• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    注射用肉毒毒素制劑及其研發(fā)進(jìn)展

    2021-11-29 00:48:29屈見聞趙雪蓮
    中國(guó)醫(yī)療美容 2021年3期
    關(guān)鍵詞:輕鏈肉毒A型

    屈見聞,潘 博,趙雪蓮

    (1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院整形外科醫(yī)院整形七科,北京,100144;2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院整形外科,石家莊 河北,050000)

    自1979年Scott[1]首次將A型肉毒毒素應(yīng)用于矯正眼外肌失衡作為斜視手術(shù)的替代方法以來(lái),注射肉毒毒素已成為各種局灶性肌張力障礙的治療選擇。1987年,加拿大眼科醫(yī)生Jean Carruthers在注射肉毒毒素治療眼瞼痙攣時(shí),偶然發(fā)現(xiàn)眉間紋消失了。她和她的丈夫皮膚科醫(yī)生Alastair Carruthers于1996年發(fā)表了一份關(guān)于肉毒毒素在美容中應(yīng)用的報(bào)告[2]。1992年,Schantz和Scott公布了A型肉毒毒素治療皺紋的用途。自那以后,開啟了肉毒毒素在美容整形領(lǐng)域的開創(chuàng)性治療,包括消除額肌紋、魚尾紋、頸闊肌紋、提眉、治療咬肌肥大、改善面部輪廓、腿部塑形等[3-5]。肉毒毒素注射已成為中國(guó)最受歡迎的美容手段之一,本文概述了注射用肉毒毒素的作用機(jī)制,目前美國(guó)和中國(guó)上市肉毒毒素制劑,以及肉毒毒素制劑的研發(fā)進(jìn)展。

    1 肉毒毒素的作用機(jī)制

    肉毒毒素是由肉毒桿菌(Clostridium botulinum)分泌的神經(jīng)毒素、外毒素,共有A-G七種血清型,盡管各種類型毒素的氨基酸序列和免疫性存在差異,但它們均顯示出相似的分子結(jié)構(gòu)。在細(xì)胞水平上,細(xì)菌分泌的毒素復(fù)合物包括肉毒毒素分子和非毒素蛋白(血凝素蛋白和非血凝素蛋白)。其中非毒素蛋白可以穩(wěn)定復(fù)合物中的毒素分子,同時(shí)防止其吸收時(shí)被消化酸變性[6]。事實(shí)上,復(fù)合物中起主要作用的是約150kDa無(wú)活性的單鏈多肽,其進(jìn)入機(jī)體后被活化成分子量為100kDa重鏈(High chain,HC)和50kDa的輕鏈(Light chain,LC),兩者通過(guò)二硫鍵、非共價(jià)相互作用以及由重鏈N端組成的獨(dú)特片段圍繞球形的輕鏈結(jié)構(gòu)域相連接[7]。

    最新研究表明,肉毒毒素作用機(jī)制大致分為5個(gè)過(guò)程[8]:①結(jié)合:通過(guò)消化道吸收或者局部注射的肉毒毒素進(jìn)入血液循環(huán)后,迅速來(lái)到神經(jīng)末梢突觸間隙,依靠H鏈的C端,與神經(jīng)節(jié)苷脂受體和突觸小泡腔中的受體結(jié)合[9];②內(nèi)吞:毒素通過(guò)內(nèi)吞作用形成突觸小泡進(jìn)入神經(jīng)末梢;③移位:內(nèi)吞體內(nèi)pH下降,毒素變構(gòu),借助重鏈的N端在內(nèi)吞體膜形成通道,將輕鏈結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿,此時(shí)依然通過(guò)二硫鍵保持連接[10];④釋放:在硫氧還原蛋白還原酶-硫氧還原蛋白系統(tǒng)(Thioredoxin reductase-thioredoxin system,TrxR-Trx)作用下,兩條鏈分離,釋放輕鏈至胞漿[11];⑤裂解:輕鏈裂解可溶性N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感因子附著蛋白受體(SNARE蛋白),阻礙乙酰膽堿胞吐的發(fā)生。輕鏈為一種Zn2+依賴性的蛋白內(nèi)切酶,可以裂解囊泡與質(zhì)膜融合過(guò)程中關(guān)鍵的三種SNARE蛋白,即突觸融合蛋白(Syntaxin)、SNAP-25(Synaptosomal-associated protein of 25kDa)和突觸囊泡蛋白(Synaptobrevin/VAMP),導(dǎo)致乙酰膽堿釋放障礙,從而引起神經(jīng)麻痹[12]。因此,微小劑量的肉毒毒素能夠治療由功能亢進(jìn)的神經(jīng)末梢引起的疾病。

    肉毒毒素在靶肌肉中的作用隨著時(shí)間的推移而減弱,神經(jīng)和肌肉之間的信號(hào)傳導(dǎo)會(huì)逐漸恢復(fù)。事實(shí)上,目前尚不清楚毒素是如何從神經(jīng)末梢代謝或以何種方式被清除的,對(duì)于毒素的吸收、分布、代謝和消除機(jī)制的認(rèn)識(shí)仍沒有完全掌握。有學(xué)者認(rèn)為,毒素不可逆地與突觸末梢結(jié)合后,這種蛋白會(huì)逐漸被人體降解,功能輕鏈從神經(jīng)終板清除[13],從而失去療效。亦有人認(rèn)為,SNAP-25再生或終板旁生新芽形成新的神經(jīng)聯(lián)接[14,15],使神經(jīng)肌肉的信號(hào)傳導(dǎo)和肌肉收縮力得以恢復(fù)。文獻(xiàn)回顧發(fā)現(xiàn),肉毒毒素用于面部除皺治療的持續(xù)時(shí)間大多數(shù)為3至4個(gè)月,偶爾也可達(dá)到6個(gè)月[16]。為達(dá)到理想治療效果,患者一年內(nèi)需多次注射以保持一定程度的改善,不僅增加治療費(fèi)用,也減弱了其便捷性。因此,科學(xué)家們?cè)诓粩嗵剿鞒掷m(xù)時(shí)間更長(zhǎng)、效果更佳、安全性更高的新型肉毒素。

    隨著BoNT/A適應(yīng)癥進(jìn)一步擴(kuò)大,制劑的抗原性問題變得越來(lái)越重要。關(guān)于BoNT/A誘導(dǎo)的免疫原性問題備受爭(zhēng)議,然而,已經(jīng)有許多治療失敗的報(bào)道和BoNT/A誘導(dǎo)的中和抗體的觀察[17]。研究發(fā)現(xiàn),毒素復(fù)合物中的蛋白如血凝素可作為佐劑,增加機(jī)體對(duì)制劑注射的免疫反應(yīng)。例如,血凝素-33是一種高度免疫反應(yīng)性的神經(jīng)毒素相關(guān)蛋白,可激活樹突細(xì)胞啟動(dòng)免疫反應(yīng)[18],去除血凝素-33可最大限度地降低免疫原性??贵w的形成是一個(gè)令人擔(dān)憂的問題,這可能導(dǎo)致隨著時(shí)間的推移療效下降,甚至治療無(wú)反應(yīng)[19]。據(jù)報(bào)道,長(zhǎng)期使用A型肉毒毒素治療超過(guò)10年以上的患者,體內(nèi)產(chǎn)生中和抗體的發(fā)病率高達(dá)13.9%[20]。若患者對(duì)毒素復(fù)合物形成中和抗體后,再次注射時(shí)需要使用更大量的毒素才能達(dá)到同樣的療效,這種情況必須更加謹(jǐn)慎注射,以防大量毒素釋放入血引起肉毒毒素中毒[21]。

    2 美國(guó)和中國(guó)上市的注射用肉毒毒素制劑

    用于醫(yī)學(xué)治療的肉毒毒素主要為A型和B型,A型作用持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng),而B型起效時(shí)間更快。目前,美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)4種在售的肉毒毒素制劑,包括3種A型肉毒毒素OnabotulinumtoxinA,IncobotulinumtoxinA,AbobotulinumtoxinA和1種B型肉毒毒素RimabotulinumtoxinB。中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)批準(zhǔn)上市的是OnabotulinumtoxinA,CBTX-A,以及2020年批準(zhǔn)的AbobotulinumtoxinA和韓國(guó)Hugel公司生產(chǎn)的注射用A型肉毒毒素。

    2.1 OnabotulinumtoxinA (Botox;Allergan,Inc.,Irvine,CA,USA)

    Botox,中文名為保妥適,是一種無(wú)菌、凍干粉形式的A型肉毒毒素。主要用于治療眼瞼痙攣、面肌痙攣及相關(guān)局灶性肌張力障礙,同時(shí)也可以暫時(shí)改善成人中度至重度的眉間紋。Botox由C botulinum細(xì)菌的Hall株產(chǎn)生,并在含有N-Z胺和酵母提取物的特定培養(yǎng)基中培養(yǎng)。共有每瓶50U,100U和200U三種規(guī)格,每100U中包含0.5 mg的人血白蛋白和0.9 mg的氯化鈉。最初,由于擔(dān)心毒素的熱穩(wěn)定性,在復(fù)原之前將藥瓶保存在冰箱中。但是證據(jù)表明,在使用前可以在冷藏溫度下安全存放至少36個(gè)月[22]。

    2.2 AbobotulinumtoxinA (Dysport;Ipsen Limited,Slough Berkshire,UK)[23]

    Dysport,中文名為吉適,是美國(guó)FDA在2009年批準(zhǔn)的第二種神經(jīng)調(diào)節(jié)劑[24],于2020年中國(guó)獲批。自1990年以來(lái),該制劑已在70多個(gè)國(guó)家/地區(qū)成功使用[25]。Dysport有300U和500U兩種規(guī)格,每500U中包含0.125 mg人血白蛋白和2.5 mg乳糖。Dysport與Botox在單位、化學(xué)性質(zhì)、生物活性、重量等方面都不同。因此,這兩種劑型不具有互換性,給藥也不能基于單一的轉(zhuǎn)化率。最近證據(jù)表明Dysport:Botox接近2.5:1對(duì)治療除皺有效[26]。與所有神經(jīng)毒素一樣,總體建議是使用毒素的量與肌肉肥大的程度相匹配,以達(dá)到預(yù)期效果。

    2.3 IncobotulinumtoxinA (Xeomin;Merz Pharmaceuticals GmbH,Frankfurt,Germany)[27]

    Xeomin是于2011年獲得FDA的批準(zhǔn)A型神經(jīng)毒素,用于治療慢性流涎、上肢痙攣、頸部肌張力障礙、眼瞼痙攣和眉間紋。共有50U和100U兩種規(guī)格,每100U中包含1 mg人血白蛋白和4.7mg蔗糖。Xeomin的純化過(guò)程將毒素從復(fù)合蛋白中分離出來(lái),最終得到僅含有150 kDa活性成分的凍干產(chǎn)品[28]。因此,理論上它的免疫原性較小,降低了中和抗體產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)[29]。如果療程中需要注射大劑量肉毒毒素時(shí),Xeomin具有一定優(yōu)勢(shì)。

    2.4 RimabotulinumtoxinB (Myobloc/NeuroBloc;Solstice Neurosciences Inc.,CA,USA)[30]

    Myobloc是美國(guó)目前唯一可用的B型肉毒毒素。臨床應(yīng)用幾乎僅限于神經(jīng)肌肉疾病,包括頸部肌張力障礙,不過(guò)它已經(jīng)成功地用于說(shuō)明書注明以外的面部動(dòng)態(tài)皺紋治療[31]。Myobloc是一種非凍干和穩(wěn)定的液體制劑,規(guī)格有2500U/0.5mL,5000U/mL和10000U/2mL,其中每2500U/0.5mL中包含0.235mg人血白蛋白、2.9mg氯化鈉和1.35mg琥珀酸鈉。與療效可以持續(xù)3至4個(gè)月的A型肉毒毒素相比,Myobloc起效更快,但作用持續(xù)時(shí)間更短(約2個(gè)月)[32],而且由于溶液的酸堿度呈酸性,注射時(shí)可能會(huì)引起疼痛,有一定的不適感。Myobloc與A型肉毒毒素?zé)o交叉反應(yīng),可有效地用于接受大劑量毒素且對(duì)A型肉毒素?zé)o反應(yīng)或產(chǎn)生中和抗體的患者[33]。

    2.5 CBTX-A (Prosigne/Lantox/Redux;Lanzhou Biological Products Institute,Lanzhou,China)

    CBTX-A,商品名為衡力,是由中國(guó)蘭州生物制品研究所生產(chǎn),活性成分為A型肉毒結(jié)晶毒素,生產(chǎn)用菌種為產(chǎn)毒力高的A型肉毒梭菌Hall株。每瓶含A型肉毒毒素50U或100U,輔料為蔗糖、右旋糖苷、明膠。相對(duì)于同體人血白蛋白,明膠為異體蛋白,需警惕過(guò)敏反應(yīng)。CBTX-A主要用于治療眼瞼痙攣,面肌痙攣等成人患者及某些斜視,特別是急性麻痹性斜視,對(duì)于改善眉間紋也有一定的療效[34]。CBTX-A在≤8 ℃條件下可以保存3年,在室溫保存期限為6個(gè)月,藥品復(fù)溶后在2~8 ℃無(wú)菌條件可保存6天[35]。

    2.6 LetibotulinumtoxinA (Botulax/Letybo;Hugel Inc.,Gangwon-do,Republic of Korea)

    Letybo,中文名稱為樂提葆,韓國(guó)生物制藥公司Hugel生產(chǎn)的注射用A行肉毒毒素,于2020年獲得中國(guó)批準(zhǔn)。生產(chǎn)菌種為肉毒梭菌CBFC26[36],有效成分為900kDa肉毒毒素,賦形劑為氯化鈉和人血白蛋白,規(guī)格為100U/瓶,儲(chǔ)存條件在2-8℃。目前主要用于治療成人原發(fā)性眼瞼痙攣,中風(fēng)后上肢痙攣,2歲以上腦癱患兒動(dòng)態(tài)馬蹄足畸形,以及暫時(shí)改善與皺眉肌相關(guān)的皺紋,和成年人眼輪匝肌活動(dòng)相關(guān)的眼部皺紋[37]。

    雖然不同形式的肉毒毒素顯示出相似的效果,但每種產(chǎn)品都有獨(dú)特的制造工藝、賦形劑、配方等,且每種神經(jīng)調(diào)節(jié)劑都有一條非平行的劑量-反應(yīng)曲線,這意味著它們的相對(duì)性能在一系列劑量比范圍內(nèi)并不一致[38]。因此,它們并不具有生物同一性。一種給定單位的毒素劑量與另一種毒素的轉(zhuǎn)化并非恒定的。臨床醫(yī)生必須徹底了解每種產(chǎn)品的特性和臨床性能,充分考慮患者的個(gè)性化需求,結(jié)合治療區(qū)域和適當(dāng)劑量,以實(shí)現(xiàn)安全有效地使用。

    3 研發(fā)進(jìn)展

    3.1 新型制劑

    多數(shù)具有藥理作用的蛋白質(zhì)具有粘附于固體表面的特性,在將其注入容器中時(shí),部分蛋白質(zhì)會(huì)粘附于容器內(nèi)壁而造成活性成分的損失。同時(shí),蛋白質(zhì)易被氧化或被降解成小片段。因此商品化肉毒毒素制劑除包含純毒素分子或毒素復(fù)合物外,還添加了一種或多種賦形劑,如蛋白、離子化合物、糖等。蛋白主要指人血清白蛋白或明膠。然而,它們是動(dòng)物來(lái)源的蛋白質(zhì),有攜帶血液中病原體而引發(fā)感染的風(fēng)險(xiǎn)。部分患者可能會(huì)對(duì)其產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng),在重復(fù)注射后引起過(guò)敏[39]。

    DaxibotulinumtoxinA for injection (DAXI/RT002,Revance Therapeutics,Inc,Newark,CA),一款新研發(fā)的注射用A型肉毒素,不含人血白蛋白,避免了上述不良反應(yīng)的產(chǎn)生。其主要成分為純化的150 kDa神經(jīng)毒素,與凍干粉中的專利肽一起配制[40]。該肽具有帶正電荷的賴氨酸主鏈,可以與負(fù)電荷的核心神經(jīng)毒素靜電結(jié)合,并允許在沒有人血清白蛋白的情況下配制DAXI,且保證其重構(gòu)前的穩(wěn)定性和作用效果[41]。此外,已證明該肽可提供高親和結(jié)合力,從而限制了注射后肉毒毒素的擴(kuò)散,表現(xiàn)出更長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間。對(duì)小鼠腓腸肌分別注射DAXI和Botox后測(cè)定肌肉麻痹結(jié)果顯示,兩者具有相同效力,且相鄰脛骨前肌的肌肉麻痹結(jié)果表明DAXI的擴(kuò)散明顯較少。當(dāng)使用既定劑量分別注射兩種制劑時(shí),DAXI的作用持續(xù)時(shí)間可延長(zhǎng)58%至100%[42]。此前人們認(rèn)為,毒素復(fù)合物的分子大小決定了它在組織中的擴(kuò)散能力,然而實(shí)驗(yàn)研究表明,擴(kuò)散系數(shù)與毒素復(fù)合物的大小無(wú)關(guān)[43]。目前已開展了使用DAXI治療眉間紋的1-3期臨床試驗(yàn)[44-46],結(jié)果顯示注射40U DAXI患者耐受性好,且具有最有利的風(fēng)險(xiǎn)-效益比,與20U Botox相比,表現(xiàn)出更高的應(yīng)答率和更長(zhǎng)的應(yīng)答持續(xù)時(shí)間[47]。同時(shí),DAXI治療皺紋嚴(yán)重程度恢復(fù)至基線的中位時(shí)間≥24周[48]。因此,其極有可能成為持續(xù)時(shí)間為6個(gè)月甚至更久的長(zhǎng)效注射用A型肉毒毒素。

    3.2 液體組合制劑

    肉毒毒素分離的過(guò)程由一系列酸制劑產(chǎn)生,形成由活性毒素和血凝素蛋白組成的結(jié)晶復(fù)合體。然后將該制劑重新溶解在鹽水和蛋白中,消毒真空干燥,以凍干粉形式保存及運(yùn)輸。凍干或冷凍干燥的過(guò)程,是指先將物質(zhì)凍結(jié),然后降低周圍壓力,使凍結(jié)凝固的水升華為氣相,這種方法可以最大限度降低由高溫引起的蛋白質(zhì)變性風(fēng)險(xiǎn)。然而通過(guò)凍干等方式制備的干粉制品,需要在使用前進(jìn)行重新溶解,使用時(shí)不方便。為了保證作用效果,需要仔細(xì)配制準(zhǔn)確的濃度,溶解過(guò)程中存在稀釋造成毒素量的偏差。Botox制造商Allergan建議將不含防腐劑的生理鹽水緩慢注射到制劑小瓶中,通過(guò)緩慢旋轉(zhuǎn)小瓶將肉毒毒素與鹽水混合,避免劇烈攪拌,溶解后需保存在2℃至8℃之間,且24小時(shí)內(nèi)使用[22]。有些人認(rèn)為,泡沫的形成和劇烈攪拌可能會(huì)使肉毒毒素溶液易受氣泡引起的表面變性,或氣泡可能會(huì)導(dǎo)致毒素分散在小瓶表面從而影響療效。此外,稀釋過(guò)程可能會(huì)導(dǎo)致污染[49]。因此,對(duì)能夠改善便利性無(wú)需重新溶解,且能夠保證毒素穩(wěn)定有效的液體組合制劑的需求不斷增長(zhǎng)。研究者通過(guò)將一些賦形劑,如離子化合物、糖、聚山梨酯、糖醇等與毒素按不同比例組合,可以增強(qiáng)制劑的熱穩(wěn)定性,增加溶解度,還可以減少聚集程度,在液態(tài)下穩(wěn)定毒素分子并防止其變性。不僅可在常溫以上的高溫下維持肉毒毒素的活性,還可以維持長(zhǎng)期的貯存穩(wěn)定性。

    3.3 工程化肉毒毒素

    目前,市售肉毒毒素均通過(guò)培養(yǎng)天然肉毒桿菌,隨后進(jìn)行一系列分離和純化毒素復(fù)合體來(lái)生產(chǎn)的,這種方式過(guò)程復(fù)雜且蛋白產(chǎn)量低。在下一代測(cè)序和重組技術(shù)的時(shí)代,基因工程重組蛋白的生產(chǎn)達(dá)到了新高度。通過(guò)將BoNT的DNA編碼部分(開放閱讀框)整合到大腸桿菌或其他微生物中,帶有BoNT開放閱讀框的微生物隨后產(chǎn)生毒素蛋白[43]。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)允許使用簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。生物安全風(fēng)險(xiǎn)也沒有培養(yǎng)肉毒桿菌大,因?yàn)橛糜诋愒幢磉_(dá)的大腸桿菌菌株沒有致病性。這將為BoNT及其他神經(jīng)毒素的轉(zhuǎn)基因提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化和更安全的生產(chǎn)過(guò)程[50]。事實(shí)上,構(gòu)建全功能重組BoNT絕非易事,其中一個(gè)重要因素是成熟蛋白的雙鏈結(jié)構(gòu)。如前所述,雖然最終發(fā)揮毒素效應(yīng)的是輕鏈,單鏈BoNT蛋白也能夠進(jìn)入神經(jīng)元并在一定程度上抑制囊泡釋放,但它們的效力較低。此外,在不存在重鏈的情況下,分離的輕鏈在水溶液中難以溶解,且易受到蛋白水解酶降解。可見,雙鏈的二肽形式是BoNT發(fā)揮完全神經(jīng)毒素所必需的[51]。這就要求保留連接兩條鏈的二硫鍵、結(jié)構(gòu)域,同時(shí)保證兩者之間正確的折疊。因此,在體外單獨(dú)表達(dá)并將純化的重鏈和輕鏈生產(chǎn)活性雙鏈的過(guò)程是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。

    3.4 透皮給藥

    目前臨床上使用的肉毒毒素制劑均為注射給藥,然而注射伴隨一些副作用,例如注射部位的刺激、炎癥、感染、出血等。對(duì)于多汗癥等情況,可能需要在敏感部位(如手掌或腋窩)進(jìn)行多次皮下注射,導(dǎo)致患者不適甚至疼痛。透皮給藥系統(tǒng) (Transdermal drug delivery system,TDDS)作為一種非侵入性治療方法,通過(guò)在皮膚表面給藥,使藥物以近似恒定的速率進(jìn)入皮膚,產(chǎn)生全身或局部治療效果,具有良好的順應(yīng)性及非創(chuàng)傷給藥的特點(diǎn),成為目前研發(fā)的重點(diǎn)。從凝膠、乳膏、軟膏到即用型貼劑,增加了便利性,并減少了注射造成的不適。但由于生物屏障的限制及毒素分子量過(guò)大,難以透過(guò)皮膚,故需借助載體或外界設(shè)備透過(guò)皮膚屏障。目前正在開發(fā)的無(wú)針法遞送藥物的范圍相對(duì)淺表,尚不能替代那些涉及到使用BoNT治療深層肌肉運(yùn)動(dòng)障礙的注射方法。此外,這種方法缺乏靶向性,存在進(jìn)入任何細(xì)胞的可能,會(huì)增加非特異性毒性的風(fēng)險(xiǎn)。

    3.4.1 細(xì)胞穿透肽(Cell Penetrating Peptides,CPPs)

    CPPs主要指來(lái)源于不同生物的短肽,具有共價(jià)或非共價(jià)附著到大分子(包括肽、蛋白質(zhì)、核酸等)上的能力,并攜帶它們穿過(guò)細(xì)胞膜,而不發(fā)生任何構(gòu)象變化[52]。常見的CPPs有HIV-TAT的多肽片段、觸角足突變(Antennapedia)?;罴?xì)胞攝取CPPs的確切機(jī)制仍不清楚,目前推測(cè)與能量無(wú)關(guān)的細(xì)胞膜“直接轉(zhuǎn)運(yùn)”和能量依賴的“胞吞作用介導(dǎo)的易位”有關(guān)[53]。Saffarian等[54]通過(guò)將BoNT/A輕鏈與TAT肽共價(jià)連接,構(gòu)建了一種重組蛋白TAT-BoNT/A(1-448)。用BoNT/A輕鏈代替全蛋白來(lái)降低最終分子大小,增加了皮膚吸收的可能性。通過(guò)在小鼠皮膚表面上局部施用含TAT-BoNT/A溶液,免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)顯示30分鐘后觀察到了蛋白滲透的跡象,同時(shí)細(xì)胞內(nèi)蛋白水平隨著時(shí)間的推移而增加。高效液相色譜分析表明,這種重組蛋白的生物活性是BoNT/A(1-448)蛋白的1.5倍。因此,他們認(rèn)為TAT-BoNT/A具有生物活性,與作為對(duì)照的BoNT/A(1-448)相比,可以在體外和體內(nèi)成功地通過(guò)活細(xì)胞傳遞,且更有效。Revance公司正在開發(fā)一種外用產(chǎn)品RT001(A型肉毒毒素凝膠)[55],由純化的150kDa BoNT/A蛋白組成,配制在含有基于CPP的滲透增強(qiáng)肽賦形劑RTP004的泊洛沙姆(Poloxamer)凝膠中。隨后,開展了一系列2期研究證明RT001在治療中度至重度外側(cè)魚尾紋或多汗癥方面是安全有效的[56]。2015年,Revance宣布已開始在一項(xiàng)3期關(guān)鍵研究中對(duì)患者進(jìn)行給藥,以評(píng)估RT001治療外側(cè)魚尾紋的安全性和有效性。然而該研究未達(dá)到其共同主要終點(diǎn),因此停止了進(jìn)一步的開發(fā)計(jì)劃[57]。

    3.4.2 納米技術(shù)

    許多機(jī)構(gòu)正在研發(fā)出能夠幫助大分子和小分子藥物滲透到完整皮膚中的納米粒子。Chajchir等[58]報(bào)道了一種BoNT/A乳霜制劑(CosmeTox),每毫升含有2U BoNT/A。這種新的藥物遞送方法基于小于1-10nm的混合膠束離子納米粒子技術(shù)(Ionic nanoparticle technology,InParT),該技術(shù)將活性分子封裝在載體中,以增加其在皮膚中的生物利用度。Chajchir等希望將其用于治療那些害怕針頭和不想注射的人,或那些想延長(zhǎng)肉毒毒素注射效果的人,在注射治療后長(zhǎng)期使用這種乳膏作為維持治療,以減緩皺紋再次形成的過(guò)程。他們隨機(jī)選擇了40名女性受試者,每天晚上在面部、下巴和頸部外用CosmeTox或安慰劑霜,連續(xù)使用4-7周。使用CosmeTox的受試者整個(gè)過(guò)程總計(jì)外用BoNT/A可達(dá)50-70U。根據(jù)患者報(bào)告的面部線條結(jié)果評(píng)分問卷結(jié)果顯示,CosmeTox可以顯著改善面部特征和年齡外觀。然而由于使用固定的BoNT/A劑量非常低,這一結(jié)果令人驚訝,而且試驗(yàn)結(jié)果是根據(jù)患者主觀感受填寫問卷,制劑的真實(shí)療效還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

    3.4.3 借助外界設(shè)備

    當(dāng)含有小分子的液體置于弱電流下時(shí),分子可獲得容易穿透完整皮膚表面的能力,這種技術(shù)稱為離子電滲療法(Iontophoresis)。通過(guò)這種方法,許多具有小分子、表面極性和適當(dāng)水溶性的藥物可以安全無(wú)痛地輸送到皮膚中。BoNT/A為負(fù)電荷水溶性藥物,滿足離子導(dǎo)入的條件。Kavanagh等[59]利用離子電滲裝置(Iomed Phoresor II) 輔助BoNT/A透過(guò)皮膚,對(duì)這兩名嚴(yán)重手多汗癥患者進(jìn)行治療。當(dāng)用淀粉碘試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)試時(shí),治療結(jié)果令人滿意,甚至接近于注射型肉毒毒素(約70%),證明了離子電滲確實(shí)可以成功地輸送肉毒毒素。然而,存在一些限制,包括該方法中使用的設(shè)備成本相對(duì)較高,長(zhǎng)期和高頻率的治療周期增加了最終成本,另一方面,增加了皮膚過(guò)敏的可能性[60]。

    經(jīng)皮氣動(dòng)噴射(Transcutaneous pneumatic injection,TPI)是指根據(jù)治療目的調(diào)節(jié)滲透壓力和溶液體積,將特定溶液微創(chuàng)但強(qiáng)力地輸送到皮膚中。Kim等[61]報(bào)告了一種利用壓力和劑量控制、無(wú)針、經(jīng)皮氣動(dòng)噴射法治療腋窩和掌跖多汗癥。在局部應(yīng)用麻醉乳膏后,使用TPI裝置(Shemax?;Shenb Co.,Ltd)在2.05巴(壓強(qiáng)單位)下以0.08mL/shot將含有BoNT/A溶液噴射至治療區(qū)域,通過(guò)淀粉碘測(cè)試結(jié)果和多汗癥疾病嚴(yán)重程度量表評(píng)分來(lái)評(píng)估其功效。研究表明低濃度BoNT/A可以有效且安全地治療了腋窩和掌跖多汗癥,利用二維超聲發(fā)現(xiàn)BoNT/A在腋窩和掌跖皮膚的整個(gè)真皮和真皮-皮膚脂肪連接處產(chǎn)生了界限分明的浸潤(rùn)區(qū)。然而,這項(xiàng)研究參與者少,隨訪時(shí)間短,缺乏對(duì)照組,并且沒有評(píng)估出汗的客觀指標(biāo)。因此,需要在更大的人群中進(jìn)一步證實(shí)其安全性和有效性。此外,沒有可靠的組織學(xué)證據(jù)證明BoNT/A在噴射后滲透到活的皮膚組織內(nèi)??紤]到BoNT/A全蛋白的大尺寸(150kDa),它不太可能通過(guò)具有選擇性滲透性的皮膚細(xì)胞膜,如果正如作者所述,應(yīng)該進(jìn)一步解釋和探究BoNT/A進(jìn)入皮膚的分子機(jī)制。

    此外,也有將低頻超聲、X射線、核磁共振等與BoNT透皮給藥相結(jié)合[62],這些方法將進(jìn)一步擴(kuò)大肉毒毒素在醫(yī)學(xué)美容領(lǐng)域的應(yīng)用。

    4 結(jié)論

    肉毒毒素的使用為許多疾病提供了替代治療方案,也為整形美容行業(yè)帶來(lái)了巨大改變。市場(chǎng)上各類產(chǎn)品由于其不同的生產(chǎn)過(guò)程和條件,在單位、化學(xué)性質(zhì)、生物活性和重量方面有所不同,因此不可簡(jiǎn)單地互換。為了安全的臨床實(shí)踐,并獲得最佳療效,從業(yè)者必須徹底了解每種制劑的特性、規(guī)格、轉(zhuǎn)化率和安全性(毒素?cái)U(kuò)散和免疫原性)等臨床問題。此外,各大機(jī)構(gòu)也在加快研發(fā)新興產(chǎn)品,新型制劑展現(xiàn)出巨大潛能,如提供更長(zhǎng)的持續(xù)時(shí)間、更優(yōu)的治療效果、更少的不良反應(yīng),甚至是更多樣化的給藥途徑。雖要拋棄新鮮事物“猛于虎”的思想,也應(yīng)對(duì)其臨床應(yīng)用的可行性進(jìn)行全面地評(píng)價(jià)。隨著對(duì)毒素作用機(jī)制的更好理解和生物技術(shù)的進(jìn)步,相信未來(lái)的產(chǎn)品會(huì)為患者提供更多的選擇。

    猜你喜歡
    輕鏈肉毒A型
    輕鏈檢測(cè)在慢性腎臟病中的應(yīng)用評(píng)估
    骨髓瘤相關(guān)性腎輕鏈淀粉樣變1例
    A型肉毒毒素聯(lián)合透明質(zhì)酸注射治療面下1/3皮膚衰老
    DF100A型發(fā)射機(jī)馬達(dá)電源板改進(jìn)
    新聞傳播(2015年6期)2015-07-18 11:13:15
    A型肉毒毒素聯(lián)合眼袋整形術(shù)治療眼周皮膚松弛
    A型肉毒素在注射面部皺紋中的應(yīng)用及體會(huì)
    A型肉毒毒素聯(lián)合減張壓迫法在面部整形切口的應(yīng)用
    AZA型號(hào)磨齒機(jī)工件主軸的改造
    高糖對(duì)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性及肌球蛋白輕鏈磷酸化的影響
    新西蘭恒天然濃縮乳清蛋白檢出肉毒桿菌
    性色avwww在线观看| 国产乱人视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲国产最新在线播放| 观看美女的网站| 草草在线视频免费看| 久久这里只有精品中国| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲精品国产成人久久av| 国产一区亚洲一区在线观看| 美女大奶头视频| 看非洲黑人一级黄片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久成人免费电影| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品国产三级专区第一集| 男女啪啪激烈高潮av片| 看免费成人av毛片| 黄色日韩在线| 特级一级黄色大片| 亚洲,欧美,日韩| 大香蕉久久网| 日本熟妇午夜| 女人久久www免费人成看片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 中文字幕久久专区| av专区在线播放| 秋霞伦理黄片| 天堂影院成人在线观看| 国产在视频线在精品| 中文在线观看免费www的网站| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲在线自拍视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲在线自拍视频| 亚洲三级黄色毛片| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲在久久综合| 高清视频免费观看一区二区 | 精品久久国产蜜桃| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品三级大全| av一本久久久久| 亚洲国产欧美人成| 天堂√8在线中文| 成人特级av手机在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 色播亚洲综合网| 久久久色成人| av卡一久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 插阴视频在线观看视频| 国产黄色小视频在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 天美传媒精品一区二区| 日本免费a在线| 嫩草影院新地址| 舔av片在线| 国国产精品蜜臀av免费| 超碰av人人做人人爽久久| 一区二区三区四区激情视频| 久久综合国产亚洲精品| 91久久精品国产一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 激情 狠狠 欧美| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 好男人在线观看高清免费视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久久久久久久丰满| 成人综合一区亚洲| av专区在线播放| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美+日韩+精品| 免费无遮挡裸体视频| 我的老师免费观看完整版| 国产精品国产三级专区第一集| 国产黄色免费在线视频| av免费观看日本| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产伦精品一区二区三区视频9| 在线免费观看的www视频| 久久久久久久久久黄片| 久久久精品94久久精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 插阴视频在线观看视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产视频内射| 99久久中文字幕三级久久日本| 91aial.com中文字幕在线观看| 美女主播在线视频| 国产 亚洲一区二区三区 | 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 毛片一级片免费看久久久久| 精品久久久精品久久久| 久99久视频精品免费| 免费看日本二区| 亚洲不卡免费看| 成人欧美大片| 国产成人freesex在线| 欧美三级亚洲精品| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲av中文av极速乱| 看非洲黑人一级黄片| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲伊人久久精品综合| 麻豆国产97在线/欧美| 国产免费视频播放在线视频 | 欧美区成人在线视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产不卡一卡二| 男女边吃奶边做爰视频| 观看美女的网站| 免费观看的影片在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网 | 天天一区二区日本电影三级| 看十八女毛片水多多多| 成年女人看的毛片在线观看| 免费观看av网站的网址| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产精品av视频在线免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 六月丁香七月| 国产淫片久久久久久久久| 成年av动漫网址| 午夜视频国产福利| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产伦在线观看视频一区| 大话2 男鬼变身卡| 国产精品av视频在线免费观看| 免费大片18禁| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲成人一二三区av| 成人欧美大片| 全区人妻精品视频| av播播在线观看一区| 久久久久久久久久黄片| 午夜亚洲福利在线播放| 在线 av 中文字幕| 国产91av在线免费观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品.久久久| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲av免费在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费少妇av软件| av天堂中文字幕网| freevideosex欧美| 久久久久久久久久黄片| 日韩av在线大香蕉| 免费黄色在线免费观看| 亚洲三级黄色毛片| 波野结衣二区三区在线| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产成人91sexporn| 综合色av麻豆| 禁无遮挡网站| 超碰97精品在线观看| 精品一区二区三卡| 波野结衣二区三区在线| av播播在线观看一区| 国产精品人妻久久久影院| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 在线 av 中文字幕| 在线观看人妻少妇| 不卡视频在线观看欧美| 日韩人妻高清精品专区| 国产成人免费观看mmmm| 久久6这里有精品| 国产美女午夜福利| 久久久久久久久久久丰满| 特级一级黄色大片| freevideosex欧美| 国产精品三级大全| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲人成网站在线播| 搞女人的毛片| 午夜日本视频在线| 一级毛片 在线播放| 美女内射精品一级片tv| 乱系列少妇在线播放| 中文字幕免费在线视频6| 久久亚洲国产成人精品v| 中文字幕av成人在线电影| 2018国产大陆天天弄谢| 毛片一级片免费看久久久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产又色又爽无遮挡免| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 丰满乱子伦码专区| 国产淫片久久久久久久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 伊人久久国产一区二区| 搞女人的毛片| 欧美bdsm另类| 18禁在线播放成人免费| 国产精品一区www在线观看| 丝袜喷水一区| 亚洲最大成人中文| 久久99精品国语久久久| 精品久久国产蜜桃| 最后的刺客免费高清国语| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 精品国产露脸久久av麻豆 | 视频中文字幕在线观看| 水蜜桃什么品种好| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久欧美国产精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精品日韩av在线免费观看| 婷婷色综合www| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 永久网站在线| 又大又黄又爽视频免费| 18禁在线播放成人免费| 久久久久精品性色| 老女人水多毛片| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产视频首页在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 国产久久久一区二区三区| 亚洲无线观看免费| 午夜福利高清视频| 美女黄网站色视频| 亚洲高清免费不卡视频| 久久草成人影院| 99re6热这里在线精品视频| 国产三级在线视频| 一级毛片电影观看| 成年人午夜在线观看视频 | 九草在线视频观看| 国产黄色免费在线视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲四区av| av女优亚洲男人天堂| av线在线观看网站| 看十八女毛片水多多多| 男女下面进入的视频免费午夜| av在线播放精品| 麻豆乱淫一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 五月玫瑰六月丁香| 午夜老司机福利剧场| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲欧洲国产日韩| 观看美女的网站| 极品教师在线视频| 国产在线男女| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲av男天堂| 日韩亚洲欧美综合| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲成色77777| 日韩精品有码人妻一区| 成人午夜高清在线视频| 日本黄色片子视频| 亚洲,欧美,日韩| av播播在线观看一区| 一级二级三级毛片免费看| 91精品国产九色| 老女人水多毛片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | av专区在线播放| 亚洲电影在线观看av| 午夜福利视频精品| 成人av在线播放网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 身体一侧抽搐| 777米奇影视久久| 亚洲四区av| 久久这里有精品视频免费| 午夜日本视频在线| 乱人视频在线观看| 女人被狂操c到高潮| 人妻一区二区av| 久久国产乱子免费精品| 一个人免费在线观看电影| 亚洲精品456在线播放app| 国产黄片美女视频| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 国产黄片视频在线免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 在线a可以看的网站| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久人人爽人人片av| 国产精品人妻久久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 99热6这里只有精品| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品人妻熟女av久视频| 久久这里有精品视频免费| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产高清国产精品国产三级 | 永久免费av网站大全| 97超视频在线观看视频| 春色校园在线视频观看| 真实男女啪啪啪动态图| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧洲日产国产| 秋霞在线观看毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 91av网一区二区| 日韩av在线大香蕉| 亚洲在线自拍视频| av福利片在线观看| eeuss影院久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 免费人成在线观看视频色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产精品一二三区在线看| 中国美白少妇内射xxxbb| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费看美女性在线毛片视频| 国产单亲对白刺激| 看免费成人av毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 丝袜喷水一区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲自偷自拍三级| 老司机影院成人| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产黄频视频在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 少妇的逼水好多| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日韩欧美精品免费久久| 青春草视频在线免费观看| 日日啪夜夜撸| 毛片一级片免费看久久久久| 国产在视频线在精品| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品一区www在线观看| 久久久久久久久中文| 国产精品福利在线免费观看| 欧美性感艳星| 99热6这里只有精品| 久久久久久久久久成人| 精品久久久久久电影网| 一本久久精品| 一级爰片在线观看| 在线a可以看的网站| 亚洲自偷自拍三级| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久99精品国语久久久| 久久综合国产亚洲精品| 久久草成人影院| 精品酒店卫生间| 久久久久精品久久久久真实原创| 嫩草影院入口| 国产 一区 欧美 日韩| 大话2 男鬼变身卡| 一级a做视频免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 尾随美女入室| 日本黄大片高清| 色综合站精品国产| 韩国av在线不卡| 午夜免费观看性视频| 91久久精品电影网| 色哟哟·www| 女人被狂操c到高潮| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久久国产一区二区| 午夜精品国产一区二区电影 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 午夜日本视频在线| 日本av手机在线免费观看| 欧美成人午夜免费资源| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久精品欧美日韩精品| 直男gayav资源| 国产精品综合久久久久久久免费| 一级二级三级毛片免费看| 成年av动漫网址| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 久99久视频精品免费| 麻豆成人av视频| 美女黄网站色视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 白带黄色成豆腐渣| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 久久久久久久久大av| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 中文字幕av成人在线电影| 大片免费播放器 马上看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 亚洲av免费高清在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 成人二区视频| 国产午夜福利久久久久久| 嫩草影院精品99| 亚洲不卡免费看| av播播在线观看一区| 最后的刺客免费高清国语| 中文资源天堂在线| 国产 亚洲一区二区三区 | 一本一本综合久久| 久久久久国产网址| 国产精品一区二区三区四区久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 插逼视频在线观看| 综合色丁香网| 午夜视频国产福利| 日韩中字成人| 亚洲欧美一区二区三区国产| .国产精品久久| 欧美性感艳星| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产不卡一卡二| 五月天丁香电影| 欧美人与善性xxx| 99久久中文字幕三级久久日本| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产探花极品一区二区| 高清午夜精品一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 欧美3d第一页| av.在线天堂| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产亚洲av天美| 熟女电影av网| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久久久性生活片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 三级毛片av免费| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 禁无遮挡网站| 日韩成人伦理影院| 一级片'在线观看视频| 直男gayav资源| 久久99精品国语久久久| 国产在视频线精品| 天天一区二区日本电影三级| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久久久久久大尺度免费视频| ponron亚洲| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲av男天堂| 极品教师在线视频| 国产熟女欧美一区二区| 久久6这里有精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 免费观看a级毛片全部| 午夜激情福利司机影院| 日韩欧美 国产精品| 97热精品久久久久久| 国产一区有黄有色的免费视频 | 午夜亚洲福利在线播放| 久久久欧美国产精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品一区蜜桃| 黄片wwwwww| 久久99热6这里只有精品| 国内精品美女久久久久久| 精品午夜福利在线看| 日本一本二区三区精品| 久久99蜜桃精品久久| 51国产日韩欧美| 在线天堂最新版资源| 国产高清有码在线观看视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 成人国产麻豆网| 国产69精品久久久久777片| 1000部很黄的大片| 亚洲av.av天堂| 极品教师在线视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看免费高清a一片| 不卡视频在线观看欧美| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男女那种视频在线观看| 精品久久久久久电影网| 欧美3d第一页| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久精品夜色国产| 日本免费在线观看一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 伦精品一区二区三区| 亚洲精品国产成人久久av| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人精品婷婷| 成人美女网站在线观看视频| 免费电影在线观看免费观看| 国产91av在线免费观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 精品久久久精品久久久| 欧美区成人在线视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 午夜激情福利司机影院| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 国产久久久一区二区三区| 国产乱人视频| 免费观看性生交大片5| 亚洲,欧美,日韩| 男女国产视频网站| 亚洲精品一二三| 国产精品三级大全| 国产久久久一区二区三区| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品无大码| 一级av片app| 国产一区二区三区av在线| 日韩一区二区三区影片| 免费高清在线观看视频在线观看| 五月天丁香电影| 亚洲精品视频女| 国产老妇伦熟女老妇高清| 插逼视频在线观看| 日本一二三区视频观看| 免费大片黄手机在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 成人亚洲精品一区在线观看 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品一区二区三区四区久久| 一级爰片在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产高清三级在线| 五月玫瑰六月丁香| 国产高清有码在线观看视频| 国产成人freesex在线| 欧美性感艳星| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 五月玫瑰六月丁香| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国内揄拍国产精品人妻在线| 中文在线观看免费www的网站| 日韩三级伦理在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 国产一区亚洲一区在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 赤兔流量卡办理| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 一级av片app| 草草在线视频免费看| 人妻系列 视频| 国产av在哪里看| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久九九精品影院| 永久免费av网站大全| 麻豆乱淫一区二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩一区二区三区影片| av国产免费在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一级毛片 在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品av视频在线免费观看| 国产探花在线观看一区二区| 日韩强制内射视频| 国产午夜精品一二区理论片| av在线天堂中文字幕| 女人久久www免费人成看片| 成人无遮挡网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产视频内射| 欧美bdsm另类| 在线观看人妻少妇| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品99久久久久久久久| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美三级亚洲精品| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产乱人视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 一级爰片在线观看| 欧美性感艳星|