基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查食品中10 種非法壯陽抗疲勞類藥物

摘要 建立了基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）分析食品中西地那非、紅地那非、那紅地那非、豪莫西地那非、羅地那非碳酸酯、西地那非二聚體雜質(zhì)、伐地那非二聚、羥基紅地那非、N-去甲基西地那非和烏地那非10 種非法添加壯陽抗疲勞藥物的方法?？疾炝嘶|(zhì)種類、基質(zhì)溶劑和用量、激光強(qiáng)度和點(diǎn)樣方式對(duì)各目標(biāo)物的質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度和信噪比（S/N）的影響，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)際樣品檢測(cè)。結(jié)果表明，選擇以介子酸（SA）為基質(zhì)，將其均勻分散在甲醇-水（50∶50， V/V）中，采用先點(diǎn)基質(zhì)再點(diǎn)樣品的點(diǎn)樣方式，在反射線性正離子模式下選擇激光強(qiáng)度為60%進(jìn)行MALDI-TOF MS 篩查時(shí)，質(zhì)譜信號(hào)穩(wěn)定、強(qiáng)度高、響應(yīng)重復(fù)性好。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明， 10 種非法壯陽抗疲勞藥物濃度在10～100 ng/mL 范圍內(nèi)與質(zhì)譜疊加峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r）gt;0.985，檢出限（LOD）為0.1～1.0 ng/mL。保健酒、軟膠囊和速溶咖啡3 種食品基質(zhì)中的加標(biāo)回收率為72.9%～109.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為0.7%～11.3%（n=3）。本方法分析速度快、準(zhǔn)確性高、靈敏度好、抗干擾能力強(qiáng)、無樣品基質(zhì)效應(yīng)，基于已有質(zhì)譜信息可無需使用標(biāo)準(zhǔn)品，僅通過點(diǎn)靶上機(jī)測(cè)定即可實(shí)現(xiàn)對(duì)食品基質(zhì)中10 種非法壯陽抗疲勞藥物的非靶向篩查。

關(guān)鍵詞 基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜；壯陽抗疲勞類藥物；非法添加；α-氰基-4-羥基肉桂酸；介子酸

抗疲勞是指能夠緩解和（或）抵抗機(jī)體腦力和（或）體力消耗至一定程度的過程[1-3]。近年來，天然產(chǎn)物的活性成分在抗疲勞[4-5]保健方面的應(yīng)用研究很多，這些研究成果常轉(zhuǎn)化于壯陽抗疲勞類保健食品的應(yīng)用與推廣，深受男性消費(fèi)者青睞。但是，隨著市場(chǎng)擴(kuò)大，利益驅(qū)使導(dǎo)致誠信缺失，不法商家常在保健食品中添加非法壯陽抗疲勞類藥物[6]，以達(dá)到用量少、見效快的目的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，市場(chǎng)上保健食品中常檢出非法添加的抗疲勞類藥物包括磷酸二酯酶5（Phosphodiesterase-5， PDE5）抑制劑、α-腎上腺素受體阻滯劑、蛋白同化制劑、天然前列腺素類和多巴胺受體[7-8]。其中，非法添加的PDE5 抑制劑包括西地那非、紅地那非、那紅地那非、豪莫西地那非、羅地那非碳酸酯、西地那非二聚體雜質(zhì)、伐地那非二聚體、羥基紅地那非、N-去甲基西地那非和烏地那非等，并且較為常見[9]。但是，長(zhǎng)期和（或）超劑量攝入PDE5抑制劑抗疲勞類藥物會(huì)對(duì)神經(jīng)、心腦血管和消化系統(tǒng)有一定程度的副作用，與硝酸酯類藥物同服還可能使血壓突然下降，甚至危及生命[10]。近年來，國家市場(chǎng)監(jiān)管總局將保健食品和特殊膳食食品中非法添加非食用藥物列為重點(diǎn)專項(xiàng)治理目標(biāo)[11]，并針對(duì)固體飲料、壓片糖果和代用茶等食品中非法添加藥物開展專項(xiàng)整治[12]。因此，建立一種快速定性篩查和定量檢測(cè)食品中非法添加壯陽抗疲勞類藥物的分析方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前，非法添加壯陽抗疲勞類藥物的檢測(cè)方法有色譜法、光譜法和免疫法等。色譜法包括薄層色譜法[13]、液相色譜法[14]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[15-17]、液相色譜-核磁共振法[18]和離子遷移淌度法[19]，這些方法準(zhǔn)確度高，但前處理和檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，適用于實(shí)驗(yàn)室小批量樣品的檢測(cè)。光譜法包括拉曼光譜法[20]和熒光光譜法[21]，此類方法靈敏度高、熒光背景低，但僅適用于定性檢測(cè)。免疫法具有靈敏度高、費(fèi)時(shí)少和操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)[22-23]，但每次僅能測(cè)定一種或一類結(jié)構(gòu)相似的藥物。因此，開發(fā)一種兼有儀器分析法的高準(zhǔn)確度和免疫分析法的快速高效篩查性能的方法可以彌補(bǔ)現(xiàn)有方法的不足?；|(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）是一種軟電離質(zhì)譜技術(shù)，具有靈敏度高、對(duì)分子量判斷精確、制樣簡(jiǎn)單、樣品和溶劑量消耗少、測(cè)定時(shí)間短和可大批量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)[24-25]，已廣泛應(yīng)用于小分子藥物[26]、寡糖[27]、脂質(zhì)[28]、多肽和蛋白質(zhì)[29-30]以及聚合物[31]等物質(zhì)的分析測(cè)定。雖然MALDI-TOF MS 的傳統(tǒng)基質(zhì)在低分子量區(qū)（lt;500 Da）會(huì)產(chǎn)生大量基質(zhì)碎片，但部分無干擾的低分子量區(qū)域仍可實(shí)現(xiàn)對(duì)部分小分子化合物的定量檢測(cè)。張培等[32]利用傳統(tǒng)基質(zhì)實(shí)現(xiàn)了對(duì)孔雀石綠的快速定量檢測(cè)，僅需5 s 即可獲得定量分析結(jié)果，表明MALDI-TOF MS 在小分子化合物的分析檢測(cè)領(lǐng)域還有很大的開發(fā)利用空間。目前，利用MALDI-TOF MS 進(jìn)行食品中非法添加壯陽抗疲勞類藥物快速定量篩查的研究尚未見報(bào)道。

本研究通過對(duì)基質(zhì)和壯陽抗疲勞類藥物分子量進(jìn)行篩選，排除了特定低分子量區(qū)域基質(zhì)碎片的干擾，并通過優(yōu)化方法條件，實(shí)現(xiàn)了食品中10 種非法添加壯陽抗疲勞類藥物的快速篩查，為加強(qiáng)市場(chǎng)監(jiān)管和保護(hù)消費(fèi)者健康提供了技術(shù)保障。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Ultraflextreme MALDI-TOF MS 儀（德國Bruker 公司），配有flexAnalysis 3.4 數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)；LC-30 超高效液相色譜儀（日本島津公司）；Q-TRAP 4000 質(zhì)譜儀（美國SCIEX 公司），配有電噴霧離子源；2600TH超聲清洗儀（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；384孔Ground steel靶板（德國Bruker公司）；M3 7610-33CN 渦旋混合儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；Allegra X-30R 高速冷凍離心機(jī)（美國Beckman 公司）；MS205DU 電子天平（上海梅特勒-托利多國際貿(mào)易有限公司）。

甲醇（HPLC 級(jí)，美國Thermo Fisher Scientific 公司）；α-氰基-4-羥基肉桂酸（α-Cyano-4-hydroxycinnamicacid， HCCA）、介子酸（Sinapic acid， SA）（HPLC 級(jí)，德國Bruker 公司）；西地那非（Sildenafil）、紅地那非（Acetildenafil）、那紅地那非（Nor-acetildenafil）和豪莫西地那非（Homosildenafil）標(biāo)準(zhǔn)品（純度gt;99.9%，中國食品藥品檢定研究院）；羅地那非碳酸酯（Lodenafil carbonate）、西地那非二聚體雜質(zhì)（Sildlenafil dimer impurity）和伐地那非二聚體（Vardenafil dimer）標(biāo)準(zhǔn)品（純度gt;99.9%，北京振翔科技有限公司）；羥基紅地那非（Hydroxyacetildenafil）、N-去甲基西地那非（N-Desmethylsildenafil）和烏地那非（Udenafil）（純度gt;99.9%，上海阿拉丁試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水（18.2 MΩ·cm）由Milli-Q 超純水制備系統(tǒng)（美國Millipore 公司）制得。27 批不同品牌食品樣品均購自廣州市某商場(chǎng)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及基質(zhì)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，以甲醇溶解并定容至10 mL，得到1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于–18 ℃避光貯存。分別精密量取上述儲(chǔ)備液0.1 mL，以甲醇定容至10 mL，得到10 μg/mL 的單標(biāo)中間液。使用時(shí)，將上述標(biāo)準(zhǔn)中間液用甲醇-水（50∶50， V/V）稀釋至100 ng/mL，或分別移取所需單標(biāo)中間液配制成10、20、40、60、80 和100 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

基質(zhì)溶液的配制稱 取4.0 mg 傳統(tǒng)基質(zhì)HCCA（或SA）至離心管中，加入甲醇-水（50∶50， V/V），超聲溶解10 min，得到4.0 mg/mL 的HCCA（或SA）基質(zhì)溶液。

1.3 樣品前處理

在前期研究方法[15]的基礎(chǔ)上稍做修改進(jìn)行樣品前處理。取適量樣品，固體或半固體樣品研細(xì)混均、液體樣品混合均勻后，準(zhǔn)確稱取0.2000 g 樣品于10 mL 比色管中，加入甲醇-水（50∶50， V/V）定容，超聲提取10 min，固體和半固體樣品經(jīng)8000 r/min 離心3 min 后，取上清液，備用。液體樣品可直接上機(jī)測(cè)定。

1.4 點(diǎn)樣方法與MALDI-TOF MS 分析條件

1.4.1 點(diǎn)樣方式

采用文獻(xiàn)[33]的點(diǎn)樣方式，具體為雙鋪法a：先移取1 μL 樣品于384 孔Ground 靶板上，自然揮干后，再移取1 μL 基質(zhì)覆蓋，自然揮干，待測(cè)；雙鋪法b：先移取1 μL 基質(zhì)于384 孔Ground 靶板上，自然揮干后，再移取1 μL 樣品覆蓋，自然揮干，待測(cè)；混合法：取2 μL 樣品和2 μL 基質(zhì)混合均勻后，取2 μL混合物直接于384 孔Ground 靶板上點(diǎn)樣，自然揮干，待測(cè)；三明治法：取0.5 μL 基質(zhì)溶液于384 孔Ground 靶板上，自然揮干后，取1 μL 樣品覆蓋基質(zhì)，自然揮干后，再取0.5 μL 基質(zhì)溶液揮干，待測(cè)。

1.4.2 MALDI-TOF MS 條件

光源：氮?dú)饧す猓浑x子源：電噴霧電離（ESI）源；波長(zhǎng)：337 nm；檢測(cè)模式：反射線性正離子模式；采集范圍：160～3580 Da；激光強(qiáng)度：60%；光譜響應(yīng)強(qiáng)度疊加次數(shù)均為20 次。利用儀器配置的flex Control 軟件對(duì)質(zhì)譜圖中質(zhì)量軸的質(zhì)荷比（m/z）進(jìn)行標(biāo)記和默認(rèn)平滑處理，并用FlexAnalysis 3.4 軟件分析原始數(shù)據(jù)，將疊加所得目標(biāo)物對(duì)應(yīng)離子的峰面積換算成對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線中各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 基質(zhì)的比較和選擇

按1.2 節(jié)方法配制100 ng/mL 的單標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)溶液，分別用于分析10 種壯陽抗疲勞藥物?；贖CCA 和SA 基質(zhì)的MALDI-TOF MS 分析結(jié)果見圖1A。以HCCA 為基質(zhì)時(shí)，未檢出紅地那非和羅地那非碳酸酯的質(zhì)譜峰；以SA 為基質(zhì)時(shí)， 10 種壯陽抗疲勞藥物的質(zhì)譜峰均可檢出，并且目標(biāo)峰響應(yīng)強(qiáng)度高于HCCA 基質(zhì)的峰強(qiáng)度。同時(shí)，比較了SA 和HCCA 溶劑空白基質(zhì)背景噪聲（圖1B 和圖1C）。結(jié)果表明，以SA 為基質(zhì)的背景峰強(qiáng)度較低，并且400 Da 以上的背景干擾少。因此，選用SA 作為基質(zhì)用于10 種壯陽抗疲勞藥物的質(zhì)譜檢測(cè)。

2.2 質(zhì)譜裂解規(guī)律的探究

以SA 為基質(zhì)，采用100 ng/mL 的各單標(biāo)溶液，研究10 種壯陽抗疲勞藥物的MALDI-TOF MS裂解規(guī)律（電子版文后支持信息圖S1）。10 種壯陽抗疲勞藥物質(zhì)譜峰的離子化形式均為[M+H]+，西地那非、紅地那非、那紅地那非、豪莫西地那非、羅地那非碳酸酯、西地那非二聚體雜質(zhì)、伐地那非二聚體、羥基紅地那非、N-去甲基西地那非和烏地那非分別在m/z 475.217、467.270、453.257、489.255、1035.418、835.303、835.303、483.294、461.202 和517.301 處檢測(cè)到質(zhì)譜信號(hào)，對(duì)疊加的各目標(biāo)物的質(zhì)譜峰信號(hào)（m/z）進(jìn)行相對(duì)誤差（RE）的統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算得RElt;3.7×10–5，說明MALDI-TOF MS 對(duì)以上10 種壯陽抗疲勞藥物的質(zhì)譜離子峰分析精準(zhǔn)。質(zhì)譜離子峰分析結(jié)果同時(shí)表明，西地那非二聚體雜質(zhì)和伐地那非二聚體是一對(duì)同分異構(gòu)體，在混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中無法通過MALDI-TOF MS 區(qū)分二者，后續(xù)研究需將西地那非二聚體雜質(zhì)單標(biāo)溶液和其余9 種標(biāo)準(zhǔn)品混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分開，單獨(dú)進(jìn)行分析。

2.3 基質(zhì)溶解條件和用量的優(yōu)化

將SA 分別分散在水、乙腈、甲醇和甲醇-水（50∶50， V/V）溶劑中，觀察其與100 ng/mL 各標(biāo)準(zhǔn)溶液點(diǎn)樣成膜過程，并分析其響應(yīng)強(qiáng)度，結(jié)果見圖2A。4 種溶劑均可用于SA 的溶解和MALDI-TOF MS 分析，并且紅地那非的質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)最強(qiáng)，羅地那非碳酸酯的響應(yīng)信號(hào)最弱。具體而言，甲醇-水作為溶劑時(shí)， SA在Ground 靶板上可均勻鋪展，分散性好，成膜性佳，各目標(biāo)物的質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度高、重復(fù)性好；乙腈和甲醇作為溶劑時(shí)，雖然各目標(biāo)物信號(hào)強(qiáng)度較高，但因有機(jī)溶劑的表面張力大， SA 在Ground 靶板上鋪展較分散，甚至擴(kuò)散污染相鄰樣品點(diǎn)；水作為溶劑時(shí)， SA 在Ground 靶板上可均勻鋪展，分散性好，成膜性佳，但干燥時(shí)間過長(zhǎng)，各目標(biāo)物質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度較高、重復(fù)性差。故選用甲醇-水（50∶50， V/V）為SA溶劑。

在1 mL 甲醇-水（50∶50， V/V）中加入不同質(zhì)量（1.0、2.0、4.0、6.0 和8.0 mg）的SA，考察100 ng/mL各標(biāo)準(zhǔn)溶液的MALDI-TOF MS 分析效果（表1 和圖2B）。結(jié)果表明，隨著SA 濃度增大，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度（圖2B）均呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在4.0 mg/mL 時(shí)質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度最大；隨著SA 濃度增加，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)譜信號(hào)信噪比（表1）也呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在4.0 mg/mL 時(shí)質(zhì)譜信號(hào)的信噪比最大。因此，后續(xù)研究均采用含4.0 mg/mL SA 的甲醇-水（50∶50， V/V）基質(zhì)溶液。

2.4 點(diǎn)樣方式的考察

基質(zhì)結(jié)晶質(zhì)譜信號(hào)不穩(wěn)定、響應(yīng)重復(fù)性差和“甜點(diǎn)”效應(yīng)是影響MALDI-TOF MS 定量分析測(cè)定的關(guān)鍵問題。以SA 作為基質(zhì)，考察不同點(diǎn)樣方式對(duì)質(zhì)譜信號(hào)的影響，即分別采用雙鋪法a、雙鋪法b、混合法和三明治法這4 種點(diǎn)樣方式，將100 ng/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣品在384 孔Ground 靶板上點(diǎn)樣，上機(jī)測(cè)定。結(jié)果表明，質(zhì)譜峰信號(hào)的信噪比由大到小依次為雙鋪法b、混合法、三明治法和雙鋪法a；采用雙鋪法a、雙鋪法b、混合法和三明治法的質(zhì)譜峰信號(hào)強(qiáng)度重復(fù)性相對(duì)偏差（RSD）依次為3.5%～30.8%、0.7%～6.4%、0.5%～7.5%和4.7%～51.8%。因此，選擇雙鋪法b 作為點(diǎn)樣方式。

2.5 激光強(qiáng)度的優(yōu)化

以SA 為基質(zhì)、100 ng/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣品，將MALDI-TOF MS 激光能量強(qiáng)度從10% 增至80%，以10% 的能量間隔依次考察激光強(qiáng)度對(duì)10 種壯陽抗疲勞藥物質(zhì)譜峰響應(yīng)強(qiáng)度的影響，結(jié)果（電子版文后支持信息圖S2）表明，隨著激光能量增加，各目標(biāo)物的響應(yīng)強(qiáng)度增大，其中，羅地那非碳酸酯、西地那非二聚體雜質(zhì)和伐地那非二聚在激光能量達(dá)20%以上時(shí)才有信號(hào)，當(dāng)激光能量增加到60%時(shí)，各目標(biāo)物響應(yīng)強(qiáng)度達(dá)到最大；當(dāng)激光能量超過60%時(shí)，西地那非、紅地那非、那紅地那非、N-去甲基西地那非和烏地那非的響應(yīng)強(qiáng)度增加不明顯，其它目標(biāo)物的響應(yīng)強(qiáng)度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。故選擇60% 的激光能量作為MALDI-TOF MS 分析10 種壯陽抗疲勞藥物的激光能量條件。

2.6 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.6.1 線性范圍和檢出限

在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)不同濃度的10 種壯陽抗疲勞藥物標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行MALDI-TOF MS 測(cè)定，繪制各目標(biāo)物[M+H]+疊加峰面積（y）與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度（x， ng/mL）的線性曲線。各物質(zhì)的線性范圍、線性方程和相關(guān)系數(shù)見表2。在10～100 ng/mL 的濃度范圍內(nèi)， 10 種壯陽抗疲勞藥物的質(zhì)譜疊加峰面積與濃度的線性相關(guān)系數(shù)（r）gt;0.985，說明線性關(guān)系良好。以3 倍信噪比（S/N）對(duì)應(yīng)濃度作為檢出限（LOD），結(jié)果表明，以SA 為MALDI-TOF MS 基質(zhì)對(duì)10 種壯陽抗疲勞藥物的LOD 介于0.1～1.0 ng/mL之間，其中，羅地那非碳酸酯的LOD 為1.0 ng/mL，豪莫西地那非、西地那非二聚體雜質(zhì)、伐地那非二聚體和羥基紅地那非的LOD 為0.1 ng/mL，遠(yuǎn)低于國家補(bǔ)充檢測(cè)方法BJS201805 的LOD[34]，說明本研究建立的MALDI-TOF MS測(cè)定10 種壯陽抗疲勞藥物具有靈敏度高和準(zhǔn)確度好的特點(diǎn)。基于已經(jīng)確定的10 種壯陽抗疲勞類藥物的MALDI-TOF 質(zhì)譜信息，在日常檢測(cè)過程中，可以不需要使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，僅通過點(diǎn)靶上機(jī)測(cè)定，再匹配已有的質(zhì)譜信息即可快速篩查判斷是否含有以上壯陽抗疲勞類藥物，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)非靶向篩查。

2.6.2 加標(biāo)回收率及精密度

在經(jīng)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[34]驗(yàn)證為陰性的實(shí)際樣品中，選擇3 種經(jīng)常檢出的非法添加壯陽類藥物的液態(tài)、半固態(tài)和固態(tài)樣品（即保健酒、軟膠囊和速溶咖啡）進(jìn)行低、中、高3 個(gè)濃度水平（即0.75、2.0 和4.0 μg/g）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次，同時(shí)用外標(biāo)法定量并計(jì)算回收率。3 種樣品的檢測(cè)結(jié)果見表3， 60 ng/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及加標(biāo)樣品質(zhì)譜圖見圖3。

如表3 結(jié)果所示， 10 種壯陽抗疲勞藥物的加標(biāo)回收率介于72.9%～109.9%之間， RSD 為0.7%～11.3%，說明本研究建立的MALDI-TOF MS 方法對(duì)10 種壯陽抗疲勞藥物的定量分析準(zhǔn)確可靠。

2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)

將本方法用于廣州市售的27 批食品（包括保健酒、咖啡、功能飲料、蛋白粉、茶包和軟膠囊等）中非法添加壯陽抗疲勞藥物篩查。通過比較實(shí)際樣品的MALDI-TOF MS離子峰和信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行篩查，結(jié)果表明， 1 批咖啡樣品為西地那非陽性， MALDI-TOF MS 定量分析結(jié)果為（11.6±0.8） mg/kg。將27 批樣品按國家補(bǔ)充檢驗(yàn)方法[34]進(jìn)行檢測(cè)，陽性樣品中西地那非的測(cè)定結(jié)果為（12.1±0.5） mg/kg，與MALDI-TOF MS法測(cè)定結(jié)果基本一致。與HPLC-MS 法相比，本方法抗干擾能力強(qiáng)、無需流動(dòng)相和色譜柱、篩查速度快、篩查結(jié)果精準(zhǔn)，在日常檢測(cè)中可不依賴于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)即可實(shí)現(xiàn)10 種壯陽抗疲勞藥物的非靶向分析篩查，非常適用于大批量樣品的監(jiān)督抽查。

3 結(jié)論

本研究建立了一種以SA 為基質(zhì)的MALDI-TOF MS 方法，在反向線性正離子模式下，可用于食品中10 種非法添加壯陽抗疲勞藥物的快速定量篩查。本方法不僅靈敏度高、篩查結(jié)果準(zhǔn)確、精密度好，并且具有抗干擾能力強(qiáng)、節(jié)能環(huán)保、高效等特點(diǎn)。每個(gè)樣品經(jīng)儀器分析僅需0.3 s 即可獲得篩查結(jié)果，特別是在確定了10 種壯陽抗疲勞類藥物的MALDI-TOF 質(zhì)譜信息的前提下，本方法可以不需要使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，通過匹配已有的質(zhì)譜信息即可快速篩查判斷是否含有以上壯陽抗疲勞類藥物，從而實(shí)現(xiàn)非靶向篩查。MALDI-TOF MS在小分子分析測(cè)定方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，可為食品中非法添加物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供保障。但目前的基質(zhì)難以實(shí)現(xiàn)對(duì)所有非法添加物的分析篩查，也無法實(shí)現(xiàn)同分異構(gòu)體的非靶向分析篩查。因此，開發(fā)適用于更多小分子分析篩查的廣譜性基質(zhì)，同時(shí)研究適用于同分異構(gòu)體的非靶向篩查是未來研究的重點(diǎn)。

References

[1] WANG Xue， ZHANG Xin-Rui， AN Sheng-Shu， WU Hong-Hong， JIANG Xue， KANG Jie， HUA Zheng-Jie， ZHANG Xin-Yuan， ZHOU Yu-Lin. Food Res. Dev. ， 2017， 38（18）： 190-197.

王雪， 張欣蕊， 安升淑， 吳紅紅， 姜雪， 康杰， 華正杰， 張馨元， 周毓麟. 食品研究與開發(fā)， 2017， 38（18）： 190-197.

[2] LI D， REN J， ZHANG T， LIU R， WU L， DU Q， LI Y. Food Funct. ， 2018， 9（8）： 4266-4273.

[3] YU Jing-Hua， YUE Xi-Dian. Food Res. Dev. ， 2021， 42（21）： 218-224.

于京華， 岳喜典. 食品研究與開發(fā)， 2021， 42（21）： 218-224.

[4] LIU Xue-Feng， LIU Xue-Mei， YANG Ming， HE Hui， YU De-Wei， YANG Ming. Food Sci. Technol. ， 2018， 43（4）： 92-96.

劉雪峰， 劉雪梅， 楊銘， 赫慧， 于德偉， 楊明. 食品科技， 2018， 43（4）： 92-96.

[5] CHENG Mei-Ling， HUANG Xin， AN Tong-Xin， FAN Jiang-Ping， LI Jian-Bin， XI Cong-Fang. J. Yunnan Agric. Univ. （Nat.Sci.）， 2021， 36（6）： 956-961.

程美玲， 黃鑫， 安曈昕， 范江平， 李建賓， 希從芳. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)）， 2021， 36（6）： 956-961.

[6] MUSCHIETTI L， REDKO F， ULLOA J. Drug Test. Anal.， 2020， 12（7）： 861-886.

[7] XU Shuo， JIN Peng-Fei， XU Wen-Feng， KUANG Yong-Mei， WU Xue-Jun， JIANG Wen-Qing. Northwest Pharm. J. ， 2017，32（5）： 677-680.

徐碩， 金鵬飛， 徐文峰， 鄺詠梅， 吳學(xué)軍， 姜文清. 西北藥學(xué)雜志， 2017， 32（5）： 677-680.

[8] KEE C， GE X， GILARD V， MALET-MARTINO M， LOW M. J. Pharm. Biomed. Anal. ， 2018， 147： 250-277.

[9] BAO Bing-Hao， WANG Ji-Sheng， WANG Bin， DAI Heng-Heng， DENG Sheng， FENG Juan-Long， LI Hai-Song. ShandongMed. J. ， 2020， 60（17）： 112-114.

鮑丙豪， 王繼升， 王彬， 代恒恒， 鄧省， 馮雋龍， 李海松. 山東醫(yī)藥， 2020， 60（17）： 112-114.

[10] CHEN Tian-Jing， LUO Bo-Hao， XIE Yun-Hui， ZHANG Heng. J. Forensic Med. ， 2017， 33（2）： 200-201.

陳天敬， 羅博浩， 謝云輝， 張桓. 法醫(yī)學(xué)雜志， 2017， 33（2）： 200-201.

[11] State Administration for Market Regulation. Notice of Important Regulation Area Work Program on Fake Products. （2019-02-17） [2021-12-24]. https：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/bgt/201902/t20190217_289795.html#.

市場(chǎng)監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)《假冒偽劣重點(diǎn)領(lǐng)域治理工作方案（2019-2021）》的通知. 國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局. （2019-02-17） [2021-12-24]. https：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/bgt/201902/t20190217_289795.html#.

[12] State Administration for Market Regulation. Notice of Special Regulation of Foods on Solid Drink， Candy and Tea. （2020-05-15） [2021-12-24]. https：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/spscs/202005/t20200515_315254.html#.

市場(chǎng)監(jiān)管總局辦公廳關(guān)于開展固體飲料、壓片糖果、代用茶等食品專項(xiàng)整治的通知. 國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.（2020-05-15） [2021-12-24]. https：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/spscs/202005/t20200515_315254.html#.

[13] SHI Yan， WEI Feng， ZHU Xiao-Peng， XIONG Jing， MA Shuang-Cheng， LIN Rui-Chao. Chin. J. Pharm. Anal. ， 2014，34（1）： 121-125.

石巖， 魏鋒， 朱曉鵬， 熊婧， 馬雙成， 林瑞超. 藥物分析雜志， 2014， 34（1）： 121-125.

[14] GOFFREDO B M， CAIROLI S， VITALE A， CORSETTI T， PASTORE A. Biomed. Chromatogr. ， 2016， 30（12）： 2070-2073.

[15] ZENG Xi， QI Ping， WANG Ning， LIN Zi-Hao， QIAN Zhen-Jie， ZHOU Qing-Qiong， CAI Wei-Yi， PENG Ming-Jun. Farm Prod. Process. ， 2020， （18）： 55-58.

曾羲， 戚平， 汪寧， 林子豪， 錢振杰， 周慶瓊， 蔡偉誼， 彭名軍. 農(nóng)產(chǎn)品加工， 2020， （18）： 55-58.

[16] NI Zan， ZHANG Chong-Sheng. Cent. South Pharm. ， 2018， 16（9）： 1295-1299.

倪贊， 張崇生. 中南藥學(xué)， 2018， 16（9）： 1295-1299.

[17] LI Zhuo， ZHANG Ya-Feng， SUN Xiao， LI Er-Chun， WANG Yong-Jiao， ZENG Qiao. Chin. J. Pharm. Anal. ， 2019， 39（6）：1127-1133.

李卓， 張亞鋒， 孫曉， 李爾春， 王永姣， 曾橋. 藥物分析雜志， 2019， 39（6）： 1127-1133.

[18] WANG Jin， CHEN Zhong-Lan， ZHU Xue-Kun， WU Xian-Fu， XIAO Xin-Yue. Chin. J. Pharm. Anal. ， 2021， 41（7）： 1272-1276.

王瑾， 陳忠蘭， 朱雪坤， 吳先富， 肖新月. 藥物分析雜志， 2021， 41（7）： 1272-1276.

[19] MANS D J， CALLAHAN R J， DUNN J D， GRYNIEWICZ-RUZICKA C M. J. Pharm. Biomed. Anal. ， 2013， 75： 153-157.

[20] HU Jia-Yong， ZHANG Man， PI Jiang-Yi， PENG Qing-Zhi， FENG Hao， ZHOU Tao-Hong. Food Sci. ， 2020， 41（8）： 297-302.

胡家勇， 張嫚， 皮江一， 彭青枝， 馮灝， 周陶鴻. 食品科學(xué)， 2020， 41（8）： 297-302.

[21] ABDEL-RAOOF A M， SAID R A M， EMARA M S， EL-DESOUKY E A， ABDELZAHER A M， HASAN M A， OSMAN A E.Spectrochim. Acta， Part A， 2020， 235： 118313.

[22] OU Ai-Fen， LUO Yi-Ming， ZHAO Su-Qing. Food Ferment. Ind. ， 2021， 47（23）： 258-264.

歐愛芬， 羅奕銘， 趙肅清. 食品與發(fā)酵工業(yè)， 2021， 47（23）： 258-264.

[23] JORNET-MARTINEZ N， HERRAEZ-HERNANDEZ R， CAMPINS-FALCO P. Anal. Bioanal. Chem. ， 2019， 411（10）：2141-2148.

[24] CHOU C H， CHEN H P， HSIAO H H. Talanta， 2021， 226： 122115.

[25] ASHFAQ M Y， DANA D A， AL-GHOUTI M A. J. Environ. Manage. ， 2022， 305： 114359.

[26] BLINCOE W D， LIN S， DREHER S D， SHENG H M. Tetrahedron， 2020， 76（36）： 131434.

[27] HUANG C C， YAN J Y， ZHAN L P， ZHAO M， ZHOU J Y， GAO H Y， XIE Y C， LI Y， CHAI W G. Anal. Chim. Acta， 2019，1077： 67-86.

[28] MIAO Nan， ZHANG Yu， ZHANG Jian-Ye， ZOU Han-Fa. Chin. J. Anal. Chem. ， 2011， 39（5）： 605-610.

苗楠， 張宇， 張建業(yè)， 鄒漢法. 分析化學(xué)， 2011， 39（5）： 605-610.

[29] LI Da-Peng， XIE Guang-Shan， XIE Pei-Si， ZHU Lin， CAI Zong-Wei. Chin. J. Chromatagr. ， 2021， 39（3）： 205-210.

李大鵬， 謝光珊， 謝佩斯， 朱林， 蔡宗葦. 色譜， 2021， 39（3）： 205-210.

[30] WANG W， KA?U?A A， NOUTA J， NICOLARDI S， FERENS-SIECZKOWSKA M， WUHRER M， LAGEVEENKAMMEIJER G S M， HAAN N D. Talanta， 2021， 222： 121495.

[31] LIANG Q L， SHERWOOD J， MACHER T， WILSON J M， BAO Y P， CASSADY C J. J. Am. Soc. Mass Spectrom. ， 2017，28（3）： 409-418.

[32] ZHANG Pei， CHEN Dan. China Pharm. ， 2020， 29（17）： 80-82.

張培， 陳丹. 中國藥業(yè)， 2020， 29（17）： 80-82.

[33] ZHAO Yue-Zhen， XU Yang， GONG Can， JU Yu-Rui， LIU Zhao-Xin， XU Xu. Chin. J. Anal. Chem. ， 2021， 49（1）： 103-112.

趙玥禎， 徐楊， 龔燦， 鞠鈺蕊， 劉兆鑫， 許旭. 分析化學(xué)， 2021， 49（1）： 103-112.

[34] BJS 201805. Determination of Sildenafils in Food. State Administration for Market Regulation of the People′s Republic of China.

食品中那非類物質(zhì)的測(cè)定. 中華人民共和國國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局. BJS 201805.

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No. 32061160473）、廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No. 2023A1515012605）、廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目（No. 2024KF01）、廣東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局科技項(xiàng)目（No. 2023CS01）和貴州省科學(xué)院項(xiàng)目（No. 黔科院J字（2023）23號(hào)）資助。

支持信息

基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查食品中10 種非法壯陽抗疲勞類藥物

曾羲 王宇 陳迎麗 趙甜甜 徐振林 周恒鑫