國內(nèi)部分地區(qū)猴場猴D 型逆轉(zhuǎn)錄病毒血清學(xué)調(diào)查

劉洋銓，余 航，吳瑞可，王 靜，何麗芳，黃樹武，張 暉，閔凡貴

（1.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院，廣東佛山 528231；2.廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510663）

猴D 型逆轉(zhuǎn)錄病毒（simian type D retrovirus，SRV）屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科腫瘤病毒亞科的D 型病毒[1]，目前已發(fā)現(xiàn)8 個(gè)血清型[2-3]。研究[1]表明，SRV 為猴艾滋?。⊿AIDS）的致病因子之一，且感染后沒有特效的治療藥物，對(duì)癥治療無明顯療效。猴一旦感染SRV，將嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)猴作為商品的質(zhì)量，給猴場造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。為了解我國實(shí)驗(yàn)猴的SRV 感染情況，在廣東、云南、海南、廣西、河南5 省區(qū)猴場隨機(jī)采集752 份食蟹猴、恒河猴血清樣品進(jìn)行ELISA 抗體檢測，并對(duì)檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析，以期為該病防控和凈化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2015—2020 年，在廣東、云南、海南、廣西、河南5 省區(qū)6 家猴場采集實(shí)驗(yàn)猴血清樣品752 份，其中恒河猴232 份、食蟹猴520 份，具體抽樣信息見表1。在每個(gè)繁殖單元（欄舍）根據(jù)養(yǎng)殖數(shù)量，按照便利采樣原則，隨機(jī)采集抽取5～10 只猴，其中廣西、河南猴場未檢測繁育種群。血清采集后-80 ℃凍存待檢。

表1 實(shí)驗(yàn)猴血清樣本信息

1.2 方法

采用蘇州西山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的猴逆轉(zhuǎn)D 型病毒酶聯(lián)免疫抗體檢測試劑盒（批號(hào)20210428），按照試劑盒說明書進(jìn)行抗體檢測。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

試劑盒cutoff值為0.30，初次檢測樣品OD405為0.25～0.60 的進(jìn)行復(fù)檢，第二次檢測OD405≥0.30 判為陽性，＜0.30 判為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Microsoft Excel 以及SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果描述采用平均值±SD，組間感染率比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同來源實(shí)驗(yàn)猴SRV 抗體OD

采用ELISA 法測定752 份猴血清樣品抗體，OD 分布見圖1。云南省血清抗體OD 最高（0.38±0.82），其他依次是廣東A 組（0.16±0.13）、海南組（0.14±0.27）、廣東B 組（0.08±0.09）、廣西組（0.08±0.06）和河南組（0.03±0.03），不同來源實(shí)驗(yàn)猴SRV 血清抗體OD 存在顯著性差異（F=11.95，P＜0.05）。

圖1 不同猴場實(shí)驗(yàn)猴血清抗體OD 分布

2.2 不同來源實(shí)驗(yàn)猴SRV 感染情況

依據(jù)試劑盒cutoff值及可疑樣本復(fù)檢結(jié)果判定不同來源群體感染率，結(jié)果見表2。受檢樣本總陽性率為5.19%，繁殖單元陽性率為16.15%。不同猴場實(shí)驗(yàn)猴群感染率存在差異，其中云南實(shí)驗(yàn)猴感染率最高，樣本陽性率為13.50%，繁殖單元陽性率為46.15%；其次是海南，樣本陽性率為5.00%，繁殖單元陽性率為17.65%；廣東省兩家猴場感染率較低，樣本陽性率分別為2.50%和1.00%，繁殖單元陽性率分別為12.90%和5.00%；廣西與河南未檢出SRV。從感染猴的繁殖單元分布情況來看，廣東A、廣東B 和海南猴場為散發(fā)性感染，云南猴場的感染集中在年齡較大的繁殖種群單元。

表2 不同猴場實(shí)驗(yàn)猴SRV 感染情況

進(jìn)一步采用Fisher's exact probability test 進(jìn)行組間比較的結(jié)果（表3）顯示：云南猴場的感染率顯著高于廣東、海南和河南猴場（P＜0.05），海南猴場感染率顯著高于廣東B 組（P＜0.05），其他組別間感染率無顯著差異（P＞0.05）。

表3 不同來源實(shí)驗(yàn)猴SRV 感染情況組間比較結(jié)果（P）

2.3 不同種屬實(shí)驗(yàn)猴SRV 感染情況比較

按照動(dòng)物種屬分組比較的結(jié)果（表4）顯示：恒河猴血清抗體OD 為0.33±0.77（n=232），食蟹猴OD 為0.12±0.16（n=520），恒河猴抗體OD 明顯高于食蟹猴（F=35.28，P＜0.05）。依據(jù)試劑盒cutoff值判定，恒河猴樣本陽性率和單元陽性率分別為11.64%和35.29%，食蟹猴分別為2.31%和9.38%，恒河猴SRV 感染率明顯高于食蟹猴（P＜0.05）。

表4 恒河猴與食蟹猴感染情況比較結(jié)果

3 討論

獼猴在遺傳、形態(tài)、生理等方面均與人類相似，是生物醫(yī)學(xué)中不可替代的重要資源，是最為理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[4-5]。實(shí)驗(yàn)猴的質(zhì)量直接影響相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，而感染SRV 的實(shí)驗(yàn)猴，其作為商品的價(jià)值將會(huì)降低。感染SRV 的實(shí)驗(yàn)猴可能還伴隨有頑固性腹瀉、體重減輕、全身性淋巴腺病、脾腫大、貧血、慢性感染并對(duì)治療不產(chǎn)生療效反應(yīng)、壞死性口炎、腹膜后纖維瘤病等[6]。SRV 對(duì)實(shí)驗(yàn)猴的影響主要體現(xiàn)在對(duì)免疫系統(tǒng)的影響，如中性白細(xì)胞減少和淋巴細(xì)胞減少等。Cheung 等[7]研究表明，SRV 抗體陽性猴的中性粒細(xì)胞（PMN）吞噬能力會(huì)受到損害，細(xì)胞膜不可變形。Zhu 等[8]研究發(fā)現(xiàn)，SRV 感染T 細(xì)胞后會(huì)導(dǎo)致其自噬和凋亡途徑增強(qiáng)。如果使用感染SRV 的猴進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，就可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。因此，定期篩查猴場SRV，降低SRV 陽性率對(duì)猴場極為重要。

本次樣品采集雖為隨機(jī)抽樣，但分布較廣，涉及5 個(gè)省區(qū)130 個(gè)繁殖單元，因此檢測結(jié)果基本能反映出我國實(shí)驗(yàn)猴SRV 感染狀況。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)5 個(gè)省區(qū)有3 個(gè)省區(qū)猴場存在SRV 感染，平均繁殖單元陽性率為16.15%，受檢樣本總陽性率為5.19%，其中云南SRV 陽性檢出率最高，達(dá)到13.50%，但低于朱林等[9]報(bào)道的人工飼養(yǎng)中國獼猴的SRV 核酸檢出率（19.71%）。此前，有研究[10]發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的猴SRV 感染率存在差異。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不同省區(qū)SRV 感染情況也存在一定差異，其中云南、海南感染率較高，廣東、廣西、河南SRV 感染率較低。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，種屬差異性也是SRV 感染的重要影響因素，恒河猴SRV 感染率明顯高于食蟹猴（P＜0.05），表明對(duì)恒河猴更應(yīng)重視SRV 防控與凈化。

實(shí)驗(yàn)猴之間的直接水平接觸是SRV 最常見的傳播途徑。感染猴的唾液、尿液、血液、淚腺分泌物、腦脊液和母乳中有大量的病毒顆粒[11]。此外，接觸受污染的設(shè)備，如針頭、灌胃管、牙科器械和轉(zhuǎn)運(yùn)箱，也會(huì)導(dǎo)致SRV 感染。因此，猴場應(yīng)加強(qiáng)該方面的管理，減少實(shí)驗(yàn)猴之間直接或間接接觸，以降低感染率。

綜上所述，本研究通過對(duì)國內(nèi)不同地區(qū)人工養(yǎng)殖食蟹猴與恒河猴SRV 抗體檢測分析，獲得了重要的SRV 流行數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)實(shí)驗(yàn)猴飼養(yǎng)場普遍存在SRV 感染，而且具有一定的區(qū)域和種屬分布差異，這為實(shí)驗(yàn)猴人工繁育以及生物凈化提供了參考。