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    植物乳桿菌發(fā)酵對(duì)小米風(fēng)味物質(zhì)的影響

    2021-11-18 09:35:14陳忠恕王曉聞
    中國(guó)調(diào)味品 2021年11期
    關(guān)鍵詞:反式米粉乙酯

    陳忠恕,王曉聞

    (山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,山西 晉中 030801)

    小米,又名粟米,具有生育期短、適應(yīng)性強(qiáng)且不易腐敗的特點(diǎn)。山西省素有“小雜糧王國(guó)”的美稱,有數(shù)據(jù)顯示,在2014年之后,山西省擁有全國(guó)最大的小米種植面積;在2017年達(dá)到311.8萬(wàn)畝,約占全國(guó)小米種植面積的1/7,總產(chǎn)量占全國(guó)的1/3(58.7萬(wàn)噸)[1]。小米是一種優(yōu)質(zhì)的藥食同源雜糧,具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能特性?!侗静菥V目》中這樣描述小米:“治反胃熱痢,補(bǔ)虛損,開(kāi)腸胃”[2]。古書(shū)《靈柩經(jīng)》則認(rèn)為小米除“補(bǔ)氣、養(yǎng)胃”這些功能外,還能預(yù)防和治療某些婦科疾病[3]?,F(xiàn)代中醫(yī)研究發(fā)現(xiàn),小米有清熱解毒、健胃安眠的功效,能夠成為孕婦和傷病患者在康復(fù)過(guò)程中以及嬰幼兒在斷乳食期的主要食物之一[4]。

    植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)是一類革蘭氏陽(yáng)性、兼性異型發(fā)酵乳酸菌,呼吸方式為厭氧或兼性厭氧,是被廣泛應(yīng)用于食品中的益生菌之一且極耐酸[5-6]和膽鹽[7-8],因此在運(yùn)用搭配食品及加工中發(fā)揮了巨大的作用,如發(fā)酵酸奶、泡菜及肉類等。發(fā)酵食品擁有其獨(dú)特的風(fēng)味,同時(shí)也是讓益生菌進(jìn)入體內(nèi)的良好方式。植物乳桿菌能夠增強(qiáng)人體免疫力[9-10];調(diào)節(jié)人體腸道菌群[11];吸附有害物質(zhì),如鉛[12]、鎘[13]和鋁[14]。

    植物乳桿菌還能清除塑化劑[15]、展青霉素。

    頂空氣相色譜-離子遷移譜聯(lián)用技術(shù)(gas chromatography-ion mobility spectroscopy,GC-IMS)是一項(xiàng)新興檢測(cè)手段,于大氣壓下就能開(kāi)始檢測(cè)。在氣相色譜和離子迀移譜綜合運(yùn)用下,對(duì)得到的化學(xué)信息及測(cè)定特征對(duì)比能得到更好的結(jié)果[16]。目前,GC-IMS技術(shù)在食品中的應(yīng)用主要是在食品的安全控制及過(guò)程分析等方面,如檢測(cè)摻假油樣[17]、綠茶品種[18]、茶葉質(zhì)量[19]及區(qū)分白酒香型[20]等。但利用GC-IMS檢測(cè)小米粉發(fā)酵過(guò)程中的風(fēng)味物質(zhì)變化的研究鮮有報(bào)道。

    本研究以植物乳桿菌發(fā)酵制得發(fā)酵0,12,24,36,48,60,72 h的小米粉,利用GC-IMS技術(shù)測(cè)定不同時(shí)間其揮發(fā)性成分,利用與儀器配套的分析軟件Vocal對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析;利用插件Reporter建立三維圖譜、二維俯視圖譜;利用Gallery Plot插件建立指紋圖譜;通過(guò)HemI軟件建立熱圖進(jìn)行聚類分析;通過(guò)SIMCA 14.1對(duì)樣品進(jìn)行偏最小二乘法判別分析(PLS-DA);利用OriginPro 2019處理PLS-DA得到的樣品VIP值。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    小米(晉谷21號(hào)):產(chǎn)自山西省晉中市太谷區(qū);植物乳桿菌(CICC20265):由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院提供。

    1.2 試驗(yàn)試劑

    高溫α-淀粉酶(食品級(jí))、糖化酶、MRS肉湯:均由北京索來(lái)寶科技有限公司提供。

    1.3 試驗(yàn)儀器

    BS210S電子天平 北京賽多利斯天平有限公司;HSJ-4恒溫水浴攪拌器 江蘇科析儀器有限公司;QJ-06磨粉機(jī) 上海東華高壓均質(zhì)機(jī)廠;YSQ-LS-S高壓滅菌鍋、BJ-ICD無(wú)菌操作臺(tái) 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;SCIENTZ-18N真空冷凍干燥機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司;DHP-500恒溫培養(yǎng)箱 北京永光明醫(yī)療儀器廠;Flavour Spec?風(fēng)味分析儀 德國(guó)G.A.S公司;CTC-PAL自動(dòng)頂空進(jìn)樣器 瑞士CTC Analytics公司;SE-54毛細(xì)管柱 德國(guó)CS-Chromatographie Service設(shè)備供應(yīng)商。

    1.4 試驗(yàn)方法

    1.4.1 小米預(yù)處理

    取潔凈的小米籽粒于研磨機(jī)中充分研磨,過(guò)80目篩備用。

    1.4.2 菌種活化

    取配制好的MRS培養(yǎng)基10 mL于試管中,121 ℃滅菌15 min。在無(wú)菌操作臺(tái)上用接菌環(huán)挑取少量乳酸菌菌粉置于培養(yǎng)基中振蕩混合,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h(活化好的乳酸菌菌液呈現(xiàn)渾濁狀態(tài))。

    將試管中活化好的乳酸菌菌液接入裝有100 mL培養(yǎng)基的錐形瓶中,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h。以同樣步驟再進(jìn)行兩次擴(kuò)大培養(yǎng)試驗(yàn),最后一次擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液放到4 ℃冰箱中儲(chǔ)存。

    1.4.3 小米粉的糊化、糖化、液化

    糊化:取20 g小米粉,按1∶10料液比于紫外照射下浸泡12 h后加熱50 min至80 ℃。

    液化:在糊化后的料液中加入高溫α-淀粉酶18 U/g,80 ℃加熱60 min。

    糖化:在液化后的料液中加入糖化酶180 U/g,50 ℃加熱60 min。

    1.4.4 發(fā)酵試驗(yàn)

    按3%(W/W)添加發(fā)酵劑,設(shè)0(空白),12,24,36,48,60,72 h 7組樣品,凍干成粉并在-18 ℃下保存待測(cè)。

    1.4.5 風(fēng)味分析儀測(cè)定

    1.4.5.1 樣品處理

    取發(fā)酵完成的各小米粉樣品各1 g,置于20 mL頂空瓶中,80 ℃孵育15 min后進(jìn)樣100 μL。

    1.4.5.2 GC條件

    設(shè)置氣相色譜柱溫度為 60 ℃,測(cè)定過(guò)程中的載氣為高純N2;載氣流速為小米粉風(fēng)味物質(zhì)分離最適流速:初流速為2 mL/min,保持20 min,然后升至 100 mL/min,保持10 min,總分析時(shí)間為30 min。

    1.4.5.3 IMS檢測(cè)條件

    設(shè)置IMS漂移管溫度為45 ℃,測(cè)定過(guò)程中的漂移氣為高純N2,漂移氣的流速保持在150 mL/min不變;漂移管內(nèi)的電離源為氘放射,即β射線,離子化模式為正離子模式。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    利用與儀器配套的分析軟件Vocal對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析;利用插件Reporter建立三維圖譜、二維俯視圖譜;利用Gallery Plot插件建立指紋圖譜;通過(guò)HemI軟件建立熱圖進(jìn)行聚類分析;通過(guò)SIMCA 14.1對(duì)樣品進(jìn)行偏最小二乘法判別分析(PLS-DA);利用OriginPro 2019處理PLS-DA得到的樣品VIP值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同發(fā)酵時(shí)間小米粉樣品中VOCs的定性

    樣品經(jīng)過(guò)氣相色譜分離,然后基于保留時(shí)間和遷移時(shí)間通過(guò)離子遷移譜分析。檢測(cè)出的小米發(fā)酵粉揮發(fā)性成分的定性分析以圖1中的編號(hào)表示,縱坐標(biāo)為保留時(shí)間,橫坐標(biāo)為遷移時(shí)間。GC-IMS共檢測(cè)出50個(gè)信號(hào)峰,通過(guò)軟件內(nèi)置的NIST GC數(shù)據(jù)庫(kù)及G.A.S的IMS數(shù)據(jù)庫(kù),確定了40種揮發(fā)性成分,一共包括12種醛類、10種醇類、6種酮類、11種酯類和1種呋喃類物質(zhì),鑒定出的組分見(jiàn)表1,包括化合物名稱、CAS號(hào)、分子量、保留指數(shù)、保留時(shí)間、遷移時(shí)間。其他有信號(hào)峰但無(wú)法檢測(cè)出的VOCs未列出。當(dāng)穿過(guò)遷移區(qū)域時(shí),由于分析的離子和中性分子之間形成聚合物(如二聚體和三聚體),因此某些VOCs[21]檢測(cè)到多個(gè)信號(hào)峰。由于單體和二聚體的存在,戊醛、己醛、反式-2-戊烯醛反式-2-庚烯醛、丁醇、1-戊醇、正己醇、反式-2-己烯-1醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丁酸丙酯、己酸乙酯均表出雙峰。

    圖1 不同發(fā)酵時(shí)間的小米粉離子遷移譜圖譜Fig.1 Ion migration spectra of millet flour at different fermentation time

    表1 小米粉中檢測(cè)出的VOCs信息Table 1 The VOCs information detected in millet flour

    續(xù) 表

    2.2 不同發(fā)酵時(shí)間小米粉揮發(fā)性成分三維譜圖差異分析

    圖2 不同發(fā)酵時(shí)間的小米粉中VOCs成分三維譜圖Fig.2 Three-dimensional spectra of VOCs in millet flour at different fermentation time

    為了便于直觀地觀察和比較,采用三維譜圖對(duì)不同小米粉在不同發(fā)酵時(shí)間產(chǎn)生的VOCs進(jìn)行了表征。由圖2可明顯看出,隨著發(fā)酵時(shí)間的增大,一些VOCs的含量降低,形成新的物質(zhì)。其中,A部分的峰高在0~36 h內(nèi)持續(xù)降低,48 h出現(xiàn)新的峰高,然后又降低。B部分的峰高隨著發(fā)酵時(shí)間的增加不斷降低。而在C部分可以觀察出小米粉發(fā)酵后比0 h的小米粉樣品出現(xiàn)了很多新的峰值,由此斷定小米粉在植物乳桿菌發(fā)酵的影響下產(chǎn)生了新的風(fēng)味物質(zhì)且可能主要集中在這個(gè)保留時(shí)間和遷移時(shí)間段,由于此處的信號(hào)峰較為密集,不易判斷和分析,因此利用俯視圖作不同發(fā)酵時(shí)間的差異對(duì)比(見(jiàn)圖3)。

    2.3 不同發(fā)酵時(shí)間小米粉揮發(fā)性成分二維俯視譜圖差異分析

    圖3 小米粉不同發(fā)酵時(shí)間的二維譜圖Fig.3 Two-dimensional spectra of millet flour at different fermentation time

    由于三維譜圖能觀察到VOCs信號(hào)峰出現(xiàn)的位置,但如果出現(xiàn)信號(hào)峰分布比較密集的情況,不利于觀察比較樣品間的差異,且信號(hào)峰之間的峰高差異不顯著,因此利用二維俯視圖進(jìn)行比較,見(jiàn)圖3。橫坐標(biāo)1.0處的線是反應(yīng)離子峰(reaction ion peak,RIP)。RIP峰兩側(cè)的每個(gè)點(diǎn)分別為一種揮發(fā)性有機(jī)物,顏色越深表示此化合物濃度越高[22]。以發(fā)酵0 h的小米粉為參照,對(duì)比其他樣品中所有的揮發(fā)性物質(zhì)的差異??梢杂^察小米粉所含的VOCs主要集中在遷移時(shí)間100~300 ms之間,且與發(fā)酵0 h的小米粉相比,在此保留時(shí)間范圍內(nèi),VOCs有明顯變化。這一發(fā)現(xiàn)表明,小米粉在乳酸菌發(fā)酵的作用下生成了小米粉自身不含的揮發(fā)性物質(zhì)且本身含有的某些揮發(fā)性物質(zhì)含量降低。

    2.4 不同發(fā)酵時(shí)間小米粉揮發(fā)性有機(jī)化合物指紋圖譜分析

    圖4 小米粉樣品揮發(fā)性化合物的指紋譜圖Fig.4 Fingerprint spectra of volatile compounds in millet flour samples

    雖然三維及二維譜圖能體現(xiàn)出小米粉樣品在發(fā)酵過(guò)程中的變化趨勢(shì),但很難對(duì)圖中密集區(qū)域的VOCs作出準(zhǔn)確的判斷分析,而指紋譜圖很好地解決了這個(gè)問(wèn)題。以三維譜圖的峰值信號(hào),形成的小米粉樣品揮發(fā)性化合物的指紋譜圖(見(jiàn)圖4),每一行代表一個(gè)樣品的全部信號(hào)峰,每一列代表不同樣品中的同一VOCs。指紋譜圖上的每個(gè)點(diǎn)代表一種VOC的含量,點(diǎn)的顏色越亮,說(shuō)明該VOC在此樣品中的含量越高。指紋圖譜中名稱相同的兩種化合物為單體及其二聚體。二聚體的質(zhì)子親和力強(qiáng)及含量的增多使它們的遷移時(shí)間增長(zhǎng)。通過(guò)指紋譜圖能夠直觀地比較不同樣品之間的VOCs種類及含量的區(qū)別,揭示了小米粉在發(fā)酵過(guò)程中各VOCs的動(dòng)態(tài)變化。指紋譜圖上的數(shù)字代表了未定性揮發(fā)性物質(zhì)。對(duì)比整個(gè)發(fā)酵過(guò)程,小米粉中的VOCs含量有明顯的變化,這是基于植物乳桿菌生長(zhǎng)代謝過(guò)程中利用小米粉中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)生的代謝物導(dǎo)致的,同時(shí)使小米粉具有了特殊的風(fēng)味。

    小米粉的VOCs在發(fā)酵過(guò)程中不斷發(fā)生變化,通過(guò)比較VOCs在不同階段的譜點(diǎn)強(qiáng)度,可以確定該物質(zhì)在發(fā)酵過(guò)程中的變化(增加、減少、消失或波動(dòng))。圖4中A區(qū)域內(nèi)的VOCs在0 h時(shí)含量豐富,但在發(fā)酵之后含量急劇減少甚至消失,有壬醛、正庚醛、正己醛、正戊醛、正戊醇、庚醇、正丁醇、丁酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯及甲酸乙酯,這些物質(zhì)是小米粉自身的風(fēng)味物質(zhì),可能在植物乳桿菌生長(zhǎng)代謝過(guò)程中被降解或者轉(zhuǎn)化成其他的VOC物質(zhì)。B區(qū)域中的3-羥基-2-丁酮、丙酮酸乙酯及兩種未檢測(cè)出的VOCs含量在發(fā)酵過(guò)程中不斷增大。C區(qū)域的VOCs含量在發(fā)酵24 h達(dá)到最高值且在36 h減少而48 h時(shí)有一定上升趨勢(shì),總體在發(fā)酵過(guò)程中含量呈波動(dòng)趨勢(shì),如反式-2-庚烯醛、反式-2-辛烯醛、正丙醇、己酸乙酯及編號(hào)為2,5,7的未檢測(cè)出的VOCs。而反式-2-己烯-1-醇、反式-2-戊烯醛、2-丁酮、2-戊基呋喃、甲基庚烯酮、環(huán)己烯-2-酮、正己醇、2-庚酮在12 h時(shí)含量最大,隨著發(fā)酵時(shí)間的增長(zhǎng)不斷減少。綜合已檢測(cè)出的VOCs,通過(guò)指紋圖譜初步判斷,雖然小米粉中2-庚酮、己醇、環(huán)己烯-2-酮、甲基庚烯酮、2-戊基呋喃、2-丁酮、反式-2-戊烯醛、反式-2-己烯-1-醇的含量在12 h達(dá)到最高值,但在發(fā)酵24 h后仍有較高含量,而3-羥基-2-丁酮和丙酮酸乙酯在發(fā)酵24 h后也已有較高含量且3-羥基-2-丁酮具有令人愉快的奶油香味;丙酮酸乙酯具有新鮮甜潤(rùn)的花果香氣,不難看出在發(fā)酵24 h時(shí)風(fēng)味物質(zhì)含量最高且種類最豐富,可能在發(fā)酵24 h時(shí)小米粉樣品的感官最佳。

    2.5 基于熱圖對(duì)不同發(fā)酵時(shí)期的小米粉樣品聚類分析

    為了進(jìn)一步分析小米在發(fā)酵過(guò)程中VOCs的差異,將不同樣品中的VOCs含量作熱圖進(jìn)行聚類分析,見(jiàn)圖5。

    圖5 不同發(fā)酵時(shí)間的小米粉熱圖及聚類分析Fig.5 Heat map and cluster analysis of millet flour at different fermentation time

    由圖5可知,所有樣品可以分為發(fā)酵0 h的樣品和其他發(fā)酵時(shí)間的樣品兩大類,因此可以說(shuō)明植物乳桿菌發(fā)酵對(duì)小米粉的VOCs含量產(chǎn)生了巨大的影響。同時(shí),發(fā)酵48 h和發(fā)酵60 h的樣品、發(fā)酵36 h和發(fā)酵72 h的樣品聚集到一起,說(shuō)明它們之間的VOCs具有一定的相似度,發(fā)酵12 h的樣品又和48 h及60 h的樣品有一定的相似度,24,36,72 h的樣品有一定的相似度,說(shuō)明小米粉在發(fā)酵過(guò)程中VOCs含量的變化是不斷波動(dòng)的,此發(fā)現(xiàn)與指紋譜圖結(jié)論一致。

    2.6 小米發(fā)酵粉樣品的PLS-DA分析

    目前多數(shù)對(duì)GC-IMS結(jié)果的分析方法采用PCA主成分分析法[23-25],PCA可以清晰明了地展示數(shù)據(jù)組內(nèi)的重復(fù)性和組間的差異性,評(píng)估數(shù)據(jù)的可重復(fù)性,發(fā)現(xiàn)可能存在的異常值,比如明顯離群的樣本點(diǎn)。但PCA是一種無(wú)監(jiān)督的模式,屬于探索性分析。由于樣品間VOCs含量數(shù)據(jù)的復(fù)雜性,對(duì)于組間差異不夠明顯的樣品,單純的無(wú)監(jiān)督分析不能很好地區(qū)分樣本的組間差異,PLS-DA是有監(jiān)督的模式,屬于模型的方法,使用偏最小二乘回歸建立VOCs表達(dá)量與樣品之間的關(guān)系模型,對(duì)數(shù)據(jù)降維,這種監(jiān)督模式通??梢愿玫卮_立樣本關(guān)系。

    經(jīng)PLS-DA分析,R2X=0.995,R2Y=0.978,Q2=0.919,R2X和R2Y分別表示模型所能解釋X和Y矩陣信息的百分比,R2X-R2Y<0.3代表該模型較可靠。使用置換檢驗(yàn)的方法對(duì)PLS-DA進(jìn)行驗(yàn)證,次數(shù)為200次,得到檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量來(lái)評(píng)估模型擬合的質(zhì)量。PLS-DA置換檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖6,右側(cè)是原始值,左側(cè)是模擬值,所有左側(cè)的R2值和Q2值均比右側(cè)低,R2和Q2的回歸線斜率大于1,且Q2的回歸線截距為負(fù)值,說(shuō)明該模型穩(wěn)定性較好,未出現(xiàn)過(guò)擬合現(xiàn)象,具有較好的預(yù)測(cè)能力[26]。

    圖6 小米粉樣品PLS-DA得分圖Fig.6 PLS-DA score scatter plot of millet flour samples

    由圖6可知,發(fā)酵不同時(shí)間段的小米粉樣品通過(guò)PLS-DA得到了較好的區(qū)分,且發(fā)酵0 h的小米粉樣品與其他樣品表現(xiàn)出巨大差異,且發(fā)酵36 h的樣品與發(fā)酵72 h的樣品距離較近,24 h的樣品與36 h及72 h的樣品距離較近,表現(xiàn)出較高的相似度,與聚類分析結(jié)果一致。

    圖7 模型置換檢驗(yàn)圖Fig.7 Model permutation test diagram

    圖8 小米粉樣品中不同VOCs的VIP得分圖Fig.8 VIP score plot of different VOCs in millet flour samples

    變量投影重要度(variable importance for the projection, VIP)表征了分類過(guò)程中各個(gè)變量的重要性,通常VIP值大于1的變量在不同樣本組(即不同發(fā)酵時(shí)間的小米粉樣品)之間的區(qū)分中起著重要作用。通過(guò)VIP值篩選出15個(gè)差異標(biāo)記物:己酸乙酯二聚體、乙酸乙酯二聚體、正丙醇、己酸乙酯、3-羥基丁烷-2-酮、2-庚酮、反式-2-庚烯醛、正己醛二聚體、反式-2-庚烯醛二聚體、苯甲醛、正己醇二聚體、反式-2-戊烯醛、正丁醇二聚體及編號(hào)為1和10的兩種未鑒定的VOCs,這些VOCs的VIP值較高,說(shuō)明這些物質(zhì)在小米粉的發(fā)酵過(guò)程中含量變化顯著。

    3 結(jié)論

    此研究首次采用GC-IMS技術(shù)研究小米粉在發(fā)酵過(guò)程中的風(fēng)味變化情況,無(wú)需復(fù)雜的前處理及萃取過(guò)程,充分利用了GC高分離效率和IMS高靈敏度的特點(diǎn),將數(shù)據(jù)以可視化的形式呈現(xiàn)在譜圖中,不同發(fā)酵時(shí)間的樣品呈現(xiàn)出的差異更加直觀顯著。以GC-IMS數(shù)據(jù)庫(kù)為依據(jù),通過(guò)離子遷移譜圖和遷移時(shí)間及保留時(shí)間,建立了定性表格對(duì)分離出的VOCs進(jìn)行定性,得知發(fā)酵小米粉樣品中共分離出28種揮發(fā)性物質(zhì),包括醛類、醇類、酮類、酯類和呋喃類。通過(guò)對(duì)比小米發(fā)酵粉樣品的三維及二維譜圖,可以得知小米粉發(fā)酵前后的VOCs差異較大,且大部分集中在保留時(shí)間100~300 ms之間。為了更直觀地分析小米粉樣品中的VOCs,建立了指紋圖譜,由指紋圖譜可知,樣品中含有的VOCs隨著發(fā)酵時(shí)間的改變不斷改變,其中壬醛、正庚醛、正己醛、正戊醛、正戊醇、庚醇、正丁醇、丁酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯及甲酸乙酯在0 h時(shí)含量最高,發(fā)酵過(guò)后基本消失,3-羥基-2-丁酮、丙酮酸乙酯及兩種未檢測(cè)出的VOCs含量在發(fā)酵過(guò)程中不斷增大,其他VOCs在發(fā)酵過(guò)程中的含量變化呈波動(dòng)趨勢(shì)。綜合指紋譜圖結(jié)果分析得到在24 h時(shí),小米粉樣品的風(fēng)味物質(zhì)含量最高且豐富,或擁有花果及奶油等香味,理論上達(dá)到對(duì)比其他樣品的感官最佳值,與上前述結(jié)果一致。聚類分析結(jié)果顯示,發(fā)酵48 h和發(fā)酵60 h的樣品相似度高,且這兩個(gè)樣品與發(fā)酵12 h的樣品有一定相似度,發(fā)酵36 h和發(fā)酵72 h的樣品相似度高,且發(fā)酵24 h的樣品和這兩個(gè)樣品有一定的相似度,此發(fā)現(xiàn)能以側(cè)面反映發(fā)酵過(guò)程中某些VOCs含量處于不斷變化的狀態(tài);所有的樣品都與發(fā)酵0 h的樣品有較大差異,說(shuō)明植物乳桿菌發(fā)酵對(duì)小米粉的VOCs成分有巨大影響,與指紋譜圖分析結(jié)果一致。由PLS-DA分析可得,R2X-R2Y=0.017<0.3說(shuō)明模型可靠。置換分析結(jié)果說(shuō)明模型未過(guò)擬合,通過(guò)PLS-DA得分圖可知,0 h的小米粉樣品與其他樣品差異巨大,發(fā)酵36 h與發(fā)酵72 h的樣品相似度較高,24 h與36 h及72 h的樣品相似度較高,與聚類分析結(jié)果一致。通過(guò)VIP得分圖篩選出15個(gè)差異標(biāo)記物:己酸乙酯二聚體、乙酸乙酯二聚體、正丙醇、己酸乙酯、3-羥基丁烷-2-酮、2-庚酮、反式-2-庚烯醛、正己醛二聚體、反式-2-庚烯醛二聚體、苯甲醛、正己醇二聚體、反式-2-戊烯醛、正丁醇二聚體及編號(hào)為1和10的兩種未鑒定的VOCs在小米粉整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中的變化最為明顯。但由于GC-IMS技術(shù)起步較晚,手段較新,IMS數(shù)據(jù)庫(kù)不夠完善,部分VOCs無(wú)法進(jìn)行定性,無(wú)法定性的VOCs之后可以利用其他分析技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證,完善小米發(fā)酵領(lǐng)域的VOCs數(shù)據(jù)庫(kù)。

    本研究通過(guò)探究小米粉在發(fā)酵過(guò)程中風(fēng)味物質(zhì)的變化,以期在小米產(chǎn)品加工上提供新的思路,開(kāi)發(fā)出擁有優(yōu)質(zhì)風(fēng)味和良好營(yíng)養(yǎng)的小米發(fā)酵制品,同時(shí)證明了GC-IMS檢測(cè)技術(shù)能夠高效準(zhǔn)確地鑒別出不同發(fā)酵時(shí)間段的發(fā)酵小米粉樣品,為鑒別不同工藝條件發(fā)酵的小米粉提供新的思路,有望成為新的谷物發(fā)酵工藝優(yōu)化檢測(cè)的新技術(shù)。

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