2021年新疆塔城地區(qū)部分規(guī)模豬場豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體檢測與分析

劉鴿

（新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站，新疆烏魯木齊 830000）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS），又名“豬藍耳病”，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）引起的一種高度接觸性傳染病[1-5]。PRRS具有傳染性強、傳播速度快、危害范圍廣的特點，常引發(fā)生產(chǎn)母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道疾病（高死亡率）、公豬生殖機能下降[6-9]。PRRS被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為B類傳染病，我國將之列為二類動物傳染病。PRRS被我國列為強制免疫的豬病之一，疫苗免疫是當(dāng)前行之有效的方法，應(yīng)加強其科學(xué)免疫工作[10-12]。為更好了解2021年新疆塔城地區(qū)部分規(guī)模豬場PRRS免疫抗體水平，分析免疫效果，及時發(fā)現(xiàn)問題，淘汰病豬和做好PRRS的補免工作，從新疆塔城地區(qū)的4縣3市的14個規(guī)模豬場采集血樣1 125份，使用ELISA抗體檢測試劑盒檢測樣品的抗體水平，分析試驗結(jié)果。

1 試驗材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

從新疆塔城地區(qū)的4縣3市（額敏縣、托里縣、裕民縣、和布克賽爾蒙古自治縣、塔城市、烏蘇市、沙灣市）的14個規(guī)模豬場采集血樣1 125份，采集樣品范圍涉及豬群中的仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬、育肥豬。

1.1.2 試驗儀器及耗材

豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)）、自動酶標(biāo)儀、5 mL獸用采血器、微量移液器（多量程移液槍）、移液槍頭（5 μL、200 μL、1 mL）、恒溫培養(yǎng)箱（購自光明醫(yī)療儀器廠）、平板震蕩儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 采樣方法及血清分離

使用5 mL獸用采血器從待采樣豬的前腔靜脈采集血液4 mL（采集血樣過少不利于血清分離），在室內(nèi)傾斜放置一段時間（40 min左右），便于析出血清，使用采樣袋收集較好，放于采樣箱中帶回實驗室分離血清。在離心機中，使用4 000 r/min的轉(zhuǎn)速工作10 min。離心機停止工作后，使用量程為1 mL的移液槍從離心后的獸用采血器吸取1 mL血清（血清應(yīng)清亮，避免吸入紅細胞）到1.5 mL EP管中，做好標(biāo)記。根據(jù)時間安排，可立即進行抗體檢測，也可以將分離并標(biāo)記好的血清放于-20℃冰箱中，盡快檢測。

1.2.2 抗體檢測方法

提前將試劑盒中需要儲存于冰箱中（4℃保存）的試劑放置于實驗臺上，靜止2 h左右，待試劑恢復(fù)至室溫。根據(jù)使用說明，對濃縮洗滌液進行20倍稀釋，備用。在血清稀釋板上，分別將陰、陽對照血清作1∶4稀釋，將待檢血清作1∶40稀釋。洗滌抗原包被板，分別取稀釋后的陰、陽對照血清和待檢血清100 μL于抗原包被板微孔中（待檢樣做到一樣一孔，陰、陽對照血清各設(shè)兩孔）。使用平板震蕩儀輕搖20 s，在37℃恒溫箱中溫育30 min后，用稀釋好的洗滌液洗滌5次。在每個微孔中各加100 μL羊抗豬酶標(biāo)二抗，經(jīng)37℃溫育30 min，再洗滌5次。在每個抗原包被板微孔中加底物A 1滴（大約50 μL）、底物B 1滴，室溫避光顯色10 min。最后，各微孔中各加50μL終止液，盡快測定OD630nm值。

1.2.3 試驗結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

在酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD630nm值。試驗成立須滿足：2個陽性對照孔OD630nm值均≥0.7，2個陰性對照孔OD630nm值均＜0.3。

KQ值＝（樣品OD630nm值/陽性對照平均值）×100%

若KQ≥20，判為PRRSV免疫抗體陽性；若KQ＜20，判為陰性。

1.2.4 統(tǒng)計分析

使用Excel軟件和SPSS軟件分析試驗數(shù)據(jù)，計算本試驗豬場的PRRSV免疫抗體陽性率、KQ平均值、變異系數(shù)。

2 試驗結(jié)果

2.1 試驗豬場的PRRSV免疫抗體陽性率、KQ平均值、變異系數(shù)

新疆塔城地區(qū)14個規(guī)模豬場用大寫英文字母A～N編號，A、B在額敏縣，C、D在托里縣，E、F在裕民縣，G、H在和布克賽爾蒙古自治縣，I、J在塔城市，K、L在烏蘇市，M、N在沙灣市。統(tǒng)計分析，1 125個樣品中陽性樣本數(shù)量為1 089，陽性率為96.8%（1 089/1 125×100%），KQ平均值為85.09，變異系數(shù)平均值為0.27。統(tǒng)計試驗結(jié)果見表1。

表1 各豬場的PRRSV免疫抗體陽性率、KQ平均值、變異系數(shù)

2.2 塔城地區(qū)試驗豬場不同豬群的PRRSV免疫抗體水平

檢測塔城地區(qū)試驗豬場不同豬群的PRRSV免疫抗體水平，仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬、育肥豬的免疫抗體陽性率分別為99.06%、99.53%、98.88%、100%、67.06%，試驗統(tǒng)計結(jié)果見表2。

表2 不同豬群的PRRSV免疫抗體水平

2.3 試驗豬場0～30 d仔豬PRRSV免疫抗體陽性率

試驗共采集0～30 d的仔豬血液樣品 212份，PRRSV免疫抗體檢測呈陽性的有210份，占99.06%，試驗統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表3 0～30 d仔豬PRRSV免疫抗體陽性率

3 討論

3.1 塔城地區(qū)試驗豬群的PRRSV免疫抗體整體水平較高

對采集的樣品進行PRRSV免疫抗體檢測發(fā)現(xiàn)，采集的1 125個樣品中抗體陽性樣本數(shù)量為1 089，陽性率為96.80%，抗體陽性率高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的70%的合格標(biāo)準(zhǔn)[13,14]；KQ平均值為85.09，變異系數(shù)平均值為0.27。分析表明，2個豬場的的PRRSV免疫抗體陽性率為100%，占檢測豬場數(shù)量的14.28%，豬場分別在額敏縣和裕民縣境內(nèi)；PRRSV免疫抗體陽性率最低為90.36%，在托里縣境內(nèi)；抗體陽性率超過95%的豬場12個，占試驗豬場數(shù)量的85.71%；超過97%的豬場9個，占試驗豬場數(shù)量的64.28%；14個豬場中KQ平均值最大為96.70，最小為68.45；14個豬場中變異系數(shù)（CV）均小于0.4，最大為0.36，最小為0.16，符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的離散度低于0.40的標(biāo)準(zhǔn)[15]。綜合分析表明，新疆塔城地區(qū)豬群的PRRSV免疫抗體整體水平較高，抗體陽性率均高于90%，陽性率高于95%的占85.71%，數(shù)據(jù)變異系數(shù)較小，穩(wěn)定性較高；雖然整體免疫效果較好，但也存在免疫效果較差的個體，可能存在免疫失敗的風(fēng)險，需對免疫效果較差的個體進行補免，積極開展補救措施[16]。

3.2 試驗豬場的不同豬群間PRRSV免疫抗體水平存在差異

研究發(fā)現(xiàn)，試驗豬場的不同豬群間PRRSV免疫抗體水平存在差異：育肥豬抗體陽性率最低，僅為67.06%，已低于70%，原因可能為生豬生產(chǎn)企業(yè)對育肥豬的免疫工作不重視，認(rèn)為育肥豬出欄快，影響不大；種公豬的抗體陽性率最高，為100%，這可能與企業(yè)高度重視種公豬的飼養(yǎng)管理有直接關(guān)系；后備母豬次之，陽性率為99.53%；仔豬抗體陽性率為99.06%，高于經(jīng)產(chǎn)母豬98.88%的抗體陽性率。分析不同生長階段仔豬的抗體陽性率發(fā)現(xiàn)：仔豬整體抗體陽性率較高，免疫效果較好，但抗體陽性率隨生長日齡增大而降低；分析原因，可能與母源抗體在仔豬體內(nèi)隨時間延長而減少有關(guān)，側(cè)面說明母源抗體幫助仔豬抵抗疾病是非常重要的，要加強母豬泌乳階段的飼養(yǎng)管理[17]。而分析經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽性率低于除育肥豬之外的其他豬群的原因，可能由于采樣采集了部分即將淘汰的經(jīng)產(chǎn)母豬，對這部分即將淘汰的經(jīng)產(chǎn)母豬，生豬養(yǎng)殖企業(yè)放松了管理和疫苗免疫[18]。在同一個養(yǎng)殖場內(nèi)，對任何豬群放松管理和疫苗免疫都是危險的行為，任何豬群因為免疫效果差，可能會殃及整個養(yǎng)殖場，嚴(yán)重威脅整個豬場的健康發(fā)展，所以，應(yīng)高度重視豬場內(nèi)任何豬群的免疫工作[19]。

3.3 增強豬場疾病預(yù)防工作，及時有效進行免疫接種

豬繁殖與呼吸綜合征病毒傳播速度快、危害大，應(yīng)引起生豬生產(chǎn)企業(yè)的高度重視[20]。在做好飼養(yǎng)管理的前提下，免疫接種是最為有效的預(yù)防動物疾病的措施之一，各豬場應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)實際，制定科學(xué)合理的免疫程序，嚴(yán)格按照免疫程序開展豬群免疫工作，減少免疫失敗的現(xiàn)象發(fā)生，實施好免疫接種后的飼養(yǎng)管理措施；及時淘汰體弱、生產(chǎn)力低下、已感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒的豬只。同時，應(yīng)慎重選擇疫苗，優(yōu)選免疫效果較好的疫苗[21,22]。