為水分含量;Pa為無機(jī)元素含量;PHPLC為HPLC-UV定值主成分峰的百分比值;經(jīng)雜質(zhì)分析結(jié)果可知：Pm=0.171 0%，Pa=0.000 095 6%。

因此，丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值結(jié)果為丹參新酮樣品的純度為99.180%，擴(kuò)展不確定度為0.243%。

3 結(jié)論

本研究根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則的要求，成功研制出了丹參新酮國家標(biāo)準(zhǔn)樣品，并經(jīng)均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性檢驗(yàn)，丹參新酮的均勻性和穩(wěn)定性結(jié)果均符合標(biāo)樣要求。研制的丹參新酮標(biāo)準(zhǔn)樣品對中藥材質(zhì)量控制、化合物檢測、相關(guān)藥理作用、產(chǎn)品開發(fā)等科學(xué)研究提供技術(shù)支持，具有重大意義。

參考文獻(xiàn)

[1] LU S F. Biosynthesis and regulatory mechanisms of bioactive compounds in Salvia miltiorrhiza， a model system for medicinal plant biology[J]. Critical Reviews in Plant Sciences， 2021， 40（3）： 243-283.

[2] 陳向榮，陸京伯，石漢平.丹參的藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（1）：44-45.

[3] 蔡? 琳，彭? 鵬，郭? 甜.丹參藥理作用及臨床研究進(jìn)展[J].山東化工，2016，45（17）：51-52.

[4] 梁? 勇，羊裔明，袁淑蘭.丹參酮藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 中草藥，2000，31（4）：304-306.

[5] 王夢夢，吉蘭芳，崔樹娜.丹參功效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2019，34（5）：944-949.

[6] ZHANG X W， ZHANG P， AN L， et al. Miltirone induces cell death in hepatocellular carcinoma cell through GSDME-dependent pyroptosis[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B， 2020， 10（8）： 1397-1413.

[7] TANG H J， SONG P， LI J， et al. Effect of Salvia miltiorrhiza on acetylcholinesterase： Enzyme kinetics and interaction mechanism

merging with molecular docking analysis[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2019， 135： 303-313.

[8] ZHAI J X， SONG Z H， WANG Y W， et al. Zhixiong Capsule （ZXC）， a traditional Chinese patent medicine， prevents atherosclerotic plaque formation in rabbit carotid artery and the related mechanism investigation based on network pharmacology and biological research[J]. Phytomedicine， 2019， 59： 152776.

[9] CHEN X P， GUO J J， BAO J L， et al. The anticancer properties of Salvia miltiorrhiza bunge （Danshen）： A systematic review[J]. Medicinal Research Reviews， 2014， 34（4）： 768-794.

[10] 黃詒森，張均田.丹參中三種水溶性成分的體外抗氧化作用[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1992，27（2）：96-100.

[11] YIN C Y， EVASON K J， ASAHINA K， et al. Hepatic stellate cells in liver development， regeneration， and cancer[J]. Journal of Clinical Investigation， 2013， 123（5）： 1902-1910.

[12] 宋? 偉.丹參新酮抗血小板作用及對血栓形成的影響[D].武漢： 華中科技大學(xué)，2018.

[13] 標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則（3）.標(biāo)準(zhǔn)樣品.定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法： GB/T 15000.3—1994[S].

[14] 孟? 蓉，尚汝田.卡爾費(fèi)休法測定水分的發(fā)展及其在某些領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].化學(xué)試劑，2001，23（1）：39-41，50.

[15] 耿巖玲，林云良，王岱杰，等.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[J].時珍國醫(yī)國藥，2020，31（4）：993-997.

[16] 馬玉翠，吳曉毅，王? 尉，等.β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（16）：90-95.

[17] 申? 誠，陳? 濤，王岱杰，等.獐牙菜醇苷國家天然產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[J].中國中藥雜志，2020，45（4）：955-960.

[18] 國家標(biāo)準(zhǔn)局.化工產(chǎn)品中水分含量的測定卡爾·費(fèi)休法（通用方法）：GB6283—1986[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1987.

[19] LI C J， XIA F， ZHANG W， et al. Semisynthesis of miltirone， 1， 2-dehydromiltirone， saligerone from carnosic acid and cytotoxities of their derivatives[J]. Tetrahedron Letters， 2018， 59（26）： 2607-2609.

（本文編輯? 蘇? 維）