叉角厲蝽2個(gè)章魚(yú)胺受體的基因克隆及化學(xué)農(nóng)藥對(duì)其表達(dá)的影響

姚瓊 全林發(fā) 徐淑 董易之 李文景 池艷艷 陳炳旭

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)試驗(yàn)室，廣州 510640）

“以蟲(chóng)治蟲(chóng)”是害蟲(chóng)生物防治的主要內(nèi)容之一，天敵昆蟲(chóng)在控制農(nóng)業(yè)蟲(chóng)害和保證農(nóng)產(chǎn)品豐產(chǎn)中有不可替代的作用。叉角厲蝽 Eocanthecona furcellata屬于半翅目Hemiptera、蝽科Pentatomidae，國(guó)內(nèi)分布于四川、廣東、廣西、海南、福建和中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)，國(guó)外分布于菲律賓、緬甸、泰國(guó)等國(guó)［1］。該蟲(chóng)一年發(fā)生多代，2齡以上若蟲(chóng)和成蟲(chóng)對(duì)害蟲(chóng)均有捕食能力，可捕食鱗翅目 Lepidoptera、鞘翅目 Coleoptera 和半翅目 Hemiptera 等多種農(nóng)作物害蟲(chóng)，尤其對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)幼蟲(chóng)表現(xiàn)出較好的控害能力，被認(rèn)為是一種極具應(yīng)用潛力的捕食性天敵昆蟲(chóng)［1-2］。

章魚(yú)胺（OA）是無(wú)脊椎動(dòng)物中一種非常重要的生物單體胺，在昆蟲(chóng)體內(nèi)廣泛、大量存在于其中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周緣神經(jīng)系統(tǒng)［3］?；诠壷幸训玫降恼卖~(yú)胺受體的結(jié)構(gòu)和信號(hào)傳遞差異，章魚(yú)胺受體分為 3 類(lèi) ：α-adrenergic-like（OctαRs），β-adrenergiclike（OctβRs） 和 octopatnine/tyramine（TyrRs）［4］。其中，OctβRs主要通過(guò)腺苷酸環(huán)化酶活性，誘導(dǎo)胞內(nèi) cAMP 的增加，激發(fā)蛋白激酶A的酶活性進(jìn)而轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)［4-5］。章魚(yú)胺作為神經(jīng)遞質(zhì)與其受體結(jié)合共同參與調(diào)節(jié)昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)、產(chǎn)卵、運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)和記憶、免疫反應(yīng)等多種生理功能［3，6-7］。

在害蟲(chóng)綜合治理（IPM）中，使用農(nóng)藥控制靶標(biāo)害蟲(chóng)的同時(shí)也可能對(duì)天敵昆蟲(chóng)產(chǎn)生毒害作用，使天敵對(duì)害蟲(chóng)的控制作用降低。近年來(lái)，開(kāi)展農(nóng)藥對(duì)天敵的毒性評(píng)價(jià)、減輕農(nóng)藥使用過(guò)程中對(duì)天敵的傷害和協(xié)調(diào)開(kāi)展害蟲(chóng)的化學(xué)防治和生物防治等逐漸成為IPM研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。但是相關(guān)研究主要集中于農(nóng)藥亞致死效應(yīng)對(duì)天敵的發(fā)育歷期、子代性比、凈生殖率和捕食功能等發(fā)育生殖和行為的影響，關(guān)于殺蟲(chóng)劑對(duì)天敵昆蟲(chóng)的亞致死作用的內(nèi)在分子機(jī)制報(bào)道較少［8-10］。本研究首次以捕食性天敵叉角厲蝽為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，在該蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)結(jié)果基礎(chǔ)上鑒定了2個(gè)OctβRs基因，并對(duì)其全長(zhǎng)進(jìn)行了克??；在對(duì)其序列特征進(jìn)行生物信息學(xué)分析之后，通過(guò)RT-qPCR技術(shù)測(cè)定了2個(gè)OctβRs基因的發(fā)育模式以及在亞致死劑量的高效氯氟氫菊酯和毒死蜱處理后的表達(dá)變化，以期為闡明OctβRs在叉角厲蝽應(yīng)激反應(yīng)中的生理功能研究提供線索。

1 材料與方法

1.1 材料

叉角厲蝽采集自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院白云基地蔬菜園，在溫度（25±1）℃，濕度RH（70±1）%、光周期14∶10（L∶D）的養(yǎng)蟲(chóng)室中，以黃粉蟲(chóng)Tenebrio molitor幼蟲(chóng)飼養(yǎng)約3代以上。

1.2 方法

1.2.1 總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄 收集3-5齡叉角厲蝽若蟲(chóng)各1頭，混合用液氮研磨后，利用Trizol試劑提取總RNA，通過(guò)2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的完整性。采用PrimeScript RT Reagent 試劑盒（Takara）以提取的總RNA為模板反轉(zhuǎn)錄得到cDNA第1鏈，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 序列克隆與分析 以叉角厲蝽轉(zhuǎn)錄組（數(shù)據(jù)待發(fā)表）測(cè)序結(jié)果為基礎(chǔ)，從成功注釋的unigene中搜索章魚(yú)胺受體（Oct）基因序列，將其對(duì)應(yīng)的蛋白序列與NCBI中的nr數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLASTP，驗(yàn)證是否屬于化學(xué)感受蛋白。使用Primer Premier 3.0軟件根據(jù)目的基因片段設(shè)計(jì)用于 EfOctβ1R 和 EfOctβ2R基因全長(zhǎng)序列擴(kuò)增和表達(dá)分析的引物（表1）。分別以2對(duì)特異性嵌套引物進(jìn)行5′和3′RACE擴(kuò)增。5′RACE 反應(yīng)程序?yàn)?：94℃ 3 min ；94℃ 30 s，65℃30 s，72℃ 1 min，33 個(gè)循環(huán)；72℃ 10min；4℃保存。3′RACE 反應(yīng)程序?yàn)?：94℃ 3 min ；94℃ 30 s，58℃30 s，72℃ 1 min，33 個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min；4℃保存。最后用DNAstar軟件將所得序列片段拼接為完整的序列。

表1 本研究中EfOctβ1R和EfOctβ2R克隆及實(shí)時(shí)熒光定量PCR所需引物列表Table 1 Primers for EfOctβ1R and EfOctβ2R cloning and qRT-PCR used in this study

蛋白分子量及等電點(diǎn)預(yù)測(cè)使用ExPASy 平臺(tái)中的 Compute pI/Mw（http：//expasy.org/tools/pi_tool.html），跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)使用TMHMM 2.0（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/）。 結(jié) 合 Ballesteros和Weinstein提出的方法，對(duì)兩條序列上的保守功能結(jié)構(gòu)域和生物胺結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)［11］。通過(guò) NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）的 Blast P功能完成氨基酸序列的同源性搜索，利用Clustal W軟件對(duì)序列進(jìn)行多重比對(duì)的基礎(chǔ)上，采用MEGA 5.0 軟件中的鄰位相連法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，Bootrap為1 000次。所有從NCBI上獲取的序列信息如表2所示。

表2 系統(tǒng)發(fā)育分析所用蛋白信息Table 2 List sequence information used in phylogenetic analysis

續(xù)表Continuted

1.2.3 藥劑處理 前期分別開(kāi)展了高效氯氟氰菊酯和毒死蜱對(duì)5齡叉角厲蝽若蟲(chóng)的室內(nèi)生物活性測(cè)定，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析得高效氯氟氰菊酯和毒死蜱的LC50分別為4.52 mg/L和2.00 mg/L（未發(fā)表）?；诖耍狙芯客ㄟ^(guò)藥膜法，以 4.52 mg/L高效氯氟氰菊酯和2.00 mg/L毒死蜱（以丙酮為介質(zhì)稀釋?zhuān)┨幚淼?齡叉角厲蝽若蟲(chóng)作為處理組；以丙酮處理為對(duì)照組。分別于處理后12 h、24 h、36 h、48 h和60 h隨機(jī)收集處理組和對(duì)照組叉角厲蝽各1頭，液氮處理后-80℃保存?zhèn)溆?，每個(gè)樣本進(jìn)行4個(gè)生物學(xué)重復(fù)。樣品總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄同1.2.1。

1.2.4 實(shí) 時(shí) 熒 光 定 量PCR 根 據(jù)EfOctβ1R 和EfOctβ2R基因序列用Primer Premier 3.0軟件設(shè)計(jì)RT-qPCR 特異性引物。利用GoTaq qPCR Master Mix試劑盒（promega，麥迪遜，美國(guó)）進(jìn)行RT-qPCR。其反應(yīng)體系包括：10 μL GoTaq qPCR Master Mix，1 μL cDNA 模板，0.5 μL 正向引物，0.5 μL 反向引物，8 μL DEPC水。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性2 min；95℃變性15 s；60℃退火60 s；40 個(gè)循環(huán)。以EfEF1a基因?yàn)閮?nèi)參基因計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，數(shù)據(jù)分析使用比較CT值方法分析［12］。每次RT-qPCR需要3次技術(shù)重復(fù)，并且每個(gè)樣本進(jìn)行4個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

2 結(jié)果

2.1 荔枝蒂蛀蟲(chóng)EfOctβ1R和EfOctβ2R基因的克隆與序列分析

以叉角厲蝽cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到 EfOctβ1R 和 EfOctβ2R的基因開(kāi)放閱讀框（open reading frame，ORF）長(zhǎng)度為1 245和1 230 bp，分別編碼414和409個(gè)氨基酸（表3）。其蛋白分子量分別為47.34和46.67 kD，二者等電點(diǎn)均大于8，偏堿性，親水系數(shù)為正值，二者均為疏水性蛋白。

表3 叉角厲蝽的章魚(yú)胺受體EfOctβ1R和EfOctβ2R信息Table 3 List of EfOctβ1R and EfOctβ2R in Eocanthecona furcellata

通過(guò)TMHMM預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)其編碼的蛋白序列包含有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域、3個(gè)胞外環(huán)、3個(gè)胞內(nèi)環(huán)、胞內(nèi)C端和胞外N端，屬于典型的G蛋白偶聯(lián)受體超家族成員。與其他物種同源基因的多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，EfOctβRs蛋白序列在跨膜區(qū)域保守性較高，EfOctβ1R 和 EfOctβ2R 第 2個(gè)和第 3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)之間，具有高度保守的兩個(gè)半胱氨酸殘基（圖1，圖2）。EfOctβ1R 在跨膜結(jié)構(gòu) 3（TM3）后有典型的G蛋白偶聯(lián)受體保守的DRY結(jié)構(gòu)域，EfOctβ1R 和EfOctβ2R的跨膜結(jié)構(gòu)7（TM7）上具有NP（L/I）IY結(jié)構(gòu)，均是β-adrenergic-like章魚(yú)胺受體中高度保守結(jié)構(gòu)，也是配體誘導(dǎo)內(nèi)在轉(zhuǎn)化所必需的結(jié)構(gòu)［5，11］。此外，二者序列中存在蛋白激酶C、配體結(jié)合位點(diǎn)和糖基化位點(diǎn)等高度保守結(jié)構(gòu)域，跨膜區(qū)域的保守性均大于非跨膜區(qū)域，并且跨膜域TM5和TM6間的胞內(nèi)三環(huán)是最大的。

圖1 叉角厲蝽EfOctβ1R與褐飛虱、赤擬谷盜、果蠅同類(lèi)蛋白氨基酸序列比對(duì)分析Fig. 1 Amino acid sequence alignment of EfOctβ1R in E. furrellata and orthologous receptors from Nilaparvata lugens（NlOctβ1R，ATY68966.1），Tribolium castaneum（TcOctβ1R，NP_001280514.1）and Drosophila melanogaster（DmOctβ1R，NP_001163690.1）

圖2 叉角厲蝽EfOctβ2R與跳蚤、褐飛虱、赤擬谷盜同類(lèi)蛋白氨基酸序列比對(duì)分析Fig. 2 Amino acid sequence alignment of EfOctβ2R and orthologous receptors from Cimex lectularius（ClOctβ2R，XP_014254146.1），Nilaparvata lugens（NlOctβ2R，ASA47149.1）and Tribolium castaneum（TcOctβ2R，NP_001280501.1）

2.2 基于叉角厲蝽EfOctβ1R和EfOctβ2R氨基酸序列進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建與同源性分析

基于已報(bào)道的其他昆蟲(chóng)種類(lèi)的同類(lèi)氨基酸序列基因信息，通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系來(lái)進(jìn)一步探明EfOctβ1R 和 EfOctβ2R的進(jìn)化關(guān)系。結(jié)果顯示，所有選中的昆蟲(chóng)章魚(yú)胺受體蛋白形成Octβ1R和Octβ2R兩個(gè)明顯的分支（圖3）。與EfOctβ1R同源性最高的同類(lèi)蛋白為：褐飛虱Nilaparvata lugens NlOctβ1R和 臭 蟲(chóng) Cimex lectularius ClOctβ1R；與 EfOctβ2R 同源性最高的同類(lèi)蛋白為：茶翅蝽Halyomorpha halys HhOctβ2R、長(zhǎng)紅獵蝽 Rhodnius prolixus RpOctβ2R 和臭蟲(chóng) Cimex lectularius ClOctβ2R。

圖3 EfOctβ1R和EfOctβ2R與其他昆蟲(chóng)同類(lèi)蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析Fig. 3 Phylogenetic analyses of EfOctβ1R and EfOctβ2 R and their homologs in other insects

2.3 表達(dá)模式

在叉角厲蝽整個(gè)發(fā)育周期的不同發(fā)育階段中，均可檢測(cè)到EfOctβRs基因，但在不同發(fā)育階段該基因的表達(dá)水平有所差異，二者在叉角厲蝽成蟲(chóng)期均有較高量表達(dá)。EfOctβ1R基因在叉角厲蝽整個(gè)若蟲(chóng)期均有所表達(dá)，但在3齡若蟲(chóng)期表達(dá)最低，僅為卵期表達(dá)的0.35倍，在1齡若蟲(chóng)期表達(dá)較高，可為卵期表達(dá)量的4.90倍；該基因在成蟲(chóng)期表達(dá)水平最高，可達(dá)卵期表達(dá)量5倍以上（圖4-A）。EfOctβ2R基因表達(dá)模式區(qū)別于EfOctβ1R基因，在成蟲(chóng)期表達(dá)水平最高，可為卵期的1.97和2.45倍；而在整個(gè)若蟲(chóng)期相對(duì)表達(dá)量均低于卵期表達(dá)量，尤其是4齡若蟲(chóng)期呈最低表達(dá)水平（圖4-B）。

圖4 叉角厲蝽EfOctβ1R和EfOctβ2R基因表達(dá)模式Fig. 4 Expression pattern of EfOctβ1R and EfOctβ2 R in E.furcellata

2.4 亞致死劑量藥劑處理對(duì)叉角厲蝽EfOctβ1R和EfOctβ2R基因表達(dá)量影響

以亞致死劑量高效氯氟氫菊酯和毒死蜱處理叉角厲蝽5齡若蟲(chóng)，利用RT-qPCR 檢測(cè)EfOctβ1R和EfOctβ2R基因在處理后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量變化。結(jié)果顯示（圖5），與空白對(duì)照組相比，亞致死劑量的高效氯氟氫菊酯處理后24 h開(kāi)始，EfOctβ1R和EfOctβ2R基因的相對(duì)表達(dá)量均陡然上升。在高效氯氟氫菊酯處理后 24 h時(shí)，EfOctβ1R 和 EfOctβ2R基因表達(dá)上升可高達(dá)29和19倍，EfOctβ1R和EfOctβ2R基因在該藥劑處理后24 h、36 h和60 h的表達(dá)上升倍數(shù)之間存在顯著性差異。與高效氯氟氫菊酯處理組相似，亞致死課題毒死蜱處理試蟲(chóng)后36 h時(shí)，EfOctβ1R和EfOctβ2R基因的相對(duì)表達(dá)量上升高達(dá)23和12倍，而且在該藥劑處理后36 h和60 h，EfOctβ1R和EfOctβ2R表達(dá)上升倍數(shù)之間有顯著性差異，說(shuō)明這兩類(lèi)化學(xué)藥劑能影響叉角厲蝽EfOctβ1R和EfOctβ2R的表達(dá)，二者表達(dá)變化不同可能與其不同生理功能相關(guān)。

圖5 亞致死劑量的高效氯氟氫酯酯和毒死蜱處理后叉角厲蝽EfOctβ1R和EfOctβ2R基因表達(dá)量變化Fig. 5 Change in the gene expressions of EfOctβ1R and EfOctβ2R in E. furellata treated with sublethal doses of efficient r-cyhalothrin and chlorpyrifos

3 討論

生物胺是動(dòng)植物體內(nèi)一種弱堿性低分子量含氮化合物，由氨基酸脫羧或醛和酮氨基化形成［3，7，13］。該類(lèi)物質(zhì)是一種神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)，通過(guò)血淋巴以神經(jīng)激素的形式作用于靶標(biāo)器官或組織，對(duì)維持生物體的正常生理生化過(guò)程及行為有重要意義［7，13］。本研究利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和RACEPCR的方法，從叉角厲蝽中克隆出了2個(gè)EfOctβRs基因全長(zhǎng)序列，為首次從厲蝽屬昆蟲(chóng)中克隆同類(lèi)蛋白序列。自Maqueira等［4］從果蠅中鑒定出了第一個(gè)昆蟲(chóng)β-adrenergic-like章魚(yú)胺受體基因起，生物學(xué)家們先后從家蠶Bombyx mori［14］、二化螟Chilo suppressalis［15］、 橘 小 實(shí) 蠅 Bactrocera dorsalis［16］等多種昆蟲(chóng)中分離鑒定出同類(lèi)基因。生物信息學(xué)分析表明，EfOctβ1R和EfOctβ2R2存在其他昆蟲(chóng)章魚(yú)胺受體預(yù)測(cè)和證實(shí)的磷酸化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)及配體結(jié)合位點(diǎn)等保守的結(jié)構(gòu)域，二者跨膜域TM6上的FxxxWxP序列后緊挨著兩個(gè)苯丙氨酸殘基（FF），該結(jié)構(gòu)是生物胺類(lèi)受體所特有的結(jié)構(gòu)，均對(duì)維持蛋白特有功能有重要意義。據(jù)報(bào)道，Octβ1R和Octβ2R2在桔小實(shí)蠅和二化螟的卵期、幼蟲(chóng)期、蛹期及成蟲(chóng)期蟲(chóng)體內(nèi)均有所表達(dá)［15-16］。本研究發(fā)現(xiàn)，EfOctβ1R和EfOctβ2R基因在叉角厲蝽的卵期、若蟲(chóng)期和成蟲(chóng)期呈現(xiàn)不同模式的表達(dá)。其中Octβ2R在卵期表達(dá)要高于若蟲(chóng)期，而EfOctβ1R則相反，可能與二者在卵期和若蟲(chóng)期的功能不同有關(guān)；此外，EfOctβ1R和EfOctβ2R在叉角厲蝽3齡若蟲(chóng)期和4齡若蟲(chóng)期均有一個(gè)低量表達(dá)，但二者具體生理功能還待進(jìn)一步研究。

在內(nèi)外環(huán)境不良刺激下，生物體為了應(yīng)對(duì)可能危及體內(nèi)平衡的各類(lèi)脅迫，會(huì)產(chǎn)生生理或行為上的壓力反應(yīng)［17-18］。研究發(fā)現(xiàn)，高溫、饑餓和高糖刺激下，黑腹果蠅Drosophila virilis［19］和意大利蜜蜂Apis mellifera［20］體內(nèi)章魚(yú)胺濃度及活性顯著改變；高密度飼養(yǎng)地中海蟋蟀Gryllus bimaculatus［21］和黏蟲(chóng)Mythimna separate［22］體內(nèi)章魚(yú)胺濃度增加。研究認(rèn)為在不同逆境狀態(tài)下，昆蟲(chóng)體內(nèi)章魚(yú)胺濃度變化，與其應(yīng)激反應(yīng)中的生理生化變化及行為調(diào)控密切相關(guān)?；瘜W(xué)農(nóng)藥是昆蟲(chóng)受到的最普遍的外界脅迫刺激之一，Hirashima等［23］證實(shí)多種殺蟲(chóng)劑處理美洲大蠊Periplaneta americana后，可引起蟲(chóng)體內(nèi)章魚(yú)胺的含量顯著上升。但是Rachel等［24］證實(shí)雙甲脒僅能輕微引起意大利蜜蜂血淋巴中章魚(yú)胺含量上升?？梢?jiàn)不同作用機(jī)制的化學(xué)藥劑對(duì)昆蟲(chóng)章魚(yú)胺含量影響結(jié)果不同。近期研究發(fā)現(xiàn)，化學(xué)藥劑不僅影響昆蟲(chóng)章魚(yú)胺含量和活性，也會(huì)引起其受體的表達(dá)水平變化，但是相關(guān)研究報(bào)道屈指可數(shù)。菊酯類(lèi)、煙堿類(lèi)和殺蟲(chóng)肼類(lèi)殺蟲(chóng)劑均可顯著提高埃及伊蚊Aedes aegypti 章魚(yú)胺受體表達(dá)水平，擾亂其代謝水平起到殺蟲(chóng)作用［25］?；奖ヮ?lèi)和酮類(lèi)化合物可能通過(guò)影響蕈蚊Bradysia procera 章魚(yú)胺受體表達(dá)水平，最終起到殺蟲(chóng)和殺卵作用［26］。本研究同樣證實(shí)了亞致死劑量殺蟲(chóng)劑脅迫后會(huì)引起昆蟲(chóng)體章魚(yú)胺受體表達(dá)水平的變化。用亞致死劑量的高效氯氟氫菊酯和毒死蜱處理叉角厲蝽后，蟲(chóng)體2個(gè)EfOctβRs基因均呈現(xiàn)相對(duì)表達(dá)量陡然上升，隨后表達(dá)變化倍數(shù)減少的變化趨勢(shì)，而且2種藥劑作用下EfOctβ1R和EfOctβ2R呈現(xiàn)不同程度的變化，其變化區(qū)別可能與2種殺蟲(chóng)藥劑作用機(jī)制不同相關(guān)。其中，高效氯氟氫菊酯作用下2個(gè)EfOctβRs最大變化出現(xiàn)于藥劑作用后24 h，早于毒死蜱處理組（36 h），可能由于對(duì)叉角厲蝽而言，高效氯氟氫菊酯藥效快于毒死蜱。

使用化學(xué)藥劑防治害蟲(chóng)的同時(shí)，天敵昆蟲(chóng)不可避免遭受藥劑毒害?；瘜W(xué)殺蟲(chóng)劑對(duì)天敵昆蟲(chóng)脅迫研究在協(xié)調(diào)害蟲(chóng)化學(xué)和生物防治中意義重大。殺蟲(chóng)劑對(duì)天敵昆蟲(chóng)的發(fā)育、行為及生殖影響研究及相關(guān)機(jī)制是IPM研究熱點(diǎn)之一。本研究首次利用捕食性天敵昆蟲(chóng)叉角厲蝽為研究對(duì)象，對(duì)叉角厲蝽2個(gè)EfOctβRs基因進(jìn)行了克隆及序列分析，并且在其序列特征及表達(dá)模式分析結(jié)果的基礎(chǔ)上，以常用殺蟲(chóng)劑高效氯氟氫菊酯和毒死蜱為處理藥劑，對(duì)亞致死劑量化學(xué)藥劑作用后厲蝽中EfOctβRs基因表達(dá)情況進(jìn)行了解析，結(jié)果證明EfOctβRs可能參與叉角厲蝽在殺蟲(chóng)劑脅迫下的應(yīng)激過(guò)程，后續(xù)可通過(guò)RNAi或CRISPR基因編輯等技術(shù)在活體水平確定該類(lèi)蛋白在天敵昆蟲(chóng)應(yīng)激過(guò)程中的相關(guān)功能，為該蟲(chóng)在生物學(xué)防治中的應(yīng)用提供理論支撐。

4 結(jié)論

叉角厲蝽2個(gè)EfOctβRs基因所編碼的蛋白包含有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和其他昆蟲(chóng)章魚(yú)胺受體證實(shí)的磷酸化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)及配體結(jié)合位點(diǎn)等保守的結(jié)構(gòu)域，屬于典型的G蛋白偶聯(lián)受體超家族成員。EfOctβ1R 和 EfOctβ2R基因在叉角厲蝽的卵期、若蟲(chóng)期和成蟲(chóng)期呈現(xiàn)不同模式的表達(dá)，對(duì)亞致死劑量高效氯氟氫菊酯和毒死蜱有強(qiáng)烈的響應(yīng)，在叉角厲蝽的化學(xué)藥劑脅迫響應(yīng)中行使相應(yīng)功能。