宮頸病變中HPV16/18、p16INK4及CK17的表達(dá)研究

程文德 蔡芬蘭 王偉源 冷敏芳 陳艷芬 林梅英

（深圳市觀瀾人民醫(yī)院，廣東 深圳 518110）

宮頸癌是婦女中常見的多發(fā)性生殖道惡性腫瘤，在全世界范圍內(nèi)其發(fā)病率和死亡率都較高，嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量[1]。近年來，我國的發(fā)病率一直居高不下并有逐漸上升的趨勢(shì)，已經(jīng)成為我國女性惡性腫瘤的第二大殺手。本病的形成必須經(jīng)過一系列病變，如在初期是不成熟的病變，即子宮頸不典型不成熟鱗狀化生（atypical immature metaplasia，AIM），隨后細(xì)胞逐漸分化成熟，呈子宮頸上皮內(nèi)病變（cervical in traepithelial neaplasia，CIN），按級(jí)別分為低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）及高級(jí)鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）[2]等。針對(duì)不同的宮頸病變，其治療方法和預(yù)后均不相同。因此明確患者的病變程度對(duì)于治療和預(yù)后都起著至關(guān)重要的作用。本文收集120例2007至2010年在深圳市觀瀾人民醫(yī)院病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蠟塊，探討以上宮頸病變中HPV16/18、p16INK4及CK17表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2007至2010年在深圳市觀瀾人民醫(yī)院共收集到120例病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者及其病理蠟塊，年齡34～62歲，平均年齡（54.3±5.3）歲，其中AIM組36例，LSIL組44例，HSIL組40例。AIM組、LSIL組和HSIL組的基本情況如年齡、性別、病程等各項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

①經(jīng)病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蠟塊；②以上病例均根據(jù)宮頸上皮內(nèi)病變的診斷標(biāo)準(zhǔn)及Crum對(duì)AIM的定義進(jìn)行分組[3]；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝、腎功能不全等其他嚴(yán)重的全身性疾病；②患有其他嚴(yán)重的急性或慢性疾??；③合并女性除宮頸癌之外的腫瘤患者，如乳腺癌、卵巢癌等；④合并其他病毒性感染等[2]。

1.3 檢測(cè)方法

①p16INK4及CK17表達(dá)檢測(cè)：常規(guī)制片后采用免疫組織化學(xué)及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中p16INK4A及CK17蛋白表達(dá)[1,2]；②HPV16/18的檢測(cè)：采用核酸分子快速雜交儀檢測(cè)，HPV16、HPV18是HPV感染的高危型別[3]。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

p16INK4A：細(xì)胞核中出現(xiàn)棕褐色染色為陽性細(xì)胞；CK17：以胞質(zhì)棕黃色為陽性；按陽性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)分為：（-）：0%～1%；（+）：1%～5%；（++）：5%～25%；（+++）：＞25%[1-3]

1.5 研究方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料二者之間的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。

2 研究結(jié)果

2.1 CK17表達(dá)情況的比較

采用免疫組織化學(xué)及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中CK17蛋白表達(dá)情況，結(jié)果詳見表1，AIM組陽性率較高，為100%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較低，為13.1%（11/84），經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，χ2=17.9，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LSIL組和HSIL組陽性率分別為11.4%、15%，經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，χ2=1.9，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即AIM組陽性率明顯高于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組陽性率無明顯差異。

2.2 p16INK4表達(dá)情況的比較

采用免疫組織化學(xué)及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中p16INK4蛋白表達(dá)情況，結(jié)果詳見表2， AIM組陽性率較低，為11.1%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較高，為100%，經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，χ2=18.3，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LSIL組和HSIL組陽性率均為100%，即AIM組陽性率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）。

2.3 HPV16/18感染情況的比較

采用核酸分子快速雜交儀檢測(cè)120例宮頸病變中HPV16/18感染情況，結(jié)果見表3， AIM組陽性率較低，為22.2%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較高，為80.8%（68/84），經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，χ2=12.6，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LSIL組和HSIL組陽性率分別為79.5%和82.5%，經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，χ2=1.3，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即AIM組檢出率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組檢出率無明顯差異。

3 討 論

目前對(duì)宮頸癌的病因并不明確，大量流行病學(xué)資料研究了多種高危因素，主要與女性體內(nèi)激素等內(nèi)分泌水平、病毒感染等密切相關(guān)。有大量流行病學(xué)資料表明HPV與女性宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，其陽性率可高達(dá)90%[3]，尤其是高危型的HPV16/18與宮頸病變的關(guān)系更為密切。宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段的長時(shí)間病變，初期是不典型不成熟鱗狀化生（AIM），細(xì)胞逐漸分化成熟，呈子宮頸上皮內(nèi)病變（CIN），包括低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）及高級(jí)鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）。在形態(tài)學(xué)中AIM 和CIN的表現(xiàn)相似，容易導(dǎo)致誤診。但各病變中p16INK4A、CK17蛋白表達(dá)情況各不相同，因此p16INK4A、CK17蛋白的陽性表達(dá)率和HPV16/18的檢出率對(duì)診斷宮頸病變有重要的意義。由本次研究結(jié)果顯示，AIM組CK17表達(dá)陽性率明顯高于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組陽性率無明顯差異；AIM組p16INK4A表達(dá)陽性率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）；AIM組HPV16/18檢出率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和HSIL組檢出率無明顯差異。

在宮頸中，CK17主要表達(dá)于宮頸儲(chǔ)備細(xì)胞，是細(xì)胞分化不成熟的標(biāo)志，成熟細(xì)胞中不會(huì)表達(dá)，因此AIM組中陽性率較高，LSIL組和HSIL組陽性率較低。p16INK4A是位于人染色體9p21區(qū)的一種抑癌基因，主要參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖。在人正常宮頸鱗狀上皮中， 絕大多數(shù)上皮細(xì)胞呈陰性[4,5]，因此AIM組中陽性率較低，LSIL組和HSIL組陽性率較高。高危型HPV（HPV16/18）持續(xù)感染是宮頸癌及其癌前病變發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素，感染人體后可以產(chǎn)生癌蛋白E6和E7，通過E6蛋白與p53結(jié)合，E7蛋白與pRb結(jié)合，使p53降解和pRb失活，從而細(xì)胞周期控制失常，發(fā)生癌變[6]，因此AIM組中陽性率較低，LSIL組和HSIL組陽性率較高。綜上所述，在宮頸病變的連續(xù)過程中，可借助CKl7、p16INK4A的表達(dá)和HPV16/18的檢出率來認(rèn)識(shí)AlM和CIN的細(xì)胞分子特征，同時(shí)進(jìn)行二者的鑒別診斷。

[1]丁嵐,楊永國,梅霞.CKl7和p16在宮頸鱗狀上皮不成熟化生和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及意義[J].臨床病理學(xué)雜志,2009,16(3):174-175.

[2]徐秋霞,關(guān)紅瓊.p16INK4A 、p14ARF和Ki67在宮頸癌中的表達(dá)特點(diǎn)[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,16(1):17-18.

[3]范麗萍,丁宇,李靜,等.不同宮頸病變組織HPV6/11、HPV16/18、p53、Ki67表達(dá)的臨床意義[J].山東醫(yī)藥,2010,50(37):81-82.

[4]梁艷芳,胡新榮.HPV和p16INK4A與宮頸癌的關(guān)系研究進(jìn)展掌[J].西南軍醫(yī),2009,11(4):731-732.

[5]張松靈, 張立紅, 鐘艷平,等.人宮頸癌組織中CK17和P63蛋白的表達(dá)及意義[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009,35(5):914-915.

[6]劉彤,崔莉,許麗娟,等.p16、Ki67蛋白表達(dá)及HPV檢測(cè)在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的診斷意義[J].診斷病理學(xué)雜,2009,16(5):343-344.