高效液相色譜法在食品檢驗中的應用及技術(shù)探討

尚久舒，馮 悅

（唐山市食品藥品綜合檢驗檢測中心，河北唐山 063000）

1 高效液相色譜法在食品檢驗中的應用

1.1 高效液相色譜法檢測食品中的添加劑

應用高效液相色譜技術(shù)可以定量檢測食品甜味劑中各種物質(zhì)的實際含量，例如糖精鈉、甜蜜素、蔗糖、果糖、葡萄糖、三氯蔗糖和麥芽糖等物質(zhì)。經(jīng)過檢測后，可以根據(jù)其與國家標準樣本原料含量的比值偏差情況進行綜合分析，判斷在同類食品中的樣本原料中的食用甜味劑及其添加物的情況以及是否符合國家標準。其中蔗糖、果糖、葡萄糖、三氯蔗糖和麥芽糖等物質(zhì)的檢測可應用高效液相色譜儀中的示差檢測器，但在實際應用中需要大量前期準備時間，用更換參比池溶液和儀器平衡，待平衡后方可進行待測物實驗[1]。

除了使用甜味劑調(diào)整食品的味道和口感外，防腐劑可保證食品在較長時間內(nèi)具有一定的新鮮度，是食品制作過程中應用范圍比較廣泛的一種添加劑，常用的防腐劑有苯甲酸、丙酸鈣、丙酸鈉以及山梨酸等，都具有較強的防腐能力而且自身毒性也較小。食品中的防腐劑含量高會對環(huán)境或人體造成傷害，例如會破壞環(huán)境或影響人體正常生長的機能，所以食品中防腐劑的檢測對維護人體的健康有非常重要的作用。檢驗人員可以利用高效液相色譜技術(shù)檢驗、分析糕點中的丙酸鈣丙酸鈉添加量，利用適當?shù)娜軇悠愤M行預處理，應用高效液相色譜儀的紫外檢測器進行檢測。由于這種方法的流動相為純無機鹽，在實驗過程中，極易造成對儀器和柱子的傷害，所以實驗結(jié)束后，需用10%的甲醇溶液沖洗1 h，再用100%的甲醇溶液沖洗1 h，減少對儀器和色譜柱的損傷[2]。

1.2 高效液相色譜技術(shù)的主要含義

液體流動相是高效液相色譜技術(shù)中的重要實驗部分，高效液相色譜儀利用高壓輸液系統(tǒng)將混合后的液體溶液、使用比例閥自動混合的溶液以及隔離緩沖液加入色譜柱中，利用這種技術(shù)能快速高效的完成目標樣品的檢驗。

1.3 高效液相色譜技術(shù)的優(yōu)勢及應用特點

高效液相色譜技術(shù)可以讓食品檢驗操作人員自由選擇不同種類的流動相和與待測成分相匹配的色譜柱，保證達到高效的液相分離。此外，高效液相色譜技術(shù)還具有較高的靈敏度，靈敏度一般最高可以達到0.01 ng。高效液相色譜技術(shù)目前可以應用領域、范圍較廣，大多數(shù)的有機化合物均可以通過此種檢測技術(shù)進行高效、快速的檢驗。高效液相色譜技術(shù)分析速度和載液速度較快，大多數(shù)樣品分析時間均可以控制在30 min，部分樣品檢測時間只需5 min，最長的樣品檢驗時間也不會超過60 min。

2 高效液相色譜法在食品檢驗中的技術(shù)分析與探討

在高效液相色譜法的實際應用中，尤其面對復雜的實驗或者待測物時，為了避免實驗中出面各種問題，檢測工作者要更加注重實驗細節(jié)，面對已出現(xiàn)的問題要冷靜分析，采取相應的解決措施[3]。

2.1 色譜峰問題分析

2.1.1 基線噪聲

（1）氘燈問題。通常情況下，氘燈的使用壽命為1 000 h，部分長壽命氘燈可以使用2 000 h，當其達到使用壽命后，氘燈發(fā)射出的光強度下降，達不到檢測標準，造成基線上下波動。判斷氘燈是否需要更換可以根據(jù)使用時間或者測定氘燈能量和參比能量來進行判斷。

（2）檢測池污染。一般來說，檢測器存在于儀器內(nèi)部，環(huán)境較為封閉，不容易被污染，但也存在外部的粉塵污染、有強保留的物質(zhì)吸附在透鏡內(nèi)表面或有填料進入檢測池的情況。遇見這種情況時，可以將檢測池拆下，用洗耳球吹洗，若污染嚴重，可以取出兩邊透鏡，用甲醇、異丙醇等有機溶劑超聲輔助清洗，若污染特別嚴重，可以用10%的硝酸溶液進行清洗。

（3）檢測器中有氣泡。流動相抽空或其他原因可能導致檢測器中有氣泡存在，當流動相經(jīng)過時，會引起氣泡的有規(guī)律抖動，光強隨著震動而不斷變化，從而造成基線波動?？梢詫z測器與色譜柱的連接斷開，采用流動相對檢測器進行高速沖洗期間不停變換流速；或?qū)⒊刈右后w出口處堵住，此時，壓力會增加，氣泡被壓縮至很小，然后將堵住部分突然松開，氣泡會突然膨脹隨液體流出，反復多次即可排除，也可以配備在線脫氣機一起使用[4]。

2.1.2 基線漂移

（1）溫度不穩(wěn)定。溫度會對高效液相色譜儀產(chǎn)生比較大的影響，尤其對于色譜儀中的示差檢測器，該檢測器對溫度非常敏感。需要控制好系統(tǒng)的溫度，保證工作環(huán)境溫度的穩(wěn)定，并且在進入檢測器之前使用熱交換器，采用柱溫箱。

（2）流通池污染或有氣泡。通常配制流動相后要進行一段時間超聲來消除流動相中的氣泡，但由于流動相中溶劑的不同性質(zhì)，有時超聲并不能完全消除液體中的氣泡，這時氣體會以小氣泡的形式進入檢測器中，壓力減小，氣泡逐漸增大，逐漸使吸光度改變，引起基線漂移。

（3）檢測器未設定在最大吸收波長處。重新檢測波長，調(diào)整至最大吸收波長處。

2.2 檢測器問題分析

2.2.1 檢測器不能正常調(diào)零

（1）檢測器本身電路故障。檢測器出現(xiàn)電路故障時，如儀器指示燈不亮、調(diào)零鍵開關接觸不當均可出現(xiàn)調(diào)零故障（外接調(diào)零試一下是否可以正常調(diào)零）。需要進行電路排查，排除電路故障。

（2）池體污染嚴重。如石英片內(nèi)外污物遮擋，使透過率大大降低，S值較小，調(diào)零電路無法進行工作。需要拆下檢測池，用有機溶劑超聲清洗，有必要時可以用10%的硝酸溶液清洗。

（3）流動相質(zhì)量問題。要求流動相在低波長處無吸收，若流動相效果不佳，可以更換流動相類型。

2.2.2 靈敏度下降

（1）檢測波長改變。檢查波長調(diào)節(jié)按鈕，檢查是否由于操作失誤改變了檢測波長。

（2）樣品與檢測器不匹配。可能是該檢測器檢測限太高，需要調(diào)高樣品濃度或者更換檢測限更低的檢測器，另外也可以根據(jù)樣品的化學性質(zhì)選擇合適的檢測器或者檢測波長[5]。

（3）檢測器量程不對。調(diào)整檢測器量程，縮小衰減。

（4）檢測器污染或者有氣泡。檢測池受到污染和殘留氣泡是引起檢測器故障的最大原因，出現(xiàn)上述問題時可以著重考慮；對于紫外檢測器來說，氘燈能量衰減也是最值得關注的問題之一。

3 結(jié)語

高效液相色譜技術(shù)具有較高的靈敏性和專屬性，因此其可以有效進行食品成分的定性以及定量分析。隨著我國社會不斷進步，高效液相色譜技術(shù)也在不斷發(fā)展，檢測人員的技術(shù)水平與分析問題能力也在不斷提升，此種分析技術(shù)未來一定會更加完善。