牦牛常見細(xì)菌病的診斷及其防控

彭中美，尹 苗，吳 倩，向乾春，陳希文

（綿陽師范學(xué)院動(dòng)物疫病防控與健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，四川綿陽 621000）

1 巴氏桿菌病

巴氏桿菌病又稱牛出血性敗血?。ㄅ３鰯。?，主要由多殺性巴氏桿菌引起的一類細(xì)菌性傳染病的總稱。常見的家畜、家禽、野生動(dòng)物和人類是巴氏桿菌感染的主要宿主[1]。人的病例罕見，且多呈傷口感染。動(dòng)物急性病例以敗血癥和炎性出血為主要患病特征；慢性病例表現(xiàn)為結(jié)締組織、關(guān)節(jié)及各臟器的炎癥等化膿性病灶[2]。牦牛的巴氏桿菌病是一種較為常見的牦牛細(xì)菌病。秋末、春初是患病的高峰期。該病的潛伏期極其短、傳播迅速、死亡率高[3]。

1.1 臨床癥狀

牦牛感染后潛伏期一般為2～5 d。巴氏桿菌病根據(jù)具體臨床癥狀表現(xiàn)可分為急性敗血型、水腫型、肺炎型。其中，后兩者是在前者的基礎(chǔ)之上發(fā)展而來[4]。

急性敗血型巴氏桿菌?。杭毙詳⊙桶褪蠗U菌病較為常見。病牛初期體溫升高至41～42 ℃、精神狀態(tài)不佳、食欲減退、動(dòng)作遲緩、臥地不動(dòng)、肌肉抽搐、眼結(jié)膜大片充血變紅、鼻內(nèi)流出淡黃色含有血絲的膿性分泌物[5]。病程一般為1～2 d。一般情況下，牦牛來不及查清致病原因且未進(jìn)行后續(xù)治療就迅速死亡[6]。

水腫型巴氏桿菌病：病牛在咽喉以及頸部發(fā)生炎性水腫是最明顯的癥狀，舌頭及周圍組織高度腫脹、呼吸異常困難、伴隨著流口水，一般會(huì)由于窒息而發(fā)生死亡，病程僅1～3 d[7]。

肺炎型巴氏桿菌?。翰∨Ｖ饕憩F(xiàn)為體溫升高、咳嗽、呼吸急促，之后逐漸顯露出肺炎的體征，咳嗽時(shí)伴有痛感，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)頭頸前伸、張口呼吸的現(xiàn)象，該類型病程持續(xù)時(shí)間較長，一般超過7 d[8]。

1.2 病理變化

敗血型巴氏桿菌病：全身存在急性敗血癥變化時(shí)，患病牛皮下組織、肌肉、全身黏膜有密集出血點(diǎn)；在咽喉位置有明顯的急性炎性水腫特征[9]。全身淋巴結(jié)充血水腫、肺臟瘀血水腫，心外膜和心內(nèi)膜出血[10]、脾出血但不腫大、胃腸黏膜出血性炎癥、肌肉有散狀出血點(diǎn)。

水腫型巴氏桿菌?。夯疾∨５难屎硭[部位流出渾濁或黃色的液體。水腫部位可以擴(kuò)展到舌根、咽喉、頸部甚至前肢的皮下組織等，切開頸部皮膚時(shí)，可見大量膠凍樣橙黃色液體。體腔內(nèi)積有大量漿液纖維素性滲出物。

肺炎型巴氏桿菌?。夯疾∨Ｓ欣w維素性胸膜肺炎，肺部會(huì)有大面積的充血、淤血以及不同程度的肝變等癥狀，肺臟切面顏色從暗紅到灰白色呈大理石樣[11]。胸膜中有大量的纖維素性的黏附物，間質(zhì)間的水腫會(huì)擴(kuò)張?jiān)鰧?，病情較為嚴(yán)重時(shí)心包與胸腔有積液。肺泡中的白細(xì)胞數(shù)量異常，并且伴隨著化膿和壞死。

1.3 診斷

根據(jù)病牛的流行性病學(xué)調(diào)查研究、發(fā)病情況、病理變化等方面可作出初步診斷評(píng)估。此類疾病確診需要實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行診斷。鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、分子生物學(xué)檢查以及動(dòng)物接種試驗(yàn)等都是常見的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。將病死牛的病變組織等帶回實(shí)驗(yàn)室，制作若干的涂片，分別使用革蘭氏染色法和瑞士染色法進(jìn)行固定染色[7]。通過顯微鏡可以觀察到，革蘭氏染色的涂片有大量的革蘭氏陰性的短小桿狀菌。瑞氏染色法染色涂片后有兩極濃染的小球桿菌，細(xì)菌分離培養(yǎng)包括觀察生長特性、菌落的形態(tài)特征（半透明黏液型菌落）、進(jìn)行生化鑒定等。此菌不能在麥康凱瓊脂上生長，但在血液瓊脂平板上生長良好[12]。在試驗(yàn)條件允許的情況下，可進(jìn)行分子生物試驗(yàn)以及動(dòng)物接種試驗(yàn)。

1.4 防控措施

（1）加強(qiáng)日常管理，牦牛巴氏桿菌病主要由各種不良因素引起。改善衛(wèi)生條件，平時(shí)保持飼舍良好的衛(wèi)生，舍內(nèi)各種用具及時(shí)清洗消毒，細(xì)節(jié)問題尤其要注意，降低各種刺激牛應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生的可能。

（2）定期帶牛群放牧，增強(qiáng)牛抵抗力。放牧?xí)r，應(yīng)避免草場(chǎng)過濕，要讓牦牛喝干凈的水，時(shí)刻關(guān)注氣候的變化情況，做好牛群保暖防寒工作[9]。

（3）隔離消毒，一旦有感染病例出現(xiàn)，立即進(jìn)行隔離，根據(jù)感染情況做進(jìn)一步處理[13]。病死牦牛的尸體、排泄物要及時(shí)消毒，消毒后要進(jìn)行深埋，妥善處理，不能隨意丟棄。

（4）避免病原的入侵，若必須引進(jìn)新的牛種時(shí)，需隔離飼養(yǎng)，并觀察一個(gè)月以上。

2 傳染性胸膜肺炎

牦牛傳染性胸膜肺炎，又稱牛肺疫，俗稱“爛肺病”[13]。此病是一類嚴(yán)重的呼吸道傳染性疾病，是由牦牛絲狀支原體亞種SC 生物型霉菌所引起的[14]，主要以侵害牦牛肺部和胸膜為主。病牛常表現(xiàn)出漿液性肺炎、纖維素性胸膜炎的患病特征，病死率高達(dá)60%，在患病初期病牛干咳、鼻腔內(nèi)有漿液流出[15]。如果沒有進(jìn)行人為干預(yù)和治療，隨著時(shí)間的推移，病情加重，停止進(jìn)食，呼吸急促，甚至發(fā)生窒息死亡[16]。更嚴(yán)重時(shí)，牦牛四肢關(guān)節(jié)將會(huì)發(fā)生水腫、死亡[17]。由于高原地區(qū)晝夜溫差極大，導(dǎo)致此病在青海省等高原地區(qū)頻發(fā)。此病的主要傳染源是病牛、帶菌牛和其排泄物。病牛康復(fù)后仍然帶有病毒，可通過飛沫接觸感染健康牦牛。發(fā)病情況和年齡、性別和季節(jié)無關(guān)。隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，傳染性胸膜肺炎的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[18]。

2.1 臨床癥狀

牦牛傳染性胸膜肺炎潛伏期不等，短則一周，較長潛伏期可高達(dá)半年。根據(jù)其患病程度，此病可以大致劃分為3種類型：急性、亞急性、慢性。

急性型傳染性胸膜肺炎：病牛體溫可以高達(dá)40～42 ℃、咳嗽、鼻孔放大、呼吸急促、有漿液或膿性鼻液從鼻腔中流出。眼睛有大量分泌物、拒絕進(jìn)食、排泄次數(shù)減少，并且伴隨著流淚[19]。后期心臟衰弱、脈搏細(xì)而無力，平均每分80～120次；胸腔積液嚴(yán)重時(shí)，進(jìn)行肺部聽診，肺泡音時(shí)有時(shí)無、有胸膜摩擦音。病情惡化時(shí)，病牛胸前下部水腫嚴(yán)重、病牛表現(xiàn)為腹瀉便秘，呼吸極度困難，甚至窒息而死，死前體溫驟降[20]。急性型傳染性胸膜肺炎病例一般在癥狀明顯后一周左右死亡。也有病牛病勢(shì)趨于靜止，全身狀態(tài)改善、體溫下降，逐漸痊愈或轉(zhuǎn)為慢性。

亞急性型傳染性胸膜肺炎：癥狀與急性型較為類似，但病程更長，發(fā)病癥狀較緩，沒有急性型強(qiáng)烈明顯。

慢性型傳染性胸膜肺炎：通常是從急性型病例轉(zhuǎn)化而來，慢性患病牛病例的癥狀多數(shù)無明顯癥狀，氣溫降低時(shí)會(huì)發(fā)生偶爾干性短咳。對(duì)患病牦牛進(jìn)行叩診，胸部有濁音區(qū)，且聲音大小不一[21]。雖然部分病例無明顯癥狀，但此類牦牛依然帶毒。慢性傳染性胸膜肺炎病程多數(shù)在半個(gè)月左右，延續(xù)至半年以上的病例并不常見[22]。如果飼養(yǎng)管理和治療得當(dāng)、改善環(huán)境衛(wèi)生，可以逐漸恢復(fù)[23]。成為帶菌的牦?？砷L期排菌。如果飼養(yǎng)環(huán)境較差，則會(huì)導(dǎo)致病情惡化甚至傳播疾病。

2.2 病理變化

牦牛傳染性胸膜肺炎損害的是牛的胸腔和肺部。病牛在患病初期肺部患有小葉性肺炎，癥狀大多數(shù)是集中在牛的肺部右側(cè)。中期則為該病的典型癥狀，表現(xiàn)為漿液性纖維素性和纖維素性胸膜肺炎，是由于淋巴管擴(kuò)張，產(chǎn)生大量淋巴組織液，導(dǎo)致淋巴和血液循環(huán)不暢，患病部位很快發(fā)生硬化[24]。大量的淋巴細(xì)胞壞死、肺小葉組織間隙增大，形成更嚴(yán)重的大葉肺炎；淋巴液滲出胸腔，胸腔內(nèi)聚集大量由纖維素絮所形成的淡黃色渾濁滲出液，從而引起漿液性纖維素胸膜肺炎。在此過程中伴隨著不同程度的肝部病變，共同形成牦牛的典型大理石樣變[25]。在后期病牛肺部病灶嚴(yán)重壞死，結(jié)締組織增生，整個(gè)壞死病灶瘢痕化。

2.3 診斷

根據(jù)流行病學(xué)和病牛的表現(xiàn)癥狀，并對(duì)病牛解剖做出初步診斷，再借助實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)行確診。實(shí)驗(yàn)室診斷常見的技術(shù)包括分離培養(yǎng)鑒定、血清學(xué)診斷以及和分子生物學(xué)試驗(yàn)。分離培養(yǎng)是目前使用較多的方法，是由于該菌在人工培養(yǎng)基上具有生長旺盛、生長速度快、容易分離等優(yōu)點(diǎn)，是鑒定牦牛傳染性胸膜肺炎較有效的方法之一[26]。常見的血清學(xué)診斷方法中，敏感性較好的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。試驗(yàn)過程中操作簡單、易于執(zhí)行的是補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。研究表明，被動(dòng)血凝試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)相比較，在檢測(cè)牛傳染性胸膜肺炎過程中，前者敏感程度要高出大約20%，但是在較少發(fā)生傳染性胸膜肺炎的低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)，此種方法檢出的假陽性率較高，易于誤判[27]。常見的分子生物學(xué)診斷方法主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和核酸探針。與核酸探針方法相比，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗(yàn)操作簡捷、速度快、檢測(cè)靈敏度高，是目前實(shí)驗(yàn)室診斷該類疾病過程中運(yùn)用更廣泛的一種檢測(cè)方法[25]。核酸探針診斷方法現(xiàn)階段檢測(cè)手段操作過程較為困難、技術(shù)含量高，未能得到廣泛推廣，因此基本不使用此類檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)[28]。

2.4 防控措施

（1）在非疫區(qū)，做到自繁自養(yǎng)，不從疫區(qū)引進(jìn)病牛。必須引進(jìn)時(shí)，要進(jìn)行檢疫。

（2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。在夏季，使圈舍內(nèi)空氣流通順暢，加強(qiáng)通風(fēng)管理，及時(shí)排出有害氣體，保持舍內(nèi)空氣流通順暢。牦牛飼草中應(yīng)添加適量蛋白質(zhì)和維生素，保證牦牛能夠獲得充足的營養(yǎng)。

（3）制定嚴(yán)格的防疫消毒制度。牦牛傳染性胸膜肺炎對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害較大，因此要重視其防控工作，必要時(shí)期可以成立專項(xiàng)防控小組，整體布局防控任務(wù)，確保防控效果。監(jiān)督落實(shí)消毒工作，應(yīng)在牛場(chǎng)構(gòu)建規(guī)劃布局階段應(yīng)該充分考慮消毒池的設(shè)置。日常工作中飼養(yǎng)人員要經(jīng)過消毒才能開始工作。定期消毒牛舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)以及放牧草場(chǎng)。對(duì)糞便和病死牦牛尸體要進(jìn)行無害化處理。

（4）做好疫苗接種工作。接種疫苗是控制和消滅該病的主要措施。

（5）及時(shí)治療患病牦牛，牦牛傳染性胸膜肺炎目前無任何特效藥物能夠治療，發(fā)病早期使用四環(huán)素和鏈霉素對(duì)患病牦牛有一定的免疫抑制作用。

（6）及早組織藥防，加強(qiáng)對(duì)健康牛進(jìn)行藥物保健。

3 沙門氏菌?。ǜ眰?/h2>

牦牛沙門氏菌病，又稱牛副傷寒，主要由多種血清型的沙門氏菌（salmonella）引起。此類細(xì)菌性傳染疾病犢牛最易被感染、死亡率高。沙門氏菌在自然界中易于分離，屬于人畜共患的致病菌[29]，可以在自然環(huán)境中長時(shí)間存活，易引起食物中毒，導(dǎo)致人和動(dòng)物產(chǎn)生腸胃炎或副傷寒等疾病。沙門氏菌病主要易感初生的犢牛，引起病牛發(fā)熱、腹瀉、短時(shí)間內(nèi)脫水嚴(yán)重、迅速死亡。成年牦?；疾』緹o明顯癥狀，但妊娠母牛患病后，會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)。因此，該病又稱作為“小牛瘟”[30]。該病一年四季皆可發(fā)生，但由于氣候原因，夏季更易流行，給養(yǎng)牛業(yè)和相關(guān)的畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

3.1 臨床癥狀

犢牛作為易感種群，通常在1周歲容易發(fā)病，潛伏期大概為7～15 d。開始發(fā)病時(shí)，體溫可高達(dá)41 ℃；1～2 d 后，體重驟降、迅速脫水、病牛開始腹瀉、排出含有血絲或黏液惡臭稀便[31]、食欲驟降、臥地拒絕走動(dòng)。常在病癥出現(xiàn)后5～7 d死亡，死亡率高達(dá)60%。

成年牛發(fā)病后，也伴隨發(fā)熱癥狀。大部分牛在染病12～24 h 后，鼻翼擴(kuò)張、呼吸急促、拒絕進(jìn)食、精神萎靡不振、糞便惡臭稀薄并且含有血絲。急性病牛在發(fā)病1 d 后死亡，大部分是在1～5 d 內(nèi)發(fā)生死亡[32]。少數(shù)的病?？勺孕凶杂謴?fù)。病程長的病牛會(huì)出現(xiàn)體型快速消瘦、眼窩下陷、眼結(jié)膜變黃、關(guān)節(jié)炎和附關(guān)節(jié)發(fā)生不可逆性腫大，導(dǎo)致病牛跛行等典型癥狀[33]。懷孕母牦牛會(huì)發(fā)生流產(chǎn)，從流產(chǎn)胎兒中可以分離出沙門氏菌。

3.2 病理變化

對(duì)死亡病牛進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室剖檢，可以觀察到病牛的胃和腸道癟平無內(nèi)容物，淋巴結(jié)水腫、充血，大腸黏膜發(fā)生大片脫落、出現(xiàn)壞死區(qū)域，脾臟出現(xiàn)不同程度的充血、水腫[31]。有部分急性病例可見看到病牛的胃、胸腔內(nèi)壁、小腸以及膀胱黏膜有細(xì)微的出血點(diǎn)。病程較長的牦牛病例，可以看到肝臟的色澤異常、膽汁黏稠。肝、脾和腎臟等區(qū)域都出現(xiàn)壞死性病灶。牦牛關(guān)節(jié)受到嚴(yán)重?fù)p害，關(guān)節(jié)腔里有膠體樣液分泌[33]。流產(chǎn)的母牦牛胎盤出現(xiàn)水腫、出血，子宮內(nèi)充血、腫脹，有大量壞死的組織。

3.3 診斷

根據(jù)流行病學(xué)和病牛的表現(xiàn)癥狀，做出初步診斷，確診要采集病料送到有相應(yīng)檢測(cè)能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)[34]。實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)、PCR 檢測(cè)等。采取患病牦牛肝肺等器官制作涂片，革蘭氏染色，進(jìn)行鏡檢，可以觀察到?jīng)]有形成芽孢和莢膜的兩端橢圓的革蘭氏陰性短桿菌[35]。細(xì)菌分離培養(yǎng)，用鮮血平板培養(yǎng)基在37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)基上長出濕潤、邊緣整齊、周圍無溶血的小菌落。

3.4 防控措施

（1）加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查、檢測(cè)以及病原的診斷，按時(shí)可以對(duì)牦牛群進(jìn)行檢查，及時(shí)檢出帶菌牦牛并進(jìn)行隔離治療。

（2）做好生物安全工作，給牦牛注射的針頭等器具禁止一針多用，防止病原的機(jī)械性傳播，一次性用具要及時(shí)清理。

（3）加強(qiáng)藥物預(yù)防，在本病高發(fā)的地區(qū)，可進(jìn)行定期預(yù)防用藥。但在用藥過程中應(yīng)注意劑量，分配要合理，每間隔一段時(shí)間內(nèi)，需更換藥物，避免產(chǎn)生依賴性，降低藥效[36]。

（4）給牦牛提供單獨(dú)舍圈，不要多種動(dòng)物混養(yǎng)，造成疾病的交叉感染，增加患病概率。

（5）妊娠母牛的環(huán)境要格外注重，對(duì)母牦牛加強(qiáng)飼養(yǎng)管理工作，喂養(yǎng)蛋白質(zhì)含量豐富的飼料。

（6）處在康復(fù)期的牦牛需隔離飼養(yǎng)，是因?yàn)榧词故强祻?fù)期的牦牛，排泄物和分泌物仍然含有具有活性的病原菌，病原菌會(huì)污染飼料、飲水、環(huán)境，進(jìn)而間接傳播本病。

4 展望

牦牛細(xì)菌性傳染病還有很多，但以上是牦牛最常見和易感的3種細(xì)菌傳染性疾病。控制好這些常見傳染病對(duì)提高牦牛產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)水平、降低疫病損失和保障人民健康等具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。但隨社會(huì)的發(fā)展，環(huán)境污染、土壤污染和水污染等日益嚴(yán)峻，牦牛感染各種傳染疾病的概率也急劇上升。因此，需要采取科學(xué)嚴(yán)格的凈化和防治措施，并加強(qiáng)對(duì)病例的監(jiān)測(cè)和研究，通過科學(xué)技術(shù)手段為牦牛產(chǎn)業(yè)的提質(zhì)增效和持續(xù)健康發(fā)展保駕護(hù)航。