副干酪乳桿菌對(duì)青貯苜蓿有氧暴露品質(zhì)和細(xì)菌多樣性的影響

王琦 武之絢 陳鐘玲 吳白乙拉 胡宗福 牛化欣

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，通遼 028000）

保持厭氧狀態(tài)對(duì)青貯飼料的保存是至關(guān)重要的［1］。然而，在生產(chǎn)實(shí)踐中，青貯飼料與氧氣短期和長期接觸是不可避免的［2］。由于氧氣的滲透，青貯中存在的耐酸（兼性）好氧微生物開始增殖，氧化分解殘余的糖、乳酸、乙酸和乙醇，作為生長的底物，發(fā)生有氧變質(zhì)的起始階段［2-3］。當(dāng)形成的微生物量足夠大時(shí)，氧化釋放出的熱量會(huì)引起溫度的顯著上升。隨著pH值的增加，其他不耐酸的好氧微生物開始增殖，進(jìn)入了有氧腐敗階段［4-5］。隨著青貯飼料有氧暴露期間的不斷變化，青貯菌群的組成也隨之發(fā)生變化［6］。然而，目前對(duì)青貯飼料有氧暴露期間的菌群多樣性研究較少［7］，缺少對(duì)有氧暴露青貯苜蓿菌群全面而又詳細(xì)的了解。因此，本研究采用高通量二代測(cè)序?qū)η噘A苜蓿短、長期有氧暴露期間的菌群動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其接種副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei）在有氧暴露期間所起到的作用，旨在為青貯苜蓿提高有氧暴露發(fā)酵品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)和生產(chǎn)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

紫花苜蓿取自內(nèi)蒙古通遼市某草業(yè)公司，為第一茬開花初期。副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei LCP）由內(nèi)蒙古民族大學(xué)肉牛營養(yǎng)與飼料高值化實(shí)驗(yàn)室篩選分離。培養(yǎng)細(xì)菌所用的MRS培養(yǎng)基、培養(yǎng)酵母、霉菌所用的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基購自G-CLONE（中國）。FastDNA SPIN Kit for Soil DNA提取試劑盒（MP Biomedicals，美國）。TransGen AP221-02 PCR擴(kuò)增試劑盒（TransGen，中國）標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%）：乳酸、乙酸、丙酸、丁酸購自羅恩試劑。磷酸氫二鈉、次氯酸鈉、硫酸銨、葡萄糖購自光復(fù)。氫氧化鈉、蒽酮、購自DEEN。亞硝基鐵氰化鈉、苯酚購自天力。

1.2 方法

1.2.1 青貯的制作 紫花苜蓿經(jīng)簡單晾曬之后，干物質(zhì)約為24%時(shí)制作青貯。切短至2-3 cm，分別噴灑1×106CFU/g FM的副干酪乳桿菌菌液（LCP）和噴相同量的滅菌水（CON），然后裝入聚乙烯塑料袋（25 × 36 cm，厚度0.24 mm，浙江臺(tái)州）中，用真空包裝機(jī)（DZ-350，中國北京）真空包裝。每組3個(gè)袋（重復(fù)），每袋裝苜蓿500 g。將苜蓿放于室溫（25-26℃）避光條件下，青貯56 d。

青貯56 d后，采樣，將剩余樣品蓬松裝入無菌塑料瓶中，瓶口用4層紗布覆蓋，有氧暴露測(cè)定樣品溫度，并在第0天（PO0）、第7天（PO7）和第14天（PO14）取樣，一部分立即測(cè)定，其他2部分分別-80℃冰箱和-20℃冰柜保存。

1.2.2 青貯品質(zhì)的測(cè)定和方法 干物質(zhì)測(cè)定，將待測(cè)樣品稱重后置于電熱恒溫干燥箱（GZX-DH-300-II，中國）65℃烘干48 h，測(cè)定其干物質(zhì)（dry matter，DM）含量。樣品浸出液的制取及pH測(cè)定，取青貯苜蓿樣品30 g，加入270 mL蒸餾水，攪拌均勻，用粉碎機(jī)攪碎1 min，先后用 4 層紗布和定性濾紙過濾，濾出草渣得到浸出液，立即啟用pH計(jì)（雷磁PHS-25，上海）測(cè)定pH。然后將濾液，置于冷凍離心機(jī)（Eppendorf 5424R，德國）12 000 r/min離心15 min，取上清液，用0.45 μm濾膜過濾后HPLC（Agilent1260安捷倫，美國）用于測(cè)定乳酸、乙酸、丙酸、丁酸。

1.2.3 菌群多樣性的測(cè)定 將青貯飼料每個(gè)樣品取0.5 g放于1.5 mL抽提管中，按照說明使用 FastDNA SPIN 土壤DNA提取試劑盒（MP Biomedicals，CA，美國）提取苜蓿飼料中的基因組。將提取的DNA進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，并用NanoDrop對(duì)DNA濃度和OD260/OD280值進(jìn)行測(cè)定。16S rRNA 基因的PCR擴(kuò)增，對(duì)以上獲得DNA模板，細(xì)菌采用16S rRNA基因V3-V4區(qū)引物（338F：5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3'，806R：5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）［8］進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)采用20 μL體系，包括4 μL的5×FastPfu Buffer，2 μL的dNTPs（dATP、dTTP、dGTP和dCTP各2.5 mmol/L），0.4 μL 的 Fast-Pfu DNA Polymeras，10 ng DNA模板，正向引物和反向引物（5 μmol/L）各0.8 μL，0.2 μL的BSA（0.1%），無菌雙蒸水補(bǔ)至20 μL。95℃預(yù)變性3 min；95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸45 s，反應(yīng)循環(huán)數(shù)為27；最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物使用 1.5%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，使用 Thermo Scientific公司的GeneJET膠回收試 劑盒回收產(chǎn)物，使用Illumina測(cè)序?qū)Ｓ玫腘EB Next? Ultra DNA Library Prep Kit試劑盒建基因克隆文庫。構(gòu)建好的文庫送交上海美吉生物工程有限責(zé)任公司通過Illumina Miseq PE300平臺(tái)（Illumina Corporation，美國）進(jìn)行高通量測(cè)序。1.2.4 生物信息學(xué)分析 使用Usearch（vsesion 7.0）軟件平臺(tái)進(jìn)行操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU）的聚類分析。然后進(jìn)行序列優(yōu)化，包括非重復(fù)序列的冗余分析，無重復(fù)單reads的去除。按照97%相似性序列的原則，接著對(duì)優(yōu)化序列進(jìn)行OTU 聚類分析，在這個(gè)過程中要排出一些嵌合體，最后生成OTU代表序列，將所有的優(yōu)化序列歸類到代表序列中，產(chǎn)生 OTU表，并與Silva數(shù)據(jù)庫（Release128，http：//www.arb-silva.de）BLAST比對(duì)進(jìn)行分類學(xué)分析，所用Qiime平臺(tái)（http：//qiime.org/scripts/assign_taxonomy.html），統(tǒng)計(jì)后得到各樣本群落組成。然后對(duì)群落進(jìn)行基于OUT水平的Alpha多樣性分析（Shannon、Simpson、Chao和Ace）用mothur軟 件 平 臺(tái)［9］（Version 1.30.1，http：//www.mother.org/wiki/Schloss_SOP# Alpha _diversity）進(jìn) 行分析。菌群組成柱狀圖、Venn圖、Heatmap、主坐 標(biāo) 分 析（Principal coordinates analysis，PCoA）及NMDS分 析（non-metric multidimensional scaling analysis）均采用R語言相關(guān)軟件包進(jìn)行分析及作圖。使用QIIME［10］對(duì)PCoA及NMDS聚類的可靠性分別進(jìn)行了Adonis及Anosim分析。RDA分析使用R語言vegan包分析和作圖。LEfSe分析使用LEfSe（http：//huttenhower.sph.harvard.edu/galaxy/root?tool_id=lefse_upload）進(jìn)行組間差異顯著性物種的判斷。1.2.5 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)由Excel 2010處理，采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，對(duì)于多組樣品基于Tukey算法進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）和雙因素（處理I×有氧暴露時(shí)間S）方差分析（P＜0.05）。

2 結(jié)果

2.1 青貯苜蓿發(fā)酵品質(zhì)

青貯苜蓿前、有氧暴露前（PO0）、有氧暴露7 d（PO7）和14 d（PO14）后發(fā)酵品質(zhì)見表1，雙因素方差分析表明，LCP組對(duì)青貯苜蓿品質(zhì)具有顯著影響（P＜0.05），有氧暴露時(shí)間對(duì)青貯苜蓿干物質(zhì)（DM）含量影響不顯著（P＞0.05），對(duì)其他各指標(biāo)影響顯著（P＜0.05），除DM和丙酸（PA）含量，LCP組和有氧暴露時(shí)間對(duì)青貯飼料各指標(biāo)的交互作用顯著（P＜0.05）。LCP組對(duì)青貯飼料DM含量影響顯著，CON組DM含量均低于LCP組（P＜0.05）。青貯飼料CON組pH為5.46，LCP組為4.55，有氧暴露14 d后，CON組和LCP組pH升高，CON組pH升高至6.43，LCP組pH升高至4.83，pH在CON組均高于LCP 組（P＜0.05）。有氧暴露降低了CON組和LCP組的乳酸菌數(shù)量（P＜0.05），且CON組乳酸菌數(shù)量顯著低于LCP組（P＜0.05）。有氧暴露期間，青貯飼料酵母菌和霉菌生長顯著（P＜0.05）。有氧暴露降低了青貯飼料乳酸含量（P＜0.05），但乳酸含量在LCP組大于CON組（P＜0.05）。有氧暴露期間，CON組和LCP組乙酸和丙酸含量均降低（P＜0.05）。

表1 有氧暴露苜蓿青貯品質(zhì)Table 1 Fermentation quality of alfalfa silage during aerobic exposure from 0 to 14 d

2.2 細(xì)菌多樣性動(dòng)態(tài)變化

2.2.1 青貯苜蓿菌群α多樣性分析 青貯苜蓿有氧暴露18個(gè)樣品共獲得993 834條有效序列，平均每個(gè)樣本序列數(shù)為55 213條，平均每條序列長度為425.66 bp。共獲得12個(gè)門、22個(gè)綱、47個(gè)目、80個(gè)科、109個(gè)屬、141個(gè)種、157個(gè)OTU。稀釋曲線趨于平臺(tái)期，表明測(cè)序深度滿足分析需求（圖1）。

圖1 青貯苜蓿菌群稀釋曲線（A）和Shannon曲線（B）Fig.1 Rarefaction curves（A）and Shannon curves（B）of bacterial community in alfalfa silage

青貯苜蓿有氧暴露期間菌群多樣性指數(shù)見表2和圖2。青貯苜蓿有氧暴露期間，Shannon指數(shù)和Simpsom指數(shù)存在差異顯著性。在青貯末期，CON組和LCP組的Shannon指數(shù)和 Simpsom指數(shù)存在差異顯著性（P＜0.05）。有氧暴露7 d，CON組和LCP組的Shannon指數(shù)和 Simpsom指數(shù)存在差異顯著性（P＜0.05）。而相同CON組內(nèi)比較，青貯末期與有氧暴露14 d相比，Shannon指數(shù)和 Simpsom指數(shù)存在差異顯著性（P＜0.05）。

圖2 青貯苜蓿菌群Shannon指數(shù)和 Simpsom指數(shù)差異顯著性分析Fig. 2 Analysis on the difference between Shannon index and Simpson indexes of bacterial community in the silage alfalfa

2.2.2 青貯苜蓿菌群β多樣性分析 基于bray_curtis距離算法的NMDS分析顯示了青貯樣本的β多樣性，對(duì)于NMDS的結(jié)果，還使用了Adonis進(jìn)行了組間差異檢驗(yàn)，結(jié)果顯示組間差異顯著（R2= 0.741 1，P=0.001）。圖3中Stress是檢驗(yàn)NMDS分析結(jié)果的優(yōu)劣。通常認(rèn)為stress＜0.2時(shí)可用NMDS的二維點(diǎn)圖表示，其圖形有一定的解釋意義；當(dāng)stress＜0.1時(shí)，可以認(rèn)為是一個(gè)好的排序；當(dāng)stress＜ 0.05時(shí)，則具有很好的代表性。本實(shí)驗(yàn)的stress=0.071，說明樣品間存在著較好的排序。由結(jié)果可見，CON組和LCP組分別形成了距離較遠(yuǎn)的兩大群體。兩組樣本分別隨著有氧暴露時(shí)間的延長而在NMDS2軸上發(fā)生了變化（圖4）。說明青貯飼料菌群不僅受到接種菌的影響，也受有氧暴露的影響，但是接種菌處理的影響程度大于有氧暴露。

圖3 青貯苜蓿有氧暴露期間NMDS分析Fig. 3 NMDS analysis of the silage alfalfa during aerobic exposure

表 2 青貯苜蓿有氧暴露期間菌群多樣性指數(shù)Table 2 Alpha-diversity of bacterial community in the silage alfalfa during aerobic exposure

2.2.3 青貯苜蓿有氧暴露細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化

2.2.3.1 門水平上細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化 在門的水平上，厚壁菌門（Firmicutes）在各個(gè)階段均占優(yōu)勢(shì)，而變形菌門（Proteobacteria）CON組豐度較高（圖4）。在CON組中，有氧暴露0 d、7 d、14 d厚壁菌門的豐度分別為65.11%、77.48%、54.08%；變形菌門分別為34.54%、21.08%、45.15%。在LCP組中，厚壁菌門占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，有氧暴露0 d、7 d、14 d的豐度分別為97.43%、97.95%、74.76%。而變形菌門的豐度分別為1.06%、1.63%、24.42%。

圖4 門水平上青貯苜蓿細(xì)菌菌群組成Fig. 4 Composition of the silage alfalfa bacterial community at phylum level

2.2.3.2 屬水平上細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化 在屬的水平上（圖5），在CON中，乳桿菌屬（Lactobacillus）、腸桿菌屬（Enterobacter）及腸球菌屬（Enterococcus）是青貯飼料組主要的菌群種類。有氧暴露0 d、7 d、14 d乳桿菌屬的豐度，分別為25.31%、64.59%、44.50%；腸桿菌屬分別為32.46%、19.15%、6.58%；腸球菌屬分別為16.84%、8.11%、3.85%。其他菌屬豐度較低，如魏氏菌屬（Weissella）分別為5.01%、4.24%、1.59%；Cedecea分別為2.04%、1.78%、3.21%。此外，在有氧暴露14 d時(shí)，醋桿菌屬（Acetobacter）和Lyisibacillus的豐度分別為34.70%和3.78%。在LCP組中，乳桿菌屬占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)菌屬，在有氧暴露0 d、7 d、14 d的豐度分別為96.85%、96.68%、74.59%，表明在有氧暴露14 d后乳桿菌屬的豐度下降。此外，醋桿菌屬和Komagataeibcter有氧暴露14 d時(shí)出現(xiàn)，豐度為18.26%和5.58%（圖5）。青貯飼料在OTU水平上的組成及其所屬菌屬的構(gòu)成見表3。

圖5 屬水平上青貯苜蓿有氧暴露各階段菌群演替Fig. 5 Succession of bacterial community in the silage alfalfa at different stages of aerobic exposure at genus level

表3 青貯苜蓿有氧暴露各時(shí)段OTU組成Table 3 OTU composition of the silage alfalfa in different exposure time and treatments（＞1%）

2.2.3.3 種水平上青貯苜蓿細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化 在種水平上（圖6），CON組，有氧暴露0 d、7 d、14 d嗜酸乳桿菌（L. acidipiscis）的豐度分別是2.57%、34.21%、28.26%，未鑒定腸桿菌屬（unidentified_g_Enterobacter）豐度分別是32.37%、19.10%、6.58%。短乳桿菌（L. brevis）豐度分別是8.58%、10.60%、8.48%。Enterococcus mundtii豐 度 分 別 是13.08%、6.81%、3.17%。棒狀乳桿菌（L. coryniformis）分別 是2.98%、4.30%、1.65%。未 鑒 定 魏 氏 菌 屬（unidentified_g_Weissella）分 別 是5.01%、3.81%、1.58%。Garciella（7.82%）在暴露前存在，暴露后消失。最顯著的是，Acetobacter cereviseae在有氧暴露14 d時(shí)豐度為34.70%。LCP組有氧暴露后，干酪乳桿菌（L. casei）豐度先升高后降低，在有氧暴露0 d、7 d、14 d豐度分別是52.26%、65.12%、41.59%，布氏乳桿菌（L. buchneri）豐度逐漸升高，豐度分別是9.02%、17.79%、21.14%。L. reuteri豐度逐漸降低，豐度分別是26.24%、8.97%、3.81%。

圖6 種水平上青貯苜蓿有氧暴露各階段菌群組成Fig. 6 Composition of bacterial community in the silage alfalfa at different stages of aerobic exposure at species level

2.2.3.4 青貯苜蓿菌群差異物種分析 LEfSe 分析（Kruskal-Wallis H test，P＜ 0.05，LAD＞ 4.0）顯示了在組間豐度顯著差異的物種（圖7）。結(jié)果顯示，有2個(gè)門、4個(gè)綱、6個(gè)目、7個(gè)科、9個(gè)屬在組間豐度差異顯著。在CONPO0組中顯著富集的物種有梭菌綱（Clostridia）、γ-變形菌綱（Gammaproteobacteria）、梭菌目（Clostridiales）、腸桿菌目（Enterobacteriales）、毛螺旋菌科（Lachnospiraceae）、腸球菌科（Enterococcaceae）、明串珠菌科（Leuconostocaceae）、腸桿菌科（Enterobacteriaceae）、腸球菌屬（Enterococcus）、魏氏 菌屬（Weissella）、腸 桿菌屬（Enterobacter）。在CONPO14組中顯著富集的有芽胞桿菌目（Bacillales）、大洋芽胞桿菌屬（Oceanobacillus）、變形菌門（Proteobacteria）、西地西菌屬（Cedecea）、a-變形菌門（alphaproteobacteria）、醋桿菌目（Acetobacterales）、醋桿菌科（Acetobacteraceae）、醋桿菌屬（Acetobacter）、棒狀桿菌目（Corynebacteriales）、棒狀桿菌科（Corynebacteriaceae）、棒桿菌屬（Corynebacterium_1）。在LCPPO7中顯著富集的物種有桿菌綱（Bacilli）、乳桿菌目（Lactobacillales）、乳桿菌科（Lactobacillaceae）。LCPPO0中顯著富集的物種有乳桿菌屬（Lactobacillus）、食酸菌屬（Acidovorax）。

圖7 LEfSe分析青貯苜蓿組間豐度差異顯著的物種（LAD＞4.0）Fig. 7 LEfSe analysis of the bacteria taxon with significant difference between treatments（LAD＞4.0）

2.2.3.5 菌群與青貯特性（環(huán)境）因子關(guān)聯(lián)性分析環(huán)境因子熱圖（圖8）顯示，有氧暴露青貯苜蓿環(huán)境樣本細(xì)菌群落組成與青貯品質(zhì)環(huán)境因子之間的相關(guān)性。乳桿菌屬與pH呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與乳酸和乙酸未呈現(xiàn)相關(guān)性。腸桿菌屬、腸球菌屬、魏氏菌 屬、Cedecea、Sporolactobacillus與pH呈 正 相 關(guān)（P＜0.05）。醋桿菌屬與乳酸和乙酸負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

圖8 青貯細(xì)菌菌群與青貯品質(zhì)關(guān)聯(lián)性熱圖分析Fig. 8 Heatmap analysis of correlation between silage quality and bacterial community

3 討論

3.1 青貯品質(zhì)

本試驗(yàn)經(jīng)56 d的青貯，副干酪乳桿菌能夠提高高水分苜蓿青貯發(fā)酵品質(zhì)。Liu等［11］研究也顯示植物乳桿菌和布氏乳桿菌顯著降低高水分苜蓿青貯飼料的pH，提高了飼料乳酸產(chǎn)量。有氧暴露顯示了青貯飼料pH的顯著升高，Zhang等［12］對(duì)有氧暴露青貯苜蓿pH變化與本研究相似的趨勢(shì)，有氧暴露5 d后，未接種乳酸菌青貯苜蓿pH上升較大，而接種劑的pH僅有微量上升。說明干酪乳桿菌接種劑對(duì)維持青貯飼料有氧穩(wěn)定性有一定的積極作用。有氧暴露后，未接種的青貯苜蓿乳酸菌數(shù)量降低明顯，而酵母及霉菌的數(shù)量增加，這與Tao等［13］研究結(jié)果一致和關(guān)于高水分青貯苜蓿的研究結(jié)果一致［11］。

3.2 細(xì)菌菌群多樣性演替規(guī)律

近年來，青貯微生物菌群結(jié)構(gòu)經(jīng)歷了一個(gè)連續(xù)性的變化過程，可通過高通量二代和單分子三代測(cè)序（SMRT）來揭示青貯發(fā)酵微生物多樣性的演替規(guī)律［6，14］。本研究在有氧暴露7 d和 14 d的過程中，乳桿菌屬占有很大的優(yōu)勢(shì)。Li等［14］對(duì)青貯苜蓿進(jìn)行有氧暴露實(shí)驗(yàn)，使用變性梯度凝膠電泳方法研究其菌群變化，發(fā)現(xiàn)接種乳酸菌在有氧暴露7 d后乳桿菌屬的電泳條帶濃度依然明顯，這與本研究高通量測(cè)序結(jié)果較為相似。未接種青貯苜蓿乳桿菌屬豐度呈現(xiàn)了先上升后下降的趨勢(shì)，而接種副干酪乳桿菌青貯苜蓿乳桿菌屬在有氧暴露7 d仍然保持了穩(wěn)定，直到14 d才有所下降。而從菌種組成來說，未接種青貯有氧暴露維持了較多的菌種組成，主要由乳桿菌屬、腸桿菌屬、腸球菌屬組成；而接種處理菌群結(jié)構(gòu)單一，主要以乳桿菌屬為主，研究表明乳酸菌在青貯飼料中發(fā)揮著無可替代的作用［15-16］。但長時(shí)間有氧暴露（＞14 d），接種副干酪乳桿菌青貯苜蓿醋桿菌屬也大量繁殖。醋桿菌屬是一種醋酸菌，這種菌群也是青貯有氧腐敗的起始菌群之一，但通常在青貯玉米及禾本科牧草中發(fā)現(xiàn)［17］，本研究首次發(fā)現(xiàn)醋酸菌在有氧暴露的青貯苜蓿中大量存在。在氧氣暴露的青貯飼料中，醋酸菌可以將乙醇轉(zhuǎn)化為乙酸，造成乙酸產(chǎn)量的增加，但醋桿菌屬的種類可以進(jìn)一步將乙酸氧化成二氧化碳和水，又造成了乙酸含量的降低［18］。醋桿菌屬還能氧化乳酸成二氧化碳和水，造成乳酸含的降低，因此，醋桿菌屬大量存在必然會(huì)降低青貯飼料的品質(zhì)［19］。本研究關(guān)聯(lián)性分析顯示醋桿菌屬與乳酸和乙酸負(fù)相關(guān)，這表明醋桿菌屬在有氧暴露的青貯苜蓿中發(fā)揮了負(fù)面作用，醋桿菌屬將乳酸和乙酸氧化成二氧化碳和水，從而造成乳酸和乙酸的減少。

4 結(jié)論

本研究首次發(fā)現(xiàn)醋桿菌屬在有氧暴露的青貯苜蓿中大量存在，降低乳酸和乙酸的含量，惡化青貯飼料品質(zhì)。接種副干酪乳桿菌提高了有氧暴露青貯苜蓿乳桿菌屬的豐度，降低了長期（14 d）有氧暴露醋桿菌屬的豐度。因此，青貯苜蓿接種副干酪乳桿菌可提高短期有氧暴露青貯發(fā)酵品質(zhì)，提高其有氧穩(wěn)定性，減緩有氧變質(zhì)。