透明質(zhì)酸分析檢測

1962年 含量估算

一種改良的糖醛酸咔唑反應(yīng)

TBITTER.H.M.MUIR

摘要：糖醛酸與咔唑的反應(yīng)是估算色譜餾分中糖醛酸的最令人滿意的方法，但需要2小時(shí)才能完全顯色，而且對(duì)于某些化合物，顏色會(huì)被部分鹽抑制。顏色不穩(wěn)定，對(duì)過熱或水稀釋較為敏感，試劑或樣品中的雜質(zhì)會(huì)對(duì)其產(chǎn)生干擾。

與Aminoff、Morgan和Watkins測定己糖胺的發(fā)現(xiàn)一致，Gregory確定硼酸根離子類似地增加了糖醛酸咔唑反應(yīng)的顯色率，而在5-甲基間苯二酚-硫酸反應(yīng)中，它產(chǎn)生了一種立即出現(xiàn)的顏色。

本發(fā)明在濃硫酸中使用硼酸鹽進(jìn)行改性既快速又定量，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：（a）靈敏度進(jìn)一步增加，超過Gregory記錄的靈敏度（b）立即出現(xiàn)顏色，（c）顯著增加顏色的穩(wěn)定性，（d）更好的重現(xiàn)性，以及（e）減少氯化物和氧化劑的干擾。其中一些結(jié)果的初步報(bào)告已經(jīng)給出。

結(jié)論：描述了在硼酸鹽存在下對(duì)糖醛酸的Dische咔唑反應(yīng)的改進(jìn)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是：

（1）靈敏度提高了大約兩倍。OD是濃度在4到40 pg/ml之間的線性函數(shù)。

（2）最大顏色立即顯現(xiàn)。

（3）顏色穩(wěn)定至少16小時(shí)。

（4）有更高的重現(xiàn)性和減少氯離子和氧化劑的干擾。

現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)通過比較氯化物對(duì)兩種程序中顏色產(chǎn)量的影響，可以區(qū)分肝素、肝素衍生物和其他結(jié)締組織多糖苷酸。

文獻(xiàn)來源：T.BITTER，H.M.MUIR.A Modified Uranic Acid Carbazole Reaction[J].ANALYTICAL BIOCHEMISTRY，1962，4：330-334.

2011年 相對(duì)分子質(zhì)量測試

透明質(zhì)酸的黏度及相對(duì)分子質(zhì)量

Shimada E，Matsumura G

摘要：用沉降平衡法確定低相對(duì)分子質(zhì)量（Mr=1×104～7.2×104）及高相對(duì)分子質(zhì)量（Mr=3.1×105～1.5×106）透明質(zhì)酸（HA）的特性黏度（[η]）和Mr。兩種HA，其[η]對(duì)Mr的雙對(duì)數(shù)圖顯示出不同的線性。低Mr的HA，[η]=3.0×10-6×Mr 1.20，對(duì)高M(jìn)r的HA來說，[η]=5.7×10-4×Mr 0.76。兩線交叉點(diǎn)的HA Mr大約為1.5×105。Mr小于2.1×104的HA，其流變性（比濃黏度）與濃度無關(guān);而大于5.7×104的HA，其流變性（比濃黏度）隨濃度的增大而增加。

結(jié)論：由方程計(jì)算得到的[η]值與繪圖法得到的[η]值比較，偏差最多±4%，這表明該方程可用于圖形法的核對(duì)以及通過單一濃度的黏度數(shù)據(jù)來計(jì)算[η]值。然而，對(duì)于U-Ⅲ和U-Ⅳ洗脫片段來說，[η]值仍需使用繪圖法來確定。

log[η]對(duì)logMr作圖，S型及U型HA在Mr1.5×105處相交，此結(jié)果與Cleland的數(shù)據(jù)一致。他們解釋為短鏈HA的非高斯行為。這也可以說明，k值較低時(shí)，k值的變化反映了聚合物鏈的構(gòu)象變化。Cleland提出，不同糖胺聚糖在Mr較低時(shí)，都具有類似的流體力學(xué)特性。事實(shí)上，本次研究中，得到的低分子HA的特性黏度方程[η]=3.0×10-6×Mr1.20（Mr=1×104～7.2×104）與Wadteson研究硫酸軟骨素時(shí)得到的方程[η]=5.0×10-6×Mr1.4（Mr=2.4×103～3.6×104）吻合。

如果k與聚合物的形態(tài)以及聚合物鏈的柔性有關(guān)，那么本研究中得到的黏度數(shù)據(jù)表明，當(dāng)HA的Mr在2×104～6×104，HA鏈的柔性急劇增加，當(dāng)Mr達(dá)到105～2×105時(shí)，HA鏈的柔性最大，呈高斯卷曲的構(gòu)象。

明確黏度方程中的常數(shù)k、k”的含義，對(duì)闡明糖胺聚糖的構(gòu)象與Mr之間的關(guān)系有重要意義。

文獻(xiàn)來源：Shimada E，Matsumura G.透明質(zhì)酸的黏度及相對(duì)分子質(zhì)量[J].食品與藥品，2011（07）：301-303