溶菌酶牙膏美白牙齒的臨床試驗(yàn)研究

徐天生 褚夫江 耿帥峰

(1.好易康生物科技(廣州)有限公司，廣東 廣州 510700；2.廣東藥科大學(xué)，廣東廣州 510006)

牙齒表面存在多種細(xì)菌群體，形成細(xì)菌性生物膜[1]，其表面分泌許多黏性物質(zhì)，日常飲食如喝茶、飲咖啡、吸煙等外源性色素常粘附在這些黏性物質(zhì)上，逐步使牙齒表面變黃或變黑，形成色斑，不僅影響美觀，對(duì)患者的容貌、心理和生活帶來(lái)諸多不利影響，又能引起牙體組織和牙周組織的疾病。目前市面上去除牙齒外源性色素的牙膏主要通過(guò)三種途徑起效。第一種為物理美白法，使用高清潔類(lèi)磨料美白牙齒，其機(jī)理是通過(guò)增強(qiáng)磨料與牙齒表面的磨擦，從而去除色素，但該方法為較為單一的物理去除方法，能起到一定的功效，但效果往往在復(fù)配化學(xué)美白物會(huì)更佳，例如復(fù)配磷酸鹽類(lèi)化合物，協(xié)同增效。第二種為化學(xué)美白法，主要通過(guò)使用磷酸鹽類(lèi)化合物和過(guò)氧化物類(lèi)化合物美白牙齒，磷酸鹽類(lèi)化合物作用機(jī)理是通過(guò)磷酸根抑制生物膜的形成，從而抑制色素的附著，同時(shí)絡(luò)合鈣離子，進(jìn)一步降低茶漬、咖啡漬等色素吸附到牙齒表面的概率；過(guò)氧化物類(lèi)化合物的作用機(jī)理是通過(guò)過(guò)氧化物的強(qiáng)氧化性，氧化去除色素。胡德渝等人研究了含有磷酸鹽、氟化鈉和高清潔二氧化硅的牙膏去除外源性色斑的八周效果，結(jié)果可以有效減少外源性色斑[2]。趙曉一等人研究了一種含過(guò)氧化物的美白牙膏對(duì)外源性色素的去除效果，結(jié)果在一定程度上可以去除外源性色素，并且與使用時(shí)間成正相關(guān)[3]。第三種為生物美白法，以應(yīng)用酶技術(shù)為主，酶是一種安全、高活性生物制劑，近年來(lái)，已被逐漸應(yīng)用于許多牙膏產(chǎn)品，起殺菌消炎、防齲齒、減輕牙齦出血、美白等作用，但目前應(yīng)用的報(bào)告較少。李娜等人研究了右旋糖酐酶、月桂醇硫酸鈉和檸檬酸鋅抑制牙齒色斑附著效果，結(jié)果為右旋糖酐酶有一定的效果，但是沒(méi)有同比的檸檬酸鋅溶液效果好[4]。

溶菌酶(Lysozyme)是唾液中的一種非特異性物質(zhì)成分，可以抑制微生物生長(zhǎng)，與抗生素或其他抑菌物質(zhì)對(duì)比，長(zhǎng)期使用溶菌酶不易出現(xiàn)抗藥性[5]。溶菌酶能有效地水解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖，其水解位點(diǎn)是N-乙酰胞壁酸(NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子間的β-1.4糖苷鍵。肽聚糖是細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成份，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4個(gè)氨基酸)組成，NAM與NAG通過(guò)β-1.4糖苷鍵相連，肽“尾”則是通過(guò)D-乳酰羧基連在NAM的第3位碳原子上，肽尾之間通過(guò)肽“橋”(肽鍵或少數(shù)幾個(gè)氨基酸)連接，NAM、NAG、肽“尾”與肽“橋”共同組成了肽聚糖的多層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，作為細(xì)胞壁的骨架，上述結(jié)構(gòu)中的任何化學(xué)鍵斷裂，皆能導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁的損傷[6]。

基于溶菌酶有良好的溶菌能力，是人體唾液中的成分之一，具有天然，安全的特性，可以有效溶解牙菌斑中的細(xì)菌，瓦解牙菌斑的構(gòu)造從而使其易于被清除，進(jìn)而達(dá)到美白牙齒的功效。著重研究含我司特制溶菌酶的牙膏在去除牙齒外源性色素上的功效情況。

1 方法

1.1 病例選擇

本研究采用隨機(jī)、平行對(duì)照、雙盲的臨床研究方法。篩選80例符合納入標(biāo)準(zhǔn)、不屬排除標(biāo)準(zhǔn)的受試者。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①同意參加本臨床試驗(yàn)并簽署書(shū)面知情同意書(shū)者；②身體健康，年齡在18周歲～65周歲(含18周歲和65周歲)，性別不限，對(duì)市售口腔產(chǎn)品或化妝品無(wú)過(guò)敏史；③口內(nèi)有12顆天然前牙，且無(wú)大面積的充填或冠等修復(fù)體；④牙齒有外源性色斑存在。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①已知或懷疑對(duì)試驗(yàn)藥及其輔料由過(guò)敏史或嚴(yán)重不良反應(yīng)，或過(guò)敏體質(zhì)者；②受試者有嚴(yán)重的口腔疾病、慢性??；③目前正參加其他的臨床試驗(yàn)；④正在進(jìn)行正畸治療或戴有可摘式局部義齒；⑤有晚期的牙周疾??；⑥妊娠或準(zhǔn)備妊娠婦女，哺乳期婦女。

1.2 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用隨機(jī)雙盲平行對(duì)照設(shè)計(jì)方法，受試者在基線、使用4周、使用8周回訪進(jìn)行口腔情況評(píng)估。

1.2.1 試驗(yàn)分組：篩選80例符合要求的受試者，試驗(yàn)組和對(duì)照組各40例。

1.2.2 盲法：采用同樣白色管進(jìn)行包裝。兩組牙膏在外觀上一致，用不同的編號(hào)區(qū)分。牙膏編號(hào)由Microsoft Excel軟件“=Rand()”函數(shù)方法得到的隨機(jī)數(shù)字產(chǎn)生。

1.2.3 牙膏：試驗(yàn)組牙膏為好易康生物溶菌酶牙膏；對(duì)照組為不含生物溶菌酶普通牙膏。

1.2.4 使用方法

整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間要求受試者只能用提供的牙膏和牙刷刷牙，根據(jù)醫(yī)生知道的方法每天進(jìn)行口腔護(hù)理，不得使用其他牙膏、牙刷或口腔衛(wèi)生用品，如漱口水、牙線等。受試者均發(fā)給同樣的軟毛牙刷。要求受試者每天刷牙兩次(早晚各1次)，每次刷牙至少3分鐘，每次刷牙擠約1cm長(zhǎng)牙膏。并要求受試者保持平時(shí)日常飲食、飲茶、喝咖啡及吸煙等習(xí)慣。臨床檢查于基線、第4周及第8周進(jìn)行，并由同一名檢查者完成。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

牙齒色斑采用Lobene色斑指數(shù)(Lobene stain index method)進(jìn)行評(píng)價(jià)，用0～3數(shù)字來(lái)評(píng)價(jià)牙面色斑面積和色斑程度，如表1。

表1 Lobene色斑指數(shù)計(jì)分原則

檢查牙位為下頜前牙的唇、舌面及上頜前牙的唇面。每個(gè)牙面色斑指數(shù)計(jì)分為該牙面的色斑面積計(jì)分和色斑程度計(jì)分的乘積。每個(gè)受試者的色斑指數(shù)計(jì)分為各牙面色斑指數(shù)計(jì)分的平均值，即：

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有統(tǒng)計(jì)推斷均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05，參數(shù)的置信區(qū)間估計(jì)采用95%置信區(qū)間。

2結(jié)果

80例受試者參與試驗(yàn)，其中3人失訪，中途退出試驗(yàn)(試驗(yàn)組2例，對(duì)照組1例)。完成試驗(yàn)的77例受試者中有6例與方案偏離，這6例參與人口學(xué)資料分析、安全性分析，不參與療效指標(biāo)分析，其中試驗(yàn)組2例，對(duì)照組4例。

2.1 兩組基線比較

80例受試者參與試驗(yàn)，77例受試者完成試驗(yàn)，試驗(yàn)組38例，對(duì)照組39例。所有參與試驗(yàn)的受試者未發(fā)現(xiàn)由牙膏引起不良反應(yīng)或嚴(yán)重事件。研究人群基本信息如表2以及基線期療效指標(biāo)如表3。

表2 研究人群的基線檢查情況

表3 試驗(yàn)組和對(duì)照組療效指標(biāo)基線期分布情況(n=40)

基線期試驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，牙齒色斑指數(shù)不具有顯著性差異(P>0.05)。

2.2 臨床效果

表4 基線、4周、8周色斑指數(shù)比較

基線檢查中，試驗(yàn)組和對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4周后，試驗(yàn)組牙齒色斑指數(shù)明顯低于對(duì)照組，相對(duì)于對(duì)照組色斑指數(shù)減少了51.04%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；8周后，試驗(yàn)組牙齒色斑指數(shù)顯著低于對(duì)照組，相對(duì)于對(duì)照組色斑指數(shù)減少了76.03%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.3 依從性

80例受試者參與試驗(yàn)，77例完成試驗(yàn)，有4例未按要求使用牙膏，其中對(duì)照組2例，試驗(yàn)組2例。對(duì)照組依從性為94.87%，試驗(yàn)組依從性為94.74%。有4例受試者訪視超窗，對(duì)比4例受試者的療效指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行了剔除前后的統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)剔除后與剔除前的統(tǒng)計(jì)結(jié)論一致

2.4 臨床安全性分析

完成試驗(yàn)的77例受試者中發(fā)生不良事件4例、嚴(yán)重事例0例，其中對(duì)照組4例，試驗(yàn)組0例。經(jīng)分析評(píng)價(jià)，此4例不良事件與所使用牙膏可能無(wú)關(guān)。

3 討論

3.1 臨床試驗(yàn)顯示:基線檢查中，試驗(yàn)組和對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4周后，試驗(yàn)組牙齒色斑指數(shù)明顯低于對(duì)照組，相對(duì)于對(duì)照組色斑指數(shù)減少了51.04%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；8周后，試驗(yàn)組牙齒色斑指數(shù)顯著低于對(duì)照組，相對(duì)于對(duì)照組色斑指數(shù)減少了76.03%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。因此，好易康生物溶菌酶牙膏與不含溶菌酶的普通牙膏相比， 具有去除牙齒外源性色斑的效果，使用簡(jiǎn)單方便，有良好的臨床適用性。

3.2 溶菌酶作為一種天然蛋白質(zhì)，存在于人的眼淚、唾液和乳汁中[7]，安全性高，對(duì)人體無(wú)毒性，也不會(huì)在體內(nèi)殘留。隨著社會(huì)的不斷進(jìn)步以及人們對(duì)健康生活的追求越來(lái)越高的今天，我們從最初的疾病治療，亦已慢慢轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)疾病的預(yù)防，所以倡導(dǎo)綠色、安全的功效物質(zhì)是社會(huì)發(fā)展所趨，相信生物溶菌酶的應(yīng)用前景是相當(dāng)廣闊的。