不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者血清中TIPE2水平表達及與 炎癥因子相關(guān)性分析

梁紅梅，張仿珍，余紅秀，張翅飛

(深圳市龍華區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518109)

0 引言

不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(Unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)是指與同一個配偶連續(xù)發(fā)生2次及以上原因不明的胚胎自然丟失或停止發(fā)育，約占復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的40%，給URSA患者的診斷、治療及預(yù)防帶來極大的挑戰(zhàn)[1-2]。隨著免疫學(xué)不斷深入研究發(fā)現(xiàn)，URSA的發(fā)生和發(fā)展與輔助性T細胞1/輔助性T細胞2(Th1/Th2)比例失衡而導(dǎo)致母胎界面免疫耐受異常有關(guān)，其中Th1細胞分泌的細胞因子水平升高不利于妊娠，而Th2細胞分泌的細胞因子水平升高有利于妊娠，而腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白-2(tumor necrosis factor α induced protein-2，TIPE2)是維持免疫穩(wěn)態(tài)的一種重要調(diào)控蛋白，多種分子通過調(diào)節(jié)TIPE2水平表達來調(diào)控機體的免疫功能，從而影響疾病的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸[3-6]。為此，本研究對URSA和有2次或以上懷孕成功且活產(chǎn)的非妊娠健康婦女血清中TIPE2水平及其與IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平的相關(guān)性進行了對比研究分析，旨在探討TIPE2在URSA發(fā)病中的作用，現(xiàn)報導(dǎo)如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年5月至2020年11月在深圳市龍華區(qū)婦幼保健院婦科就診的URSA患者97例為 URSA組，年齡23～41歲，平均(32.05±8.47)歲；孕次2～5次，平均(3.18±1.03)次。其中<25歲26例，25～30歲22例，31～35歲29例及>35歲20例；孕2次29例，孕3次41例及孕>3次27例。URSA診斷標準依據(jù)《原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的基礎(chǔ)與臨床研究進展》[7]，并排除夫婦染色體異常、內(nèi)分泌異常、解剖異常、感染及抗磷脂綜合征導(dǎo)致的流產(chǎn)。同期健康體檢有2次或以上懷孕成功且活產(chǎn)的非妊娠婦女106名為對照組，年齡22～43歲，平均(31.42±9.17)歲，孕次2～4次，平均(2.71±0.89)次。其中<25歲31例，25～30歲25例，31～35歲31例及>35歲19例；孕2次37例，孕3次41例及孕>3次28例。比較兩組的年齡和孕次等一般性資料，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)同醫(yī)院倫理委員會批準同意，且患者及家屬知情并簽定知情同意書。

1.2 儀器與試劑

AE275全自動酶聯(lián)免疫分析儀由深圳愛康科技有限公司提供；TIPE2，IFN-α，IL-17，IL-22，IL-6及IL-10試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供。

1.3 方法

采集空腹靜脈血3～5mL 于無抗凝劑的干燥管內(nèi)，室溫靜置30min后離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對TIPE2，IFN-α，IL-17，IL-22，IL-6及IL-10水平進行測定。所有操作均嚴格按儀器和試劑盒說明書進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

運用GraphPad Prism 5統(tǒng)計軟件。計量資料用(±s)表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示，比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TIPE2水平比較

URSA組 血 清 中TIPE2水 平 為(391.52±57.64)ng/L，明顯低于對照組的(682.76±71.08)ng/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.2647，P<0.05)。

2.2 兩組IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比較

URSA組IFN-α、IL-17及IL-22水平明顯高于對照組，而IL-6和IL-10水平明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見表1。

表1 URSA組和對照組IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比較(±s)

表1 URSA組和對照組IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比較(±s)

組別 例數(shù) IFN-α(ng/L) IL-17(pg/mL) IL-2(pg/mL) IL-6(pg/mL) IL-10(pg/mL)URSA組 97 30.15±2.97 59.28±14.65 184.26±19.52 76.29±5.62 7.95±0.68對照組 106 12.63±1.14 31.04±11.82 103.47±16.35 124.72±13.89 18.02±1.94 t 7.0641 5.0613 6.0542 4.8172 8.2767 P<0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.3 不同年齡及流產(chǎn)次數(shù)URSA患者TIPE2及炎癥因子水平比較

不同年齡及流產(chǎn)次數(shù)URSA患者TIPE2、IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見表2。

表2 不同年齡及流產(chǎn)次數(shù)URSA患者TIPE2及炎癥因子水平比較(±s)

表2 不同年齡及流產(chǎn)次數(shù)URSA患者TIPE2及炎癥因子水平比較(±s)

因素 n TIPE2(ng/L) IFN-α(ng/L) IL-17(pg/mL) IL-22(pg/mL) IL-6(pg/mL) IL-10(pg/mL)年齡(歲)<25 26 403.97±59.82 31.04±3.12 58.97±13.92 183.86±18.75 80.16±5.93 8.15±0.72 25～30 22 397.60±58.05 30.27±2.90 60.32±15.49 187.54±20.93 78.37±5.71 8.02±0.65 31～35 29 395.74±57.21 29.68±2.85 59.26±14.53 180.62±17.68 77.03±5.46 7.83±0.60>35 20 382.23±56.86 28.92±2.79 57.92±13.87 171.73±17.06 74.94±5.29 7.61±0.57 F 1.1067 1.2870 0.9782 1.3064 1.0693 1.2058 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05流產(chǎn)次數(shù)(次)2 29 390.06±57.15 28.71±2.85 61.05±16.28 172.54±17.65 80.03±6.12 8.17±0.72 3 41 382.98±56.26 31.09±2.91 58.20±14.09 180.26±18.94 79.29±5.97 8.05±0.69>3 27 405.26±61.20 32.25±3.01 57.64±13.95 183.09±18.90 75.21±5.56 7.59±0.58 F 1.0672 1.3715 0.9851 1.1982 1.3054 1.2063 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，TIPE2與IFN-α、IL-17及IL-22水平呈負相關(guān)(r=-0.8241，-0.7054及-0.6729，P<0.05)，而與IL-6和IL-10水平呈正相關(guān)(r=0.5905，0.6419，P<0.05)。

3 討論

URSA是一種病因和發(fā)病機制至今未明的婦科常見疾病。研究表明，URSA發(fā)病與染色體、血栓、生殖結(jié)構(gòu)異常、生殖感染、內(nèi)分泌失調(diào)及精液異常等多種因素?zé)o關(guān)，其發(fā)病率約為1%～5%，且有逐年上升趨勢[8-9]。URSA不僅嚴重影響婦女順利生育，造成夫妻雙方巨大的社會和心理壓力，對婦女身心健康造成傷害，還可引起一系列的家庭與社會問題，同時也是導(dǎo)致繼發(fā)不孕的重要原因之一。因此，加強URSA病因及發(fā)病機制研究，對URSA診斷、治療及預(yù)防具有重要意義。

妊娠過程中，Th1細胞對滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生細胞毒性作用，造成免疫損傷，影響胚胎發(fā)育，導(dǎo)致胚胎丟失，而Th2細胞維持母體與胚胎間的免疫耐受，維持妊娠成功，在正常妊娠過程中占主導(dǎo)地位。有研究表明，Th1/Th2細胞因子比例失衡在URSA發(fā)病中發(fā)揮了重要的作用[3,5,8]。TNF-α是一種Th1型細胞因子，可分解滋養(yǎng)細胞的DNA，使其變形，并刺激分泌血栓素的細胞，導(dǎo)致胎盤血管微血栓形成，從而抑制胚胎生長[10-11]。IL-17是一種主要由活化的T細胞產(chǎn)生的致炎細胞因子，可促進T細胞的激活和刺激上皮細胞、內(nèi)皮細胞及成纖維細胞產(chǎn)生多種細胞因子，從而導(dǎo)致炎癥的產(chǎn)生。IL-22是由多種免疫細胞分泌的一種細胞因子，其主要功能是促進組織的增殖、再生及調(diào)節(jié)宿主的黏膜屏障防御，但其還可引起組織病理性的炎癥反應(yīng)。近年來，有研究表明，IL-22在感染、自身免疫性及腫瘤等疾病中發(fā)揮獨特的作用[9,12-14]。IL-6和IL-10都是Th2型細胞因子，其中IL-6通過對B細胞刺激作用影響著母體的免疫機制，限制并降低排斥作用，確保胎兒的安全性，而IL-10是一種參與免疫調(diào)節(jié)及具有免疫抑制功能的細胞因子，其除了可以誘導(dǎo)滋養(yǎng)細胞及母胎界面單核細胞HLA-G基因和蛋白表達增加和單核細胞表面的MHC-Ⅰ型和Ⅱ型抗原表達降低外，還可抑制Th1細胞分泌Th1型細胞因子[10-12,15]。本研究結(jié)果顯示，URSA患者IFN-α、IL-17及IL-22水平比對照組明顯升高，而IL-6和IL-10水平比對照組明顯降低(P<0.05)，這表明URSA患者體內(nèi)可能存在Th1/Th2細胞因子比例失衡現(xiàn)象，其中Th1細胞因子可能在URSA發(fā)病過程中占居主導(dǎo)地位。

TIPE2是近年來新發(fā)現(xiàn)的與免疫、炎癥及腫瘤相關(guān)的一種調(diào)節(jié)因子，為腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(Tumor necrosis factor α induces protein 8，TNFAIP8)家族成員之一[16-17]。有研究表明，TIPE2具有免疫負向調(diào)控功能，其表達水平降低可加重膿毒性休克時炎癥反應(yīng)，維持巨噬細胞、中性粒細胞、樹突細胞及T和B細胞等免疫應(yīng)答反應(yīng)，參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，URSA患者TIPE2水平比對照組明顯降低(P<0.05)，與有關(guān)文獻報導(dǎo)的基本一致[4,10,18]，這表明TIPE2在URSA發(fā)病中發(fā)揮了重要的免疫負向調(diào)節(jié)作用，這可能與其水平降低促進T淋巴細胞增殖和免疫活性有關(guān)。此外，研究結(jié)果顯示，不同年齡及流產(chǎn)次數(shù)的URSA患者TIPE2、IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，同時TIPE2與IL-6和IL-10水平呈正相關(guān)，而與IFN-α、IL-17及IL-22水平呈負相關(guān)(P<0.05)，這可能與TIPE2在淋巴組織、T和B淋巴細胞呈高度表達，并在IFN-α的誘導(dǎo)后表達于其他細胞，其水平降低減弱了其對免疫負向調(diào)控的能力，從而導(dǎo)致Th1/Th2比例失衡有關(guān)，但其具體作用機制仍不明，有待進一步研究。

綜上所述，TIPE2水平在URSA患者血清中明顯降低，且與IL-6及IL-10水平呈正相關(guān)，而與IFN-α、IL-17及IL-22水平呈負相關(guān)，TIPE2在URSA發(fā)病中的作用可能與其水平降低導(dǎo)致Th1/Th2比例失衡有關(guān)。因此，加強TIPE2及其他細胞因子水平監(jiān)測，對URSA患者的診斷、治療及預(yù)防有一定的參考價值。