7個(gè)基因在小尾寒羊性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)差異分析

周祖陽 賀小云 劉玉芳 儲(chǔ)明星

摘要 [目的]探究綿羊多羔性狀候選基因CLSTN2、CCNB2、SRD5A2、HBEGF、FGFR1、GRIA2和FTH1在小尾寒羊性腺軸7種組織（大腦、小腦、下丘腦、垂體、子宮、卵巢、輸卵管）中的表達(dá)情況，為闡明綿羊高繁殖力分子機(jī)理提供參考。[方法]以FecB BB型和++型小尾寒羊?yàn)檠芯繉?duì)象，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)7個(gè)基因在性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)差異。[結(jié)果]CLSTN2基因在++型小尾寒羊卵巢中的表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），SRD5A2基因在BB型小尾寒羊卵巢中的表達(dá)量顯著高于++型小尾寒羊（P<0.05），F(xiàn)GFR1和FTH1基因在++型小尾寒羊子宮中的表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），CCNB2、HBEGF和GRIA2基因在++型和BB型小尾寒羊性腺軸各組織中的表達(dá)量差異不顯著（P>0.05）。[結(jié)論]CLSTN2、FGFR1和SRD5A2基因?qū)π∥埠蚍敝沉哂幸欢ǖ恼{(diào)控作用，其中SRD5A2基因?qū)π∥埠虻亩喔嵝誀罹哂幸欢ǖ恼蛘{(diào)節(jié)功能，而CLSTN2和FGFR1基因則呈現(xiàn)相反的調(diào)控作用。

關(guān)鍵詞 綿羊;多羔;候選基因;性腺軸;表達(dá)差異

中圖分類號(hào) S 826? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）21-0118-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.21.029

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Expression Difference Analysis of 7 Genes in the Related Tissues of Gonadal Axis of Small Tail Han Sheep

ZHOU Zu-yang? HE Xiao-yun LIU Yu-fang 2 et al

（1.Key Laboratory of Animal Genetics，Breeding and Reproduction of Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Institute of Animal Sciences，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193;2.College of Life Science and Food Engineering，Hebei University of Engineering，Handan，Hebei? 056001）

Abstract [Objective] To explore the expression of multi-lamb candidate genes CLSTN CCNB SRD5A HBEGF，F(xiàn)GFR GRIA2 and FTH1 in 7 kinds of tissues （brain，cerebellum，hypothalamus，pituitary，uterus，ovary，fallopian tube） in the gonadal axis of Small Tail Han Sheep，and provide references for clarifying the molecular mechanism of sheeps high fertility.[Method] Using FecB BB type and ++ type Small Tail Han Sheep as the research objects，real-time fluorescent quantitative PCR method was used to detect the expression differences of 7 genes in the related tissues of the gonadal axis.[Result]The relative expression level of CLSTN2 gene in ovary of ++ type Small Tail Han Sheep was significantly higher than that of BB type Small Tail Han Sheep（P<0.05），the relative expression level of SRD5A2 gene in ovary of BB type Small Tail Han Sheep was significantly higher than that of ++ type Small Tail Han Sheep（P<0.05），and the relative expression levels of FGFR1 gene and FTH1 gene in uterus of ++ type Small Tail Han Sheep were significantly higher than those? of BB type Small Tail Han Sheep（P<0.05），while

the relative expression levels of CCNB2 gene，HBEGF gene and GRIA2 gene had no significant difference in different tissues of the gonadal axis of ++ type and BB type Small Tail Han Sheep （P>0.05）.[Conclusion]CLSTN FGFR1 and SRD5A2 genes might have some regulations on the fecundity of Small Tail? Han Sheep.Among them，SRD5A2 gene might have some positive regulation functions on multi-lambing traits of Small Tail Han Sheep，while CLSTN2 gene and FGFR1 gene showed an opposite regulation effect.

Key words Sheep;Multiple lambs;Candidate gene;Gonadal axis;Expression difference

基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31772580）;國(guó)家肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)（CARS-38）;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目（ASTIP-IAS13）。

作者簡(jiǎn)介 周祖陽（1994—），男，湖北鄂州人，碩士研究生，研究方向：動(dòng)物遺傳育種。*通信作者，劉玉芳，講師，博士，從事動(dòng)物遺傳育種研究;儲(chǔ)明星，研究員，博士，從事肉羊遺傳育種研究。

收稿日期 2021-01-31

多羔性狀是綿羊重要的繁殖性狀之一，提高每胎的產(chǎn)羔數(shù)是提升綿羊養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益的有效方法[1]，因此對(duì)綿羊多羔性狀候選基因的研究具有重要意義。大量研究表明，雌性動(dòng)物繁殖性能主要受下丘腦-垂體-性腺軸（hypothalamic-pituitary-gonadal axis，HPGA）的調(diào)控，HPGA的相關(guān)基因是研究動(dòng)物繁殖性狀的重要候選基因[2]。近年來，隨著分子實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，綿羊多羔性狀主效基因也陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，利用分子標(biāo)記對(duì)綿羊多羔性狀相關(guān)候選基因進(jìn)行基因型選擇，取得了重大進(jìn)展。首先，通過對(duì)綿羊多羔主效控制基因FecB的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶該基因的母羊在排卵數(shù)方面存在劑量效應(yīng)，表現(xiàn)為每增加一個(gè)拷貝數(shù)，其排卵數(shù)可增加1.5個(gè)，產(chǎn)羔數(shù)可增加1.0～1.5個(gè)[3-4]，該基因的發(fā)現(xiàn)為選育高繁殖力母羊提供了研究方向。隨著研究的不斷深入，研究人員發(fā)現(xiàn)鈣同線蛋白2（calsyntenin? CLSTN2）、細(xì)胞周期蛋白B2（cyclin B CCNB2）、類固醇5α-還原酶2（steroid 5 alpha-reductase? SRD5A2）、肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子（heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor，HBEGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1（fibroblast growth factor receptor? FGFR1）、谷氨酸AMPA離子通道受體2亞基（glutamate ionotropic receptor AMPA type subunit? GRIA2）和鐵蛋白重鏈多肽1 （ferritin heavy polypeptide FTH1）等基因均能影響綿羊的繁殖力。探究這些基因在野生型、突變型綿羊性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)量變化對(duì)于闡明綿羊多羔性狀的分子機(jī)理具有重要意義。

Calsyntenins （CLSTNs） 蛋白家族是一類跨膜胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，主要分布在興奮性神經(jīng)元突觸后膜。在脊椎動(dòng)物中，CLSTNs家族包括CLSTN1、CLSTN2和CLSTN3三個(gè)成員[5]。Hernndez-montiel等[6]對(duì)2組佩利布伊綿羊進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS）研究，基于GWAS結(jié)果的功能分析篩選出參與母羊卵巢發(fā)育過程的候選基因CLSTN 表明該基因可能參與了對(duì)該品種綿羊的繁殖力調(diào)控。CCNB2是細(xì)胞周期蛋白家族的一個(gè)成員，在細(xì)胞周期調(diào)控中起著重要作用[7]。Wang等[8]研究表明，在繁殖性狀上，CCNB2能影響卵母細(xì)胞的發(fā)育;Mourot等[9]研究表明，CCNB2與牛卵母細(xì)胞的發(fā)育能力顯著相關(guān)，推測(cè)該基因可能通過參與卵母細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控綿羊的繁殖力。類固醇5α還原酶（SRD5A）包括1型和2型5α還原酶，催化睪酮生成二氫睪酮，在性別分化和雄激素介導(dǎo)的生理過程中起重要作用，在篩選單羔和多羔的安徽白山羊（AWG）卵巢差異表達(dá)基因的基礎(chǔ)上，確定了SRD5A2基因是單羔和多羔AWG中差異表達(dá)最顯著的基因，表明這個(gè)基因可能與山羊高繁殖力有關(guān)[10]。肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子（HBEGF）是最早發(fā)現(xiàn)的胚泡著床的分子介質(zhì)之一，它在子宮內(nèi)膜和植入滋養(yǎng)層細(xì)胞之間傳遞信號(hào)，以同步它們相應(yīng)的發(fā)育進(jìn)程。Jessmon等[11]認(rèn)為該基因可以促進(jìn)人和小鼠胚胎著床，有望在整個(gè)妊娠過程中作為生存因素發(fā)揮重要作用。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）對(duì)于促性腺激素釋放激素（GnRH）系統(tǒng)的發(fā)育至關(guān)重要[12]，已有研究表明人類和嚙齒動(dòng)物都依賴FGF受體1（FGFR1）和FGF8來支持GnRH神經(jīng)元的發(fā)育[13–15]，而GnRH水平的增加激活了下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸，啟動(dòng)了雌激素依賴性變化，如陰道開放（VO）和發(fā)情周期的開始[16]。GRIA2是谷氨酸AMPA受體的一種亞型，也是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最豐富的谷氨酸受體[17]。Vastagh等[18]研究發(fā)現(xiàn)，GRIA2基因參與調(diào)節(jié)促性腺激素釋放激素（GnRH）的谷氨酸能途徑，這是隨后的激素級(jí)聯(lián)反應(yīng)誘發(fā)小鼠排卵的已知先決條件。鐵蛋白重鏈多肽1 （FTH1）為鐵蛋白復(fù)合物，編碼鐵蛋白重鏈亞基[19]。楊宏星[20]通過對(duì)豬卵泡腔形成的分子篩選研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TH1基因可能與卵泡囊腔的形成密切相關(guān)。

目前關(guān)于以上7個(gè)基因在小尾寒羊性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)分析尚未見報(bào)道。筆者以FecB BB型（突變型）和++型（野生型）卵泡期的小尾寒羊?yàn)檠芯繉?duì)象，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)CLSTN2、CCNB2、SRD5A2、HBEGF、FGFR1、GRIA2和FTH1基因在綿羊性腺軸上相關(guān)組織中的表達(dá)量差異，旨在為進(jìn)一步研究這7個(gè)基因?qū)d羊多羔性狀的影響提供理論依據(jù)，為闡明綿羊高繁殖力機(jī)理提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和組織樣的采集 所有試驗(yàn)用羊均于2017年10月飼養(yǎng)于天津市畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)羊場(chǎng)。選取2～3周歲經(jīng)產(chǎn)且健康狀況良好的小尾寒羊母羊6只[FecB BB型（突變型）和++型（野生型）卵泡期各3只]，所有試驗(yàn)羊的飼糧水平和飼養(yǎng)環(huán)境均相同。2017年11月進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，取其大腦、小腦、下丘腦、垂體、子宮、卵巢、輸卵管等組織，取樣后迅速裝入1.8 mL RNase-Free凍存管中（最大樣品量為凍存管體積的67%）。所有羊的組織樣品采集均在30 min內(nèi)完成，樣品采完后迅速放入液氮中冷凍保存，然后置于干冰中帶回實(shí)驗(yàn)室，放入-80? ℃冰箱中冷凍保存，備用。

1.2 RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè) 將采集的小尾寒羊性腺軸7種相關(guān)組織在液氮中進(jìn)行研磨，然后用Trizol試劑（Invitrogen，美國(guó)）進(jìn)行裂解，并根據(jù)動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒（天根，北京）的說明書進(jìn)行總RNA的提取，最后用1.0%瓊脂糖凝膠電泳和Nanodrop 2000檢測(cè)提取RNA的質(zhì)量和濃度。經(jīng)檢驗(yàn)合格的組織總RNA置于-80 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 cDNA合成 用TaKaRa公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄體系（總體積為20 μL）如下：5×PrimeScript Buffer 4.0 μL，PrimeScript RT Enzyme MixⅠ 1.0 μL，Oligo dT Primer 1.0 μL，Random 6 mers 1.0 μL，RNA 1.0 μg，用RNase-Free ddH2O補(bǔ)至20 μL。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件如下：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，以獲得cDNA第一鏈，試驗(yàn)操作全程在冰上進(jìn)行，對(duì)反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA進(jìn)行5倍稀釋，用持家基因RPL-19進(jìn)行PCR檢測(cè)，將符合標(biāo)準(zhǔn)的cDNA置于-20 ℃下保存，以用于檢測(cè)目的基因的表達(dá)[2]。

1.4 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì) 根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫提供的綿羊CLSTN2、CCNB2、SRD5A2、HBEGF、FGFR1、GRIA2、FTH1和RPL-19基因序列（登錄號(hào)分別為XM_027963951.1、XM_004010560.4、XM_027966967.1、XM_004008863.4、XM_027962633.1、XM_004017287.4、NM_001009786.2）信息，用Primer Premier 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，其中RPL-19作為持家基因。引物由北京天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成。各引物濃度均為10 μmol/L，其他詳細(xì)信息見表1。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)使用Roche Light Cycler480Ⅱ 型熒光定量PCR儀進(jìn)行。以RPL-19基因?yàn)槌旨一?，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次。反應(yīng)體系（總體積為20 μL）如下：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ 10.0 μL，上、下游引物各0.8 μL，cDNA 模板2.0? μL，RNase-Free ddH2O 6.4 μL。PCR反應(yīng)程序如下：95 ℃ 預(yù)變性5 s，95 ℃變性10 s，60 ℃ 30 s，45個(gè)循環(huán);反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)熔解曲線進(jìn)行分析。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 將cDNA樣本稀釋5倍，然后進(jìn)行2倍梯度稀釋后獲得5個(gè)濃度梯度（1、1/2、1/4、1/8、1/16）的cDNA樣品。以這些cDNA為模板，對(duì)目的基因和持家基因進(jìn)行熒光定量PCR，以濃度梯度的對(duì)數(shù)值（以10為底數(shù)）為橫坐標(biāo)，以檢測(cè)所得Ct值為縱坐標(biāo)，繪制目的基因和持家基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線[2]。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，數(shù)據(jù)差異顯著性用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，組間比較用單因素方差分析（One-Way ANOVA），用最小顯著差異法（LSD）進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 總RNA的提取 提取后的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)28S條帶明顯比18S條帶更亮，條帶完整性較好，表明該RNA質(zhì)量合格，可用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.2? CLSTN2、CCNB2、SRD5A2、HBEGF、FGFR1、GRIA2和FTH1組織表達(dá)分析

2.2.1 CLSTN2組織表達(dá)分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明，CLSTN2基因在BB型小尾寒羊大腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，其在++型和BB型小尾寒羊子宮中低表達(dá)。CLSTN2基因在++型小尾寒羊卵巢中的表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05） （圖1）。

2.2.6 GRIA2組織表達(dá)分析。GRIA2基因在++型和BB型小尾寒羊大腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，在++型和BB型小尾寒羊卵巢、子宮、輸卵管中的相對(duì)表達(dá)量較低。GRIA2基因在++型和BB型小尾寒羊性腺軸各組織中的表達(dá)差異均不顯著（圖6）。

2.2.7 FTH1組織表達(dá)分析。FTH1基因在++型小尾寒羊下丘腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，在++型和BB型小尾寒羊垂體、子宮、卵巢、輸卵管中的相對(duì)表達(dá)量較低。FTH1基因在++型小尾寒羊子宮中的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.01）（圖7）。

3 討論

卵巢、子宮等是動(dòng)物最重要的繁殖器官，探究影響繁殖相關(guān)基因在這些組織中的表達(dá)差異可為闡明其產(chǎn)羔數(shù)和繁殖力提供理論基礎(chǔ)[21]。CLSTN2（Calsyntenin2），也被稱為alcadein-γ，是一種神經(jīng)細(xì)胞表面突觸蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，在未成熟的大鼠子宮中，當(dāng)17β-雌二醇（E2）水平在發(fā)情周期中升高時(shí)CLSTN2基因在卵泡期的表達(dá)量有所增加[22]。該試驗(yàn)中CLSTN2在BB型小尾寒羊大腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，與++型小尾寒羊相比差異不顯著（P>0.05）。Hernndez-montiel等[6]通過染色體全基因組關(guān)聯(lián)分析、性狀和與繁殖力相關(guān)的生物學(xué)通路來鑒定SNPs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CLSTN2基因s09883.1處的突變?cè)谂謇家辆d羊中表現(xiàn)出非季節(jié)性繁殖的特點(diǎn)，而在該試驗(yàn)中CLSTN2基因在++型小尾寒羊卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），推測(cè)該基因可能對(duì)FecB基因型小尾寒羊的產(chǎn)羔性狀有一定的負(fù)調(diào)控作用，而這種差異可能是由于物種不同所致。CCNB2是一種細(xì)胞周期蛋白，它可以在減數(shù)分裂調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用[23]。Daldello等[24]研究了CCNB2基因在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺乏CCNB2的卵母細(xì)胞成熟受到影響，導(dǎo)致了這些小鼠的不育，因此CCNB2在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中起著重要作用。Wang等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在生殖性狀上CCNB2能影響卵母細(xì)胞的發(fā)育。該試驗(yàn)中CCNB2基因在++型和BB型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量較高，其在++型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量略高于BB型小尾寒羊，二者差異不顯著（P>0.05），推測(cè)該基因可能對(duì)小尾寒羊多羔性狀的影響并不明顯。SRD5A2基因編碼生成5-α還原酶 其生物學(xué)功能是特異性催化睪酮轉(zhuǎn)化為雙氫睪酮[25]。Lian等[26]采用高通量RNA測(cè)序技術(shù)，篩選出高繁殖力和低繁殖力山羊卵巢中差異表達(dá)的長(zhǎng)非編碼RNA（LncRNAs）和mRNAs，KEGG通路分析表明差異表達(dá)的SRD5A2顯著富集于類固醇激素的生物合成途徑，而該途徑與動(dòng)物繁殖有關(guān)。Ling等[10]研究發(fā)現(xiàn)，SRD5A2在安徽白山羊和波爾山羊的卵巢中均有表達(dá)，但在心臟、肺臟、子宮和小腸中幾乎沒有表達(dá)，且SRD5A2基因是單產(chǎn)和多產(chǎn)安徽白山羊中差異表達(dá)最顯著的基因，據(jù)此推測(cè)該基因可能與山羊的繁殖力有關(guān)。該試驗(yàn)中SR5AD2在BB型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量高于++型小尾寒羊，且二者差異顯著（P<0.05），推測(cè)該基因?qū)ecB基因型小尾寒羊單羔、多羔繁殖性狀具有一定的正向調(diào)控作用。肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子（heparin binding EGF like growth factor，HBEGF）是表皮生長(zhǎng)因子家族中的一員[27]，HBEGF基因參與了卵泡的發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，大小卵泡中均有sHB-EGF和proHB-EGF的表達(dá)，但小卵泡中二者的比值明顯高于大卵泡[28]。潘伯臣等[29]研究發(fā)現(xiàn)女性不孕患者在接受體外授精-胚胎移植過程中取得的黃素化顆粒細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下表達(dá) HBEGF，說明 HBEGF 基因在卵泡發(fā)育及分化中發(fā)揮了一定的作用。該研究中HBEGF在BB型小尾寒羊小腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，而在++型和BB型小尾寒羊垂體、卵巢、子宮中的相對(duì)表達(dá)量較低，推測(cè)該基因可能對(duì)小尾寒羊多羔性狀的影響不大。

FGF信號(hào)在胎盤發(fā)育過程中起著重要作用，是滋養(yǎng)層干細(xì)胞（TSCs）從滋養(yǎng)外胚層分化所必需的[30]，而成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGFs）通過4種成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶（FGFR1-FGFR4）傳遞信號(hào)，并參與許多信號(hào)通路，包括ERK1/2、PLC和PI3K[31]。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）對(duì)于促性腺激素釋放激素（GnRH）系統(tǒng)的發(fā)育至關(guān)重要[13-15]。Tata等[12]研究發(fā)現(xiàn)，相比于具有可見的、更有害的生殖缺陷的復(fù)合胚體，F(xiàn)GF8缺失型或FGFR1缺失型小鼠在第一個(gè)發(fā)情期僅表現(xiàn)出輕微延遲，并在第一個(gè)發(fā)情期后開始正常的周期，這表明GnRH神經(jīng)元30%～40%的減少主要影響第一個(gè)發(fā)情周期的啟動(dòng)，但不影響其開始后的周期性。這與許多研究結(jié)果相一致，即只需要少數(shù)促性腺激素釋放激素神經(jīng)元來支持女性的青春期和持續(xù)生育能力[32-34]。據(jù)此推測(cè)FGF信號(hào)缺陷可能在不同程度上改變了雌性的發(fā)情周期和生育能力[12]。該試驗(yàn)中FGFR1基因在BB型小尾寒羊小腦中的相對(duì)表達(dá)量最高，且在++型小尾寒羊子宮中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），推測(cè)FGFR1可能對(duì)小尾寒羊的產(chǎn)羔性狀具有負(fù)調(diào)節(jié)的作用。GRIA2是谷氨酸AMPA受體的一種亞型，GRIA2亞基在控制異構(gòu)體AMPAR通道的電流-電壓關(guān)系和Ca2+滲透性等方面發(fā)揮著主導(dǎo)作用[35]。Wenthold 等[36]的免疫沉淀研究表明，與GRIA1或GRIA3相關(guān)的含有GRIA2的復(fù)合物是成人海馬體中存在的主要AMPAR群體。Vastagh等[18]研究了神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因mRNA表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)谷氨酸能（GRIA1、GRIA2）等基因中的差異最為明顯，這也導(dǎo)致了受體下游的G蛋白、腺苷酸環(huán)化酶和某些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（SLC1A4、SLC17A6、SLC6A17）的基因表達(dá)也發(fā)生了變化。在卵巢周期的發(fā)情前期和發(fā)情后期，GnRH神經(jīng)元神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)的顯著差異表明，這些神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)對(duì)排卵前GnRH峰的誘導(dǎo)有不同的貢獻(xiàn)，而排卵前GnRH峰是隨后激素級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)排卵的已知前提。該試驗(yàn)中GRIA2基因在++型和BB型小尾寒羊的大腦中的相對(duì)表達(dá)量較高，推測(cè)該基因可能參與GnRH的分泌，從而促進(jìn)小尾寒羊的排卵，進(jìn)而調(diào)節(jié)繁殖活動(dòng)，但該基因在2種基因型小尾寒羊性腺軸各組織中的表達(dá)差異并不顯著（P>0.05），推測(cè)其對(duì)FecB基因型小尾寒羊的多羔性狀無顯著影響。鐵蛋白重鏈多肽（FTH1）為鐵蛋白復(fù)合物，它除了調(diào)節(jié)鐵代謝外，還參與細(xì)胞增殖和胚胎發(fā)育，對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)和繁殖產(chǎn)生影響。王麗等[19]研究表明FTH1基因g.163-5G>A 位點(diǎn)的突變與湖羊產(chǎn)羔數(shù)顯著相關(guān)，推測(cè)FTH1基因可作為影響綿羊繁殖力的候選基因。Feng等[37]通過抑制性消減雜交技術(shù)篩選出與濟(jì)寧青山羊多胎性有關(guān)的基因FTH 且該基因在成年濟(jì)寧青山羊下丘腦組織中高表達(dá)，與該研究結(jié)果相一致，但該基因在++型和BB型小尾寒羊中的表達(dá)差異并不顯著，此外FTH1基因在++型小尾寒羊子宮中的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.01），在BB型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量高于++型小尾寒羊，但二者差異不顯著，這可能是由于物種不同所造成的，因此推測(cè)該基因?qū)ecB基因型小尾寒羊的多羔性狀具有一定的影響。

4 結(jié)論

CLSTN2基因在++型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），F(xiàn)GFR1基因在++型小尾寒羊子宮中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.05），推測(cè)這些基因可能對(duì)小尾寒羊的多羔性狀具有負(fù)調(diào)節(jié)的作用;SRD5A2基因在BB型小尾寒羊卵巢中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于++型小尾寒羊（P<0.05），推測(cè)該基因可能對(duì)綿羊的多羔性狀具有一定的正向調(diào)節(jié)作用;FTH1基因在++型小尾寒羊子宮中的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于BB型小尾寒羊（P<0.01），而有關(guān)該基因?qū)d羊繁殖力的影響則有待進(jìn)一步探究。該研究結(jié)果可為闡明綿羊高繁殖力的分子機(jī)制提供一定參考。

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