文 李娜(樂山市疾病預(yù)防控制中心)
流行性感冒病毒簡稱為流感病毒,是臨床上常見的急中性隸呼屬吸于道正傳黏染液性病疾毒病科。,流流感感病病毒毒在所病具毒有分的類遺學(xué)傳物質(zhì)由8個大小不等的獨(dú)立單股負(fù)鏈RNA片段組成,總共編碼10個蛋白。
流感病毒易發(fā)生變異,其中又主要分為三種類型,分別為甲、乙、丙,甲型流感病毒相較于乙、丙更易發(fā)生抗原變異,同時會感染人及多種動物(蝙蝠、豬、馬、禽等),并且會引起大流行、中小流行。乙型流感病毒變異的幾率相對更小,病毒會感染人類,并引起局部爆發(fā)和小流行。丙型流感病毒較為穩(wěn)定,可感染人類,大多數(shù)丙型流感病毒感染患者多為散發(fā)病例。對于流感病毒來說,在全世界都可能出現(xiàn)爆發(fā)流行,2003年冬-2004年春在亞洲地區(qū)廣泛流行的人禽流感突發(fā)公共衛(wèi)生事件引起了極大的轟動,而一旦感染禽流感就急需在早期做出快速的實(shí)驗(yàn)室診斷,鑒于此建立快速、有效、科學(xué)的診斷方式無論是對于病人自身還是對于社會來說都至關(guān)重要。
病毒分離培養(yǎng)。病毒分離培養(yǎng)是目前臨床對流感病毒檢測的有效方式之一,由于流感病毒可以在雞胚中正常生長,因此早期常應(yīng)用雞胚分離流感病毒,通常情況下采用9日齡-11日齡的雞胚,經(jīng)由尿囊腔實(shí)施接種,對病毒進(jìn)行有效分離,在成功接種實(shí)施后24-96h將雞胚中的尿囊液加以收集,24h內(nèi)棄掉死亡的雞胚,用細(xì)胞培養(yǎng)液的血凝活性對病毒的增殖及存在做進(jìn)一步探討、證實(shí),如若初次無法正常分離病毒,可以盲傳2代再實(shí)施檢測。近些年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展、進(jìn)步,在流感病毒檢測過程中發(fā)現(xiàn)雞胚分離出的流感病毒,其抗原性與原始采集標(biāo)本存在一定的差異,而經(jīng)由馬-達(dá)犬腎細(xì)胞分離病毒的抗原性則與原始采集標(biāo)本大致相同。另外,馬-達(dá)犬腎細(xì)胞對“0”相毒株的敏感性相對于雞胚而言更高。因此,馬-達(dá)犬腎細(xì)胞已成為目前臨床上流感病毒分離中不可或缺的宿主系統(tǒng)之一,在臨床上被廣泛應(yīng)用。馬-達(dá)犬腎細(xì)胞分離的病毒在部分國家尚未批準(zhǔn)應(yīng)用于疫苗的生產(chǎn)中,所以現(xiàn)今病毒分離工作依舊是同時應(yīng)用馬-達(dá)犬腎細(xì)胞及雞胚兩套系統(tǒng)。但是無論是采用哪一種方式,都需要嚴(yán)格要求標(biāo)本中病毒的采集、運(yùn)輸以及保存工作,病毒樣品如若能在48h內(nèi)實(shí)施分離,需在4℃的環(huán)境下保存,如若病毒樣品需要存放時間較長,則需要在低溫環(huán)境下凍存,溫度為-70℃,并且要求標(biāo)本中病毒含量較高,必須達(dá)到馬-達(dá)犬腎細(xì)胞或是雞胚培養(yǎng)法所需病毒含量,病毒分離培養(yǎng)較為復(fù)雜,耗時不太穩(wěn)定,并且在普通實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不能進(jìn)行,加上確診消耗時間長,所以對流感早期診斷意義不大。
血清學(xué)診斷。血清學(xué)診斷其檢測的內(nèi)容主要為血清中的抗體水平。因甲型流感病毒顆粒表面HA蛋白具有一定的識別性,加上其吸附于紅細(xì)胞表面受體結(jié)構(gòu),HA蛋白抗體一旦有效結(jié)合HA蛋白受體,則會對HA蛋白及紅細(xì)胞受體結(jié)合形成干擾?;谶@一實(shí)驗(yàn)原理,臨床上針對甲型流感病毒鑒定主要以血細(xì)胞凝集抑制測定為主,血細(xì)胞凝集抑制法測定主要是應(yīng)用已知流感病毒抗原對血清內(nèi)抗體進(jìn)行檢測。檢查取發(fā)病3d內(nèi)及發(fā)病2-4周后兩份血清進(jìn)行血凝抑制實(shí)驗(yàn),恢復(fù)期血清抗體效價相較于急性期高出4倍以上的為陽性,通常情況下,單份血清不能夠用于有效診斷。血清學(xué)診斷的意義在于利于流行病學(xué)調(diào)查及各個患者的回顧性診斷,對于流感病毒的早期診斷意義不大。
病毒抗原檢測。①酶免疫法:酶免疫法的基本原理主要是應(yīng)用酶和抗體、抗原結(jié)合后,促使酶結(jié)合物形成,該檢測方式既可以不改變抗原免疫學(xué)活性,又能將酶本身所具有的酶學(xué)活性完整保留,而后再將酶相應(yīng)底物加入,在酶的催化之下使原無色底物不斷水解、氧化,從而生成有色產(chǎn)物。②免疫熒光法:將患者鼻腔分泌物脫落細(xì)胞進(jìn)行涂片,采用免疫熒光法監(jiān)測可以對流感病毒抗原直接進(jìn)行檢測。③免疫膠體金:現(xiàn)目前,臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用的免疫膠體金技術(shù)主要分為膠體金快速免疫層析及快速斑點(diǎn)免疫滲濾法,也可以將其稱之為流感快速診斷試劑盒。
病毒核酸檢測。病毒核酸檢測的常用方式核酸雜交、多重逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、定時定量、酶聯(lián)免疫PCR。PCR、熒光PCR、依賴性核酸序列擴(kuò)增。近些年來,應(yīng)用基因芯片對流感病毒實(shí)施檢測、分型是研究的熱點(diǎn)之一,該方式可以對多種病毒同時檢測,特別適用于流感病毒易變性及多亞型特征。但是這種檢測方式對于實(shí)驗(yàn)條件具有較高的要求,核酸檢測的主要優(yōu)點(diǎn)在于具有較高的特異性,并且檢測速度較快,方便操作。
最有效的預(yù)防流感方式為每年接種流感疫苗,不僅可以減少罹患流感的風(fēng)險,還能避免發(fā)生并發(fā)癥。流感病毒基因易變異,針對這種情況應(yīng)每年定期進(jìn)行流感疫苗接種,除此之外,生活中應(yīng)養(yǎng)成良好的呼吸道衛(wèi)生習(xí)慣,日常勤洗手,避免觸摸口、鼻。另外,還需確保飲食均衡,保持充足的休息時間。
以上便是流感病毒的相關(guān)檢測方式及日常預(yù)防方式,另外在春冬高發(fā)季還應(yīng)注意避免到人群聚集場所長時間逗留。