基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的蕓香科常用中藥飲片特征圖譜及含量測(cè)定研究

李國衛(wèi)，邱韻靜，索彩仙，童培珍，何嘉瑩，楊曉東，孫冬梅，胡綺萍

廣東一方制藥有限公司 廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，佛山 528244

中藥陳皮、青皮、枳殼、化橘紅、佛手均屬蕓香科柑橘屬植物，為臨床常用理氣類中藥。其中個(gè)青皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥幼果；四花青皮為蕓香科植物橘C.reticulataBlanco及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)的果皮；陳皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮；枳殼為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)；化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’或柚Citrusgrandis(L.) Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮；佛手為蕓香科植物佛手CitrusmedicaL.var.sarcodactylisSwingle的干燥果實(shí)[1]。該屬中藥具有理氣健脾、化痰等相似功效[2]，主要化學(xué)成分為橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷等黃酮類[3]。目前對(duì)于蕓香科常用中藥多集中在藥材含量測(cè)定或指紋圖譜研究[4-6]或單一單味標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量研究[7-9]。由于臨床多以湯劑、顆粒劑等形式服用，臨床制劑已經(jīng)失去原飲片所具有的顯微與性狀鑒別特征，即無法從藥材的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、氣、味等特征進(jìn)行檢查與鑒別，不利于臨床用藥質(zhì)量的控制。本研究以個(gè)青皮、四花青皮、陳皮、枳殼、化橘紅及佛手等蕓香科柑橘屬飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑為研究對(duì)象，建立多指標(biāo)含量測(cè)定和UPLC特征圖譜方法，研究其質(zhì)量的差異性，以期對(duì)標(biāo)準(zhǔn)湯劑和顆粒劑等制劑過程中的飲片、中間體、成品的質(zhì)量控制和化學(xué)成分的量值傳遞研究提供參考。

1 儀器與試藥

賽默飛Q Exactive Focus Orbitrap高分辨質(zhì)譜(美國賽默飛公司)；Waters H-Class型超高效液相色譜儀(美國沃特世公司)；Agilent SB C18(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)；ME204E型萬分之一分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；TRL-0.5真空冷凍干燥機(jī)(大連雙瑞科技有限公司)。甲醇為分析純，磷酸、乙腈為色譜純，水為超純水。

柚皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110722-201714，含量93.4%)、新橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：111857-201804，含量99.4%)、橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-201818，含量96.20%)，由中國食品藥品檢定研究院提供；蕓香柚皮苷對(duì)照品(批號(hào)：wkq19041908，含量98.0%)、水合橙皮內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)：wkq20031904，含量98.0%)、川陳皮素對(duì)照品(批號(hào)：wkq20031701，含量98.0%)、橘紅素對(duì)照品(批號(hào)：wkq16011401，含量98.6%)，由四川維克奇生物科技有限公司提供。實(shí)驗(yàn)所用藥材均經(jīng)廣東一方制藥有限公司質(zhì)量中心鑒定，樣品具體信息見表1。

表1 樣品詳情信息表Table 1 Information of samples

續(xù)表1(Continued Tab.1)

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備

取飲片100 g，加水煎煮兩次，第一次煎煮加入10倍量水，浸泡30 min，武火煮沸后改文火再煎煮30 min，用350目篩網(wǎng)趁熱過濾，濾液迅速冷卻；第二次煎煮加7倍量水，武火煮沸后改文火再煎煮25 min，用350目篩網(wǎng)趁熱過濾，濾液迅速冷卻；合并兩次濾液，減壓濃縮至150 mL流浸膏，分裝至西林瓶，真空冷凍干燥，即得。各品種出膏率見表2。

2.2 色譜條件

采用Agilent SB C18(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A，0.05%磷酸水為流動(dòng)相B，梯度洗脫：0～7 min，15%A→25%A；7～8 min，25%A→40%A；8～10 min，40%A→45%A；10～13 min，45%A→60%A；13～15 min，60%A→15%A。，流速為0.4 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長為320 nm；進(jìn)樣量2 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

除流動(dòng)相B為0.05%甲酸外，余下條件同“2.2”項(xiàng)。正離子模式(ESI+)，噴霧電壓為3.50 kV；毛細(xì)管溫度為300 ℃；全掃描模式為Full Scan；掃描范圍：100.0～1 500.0m/z。

2.4 對(duì)照品溶液制備

取蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內(nèi)酯、川陳皮素、橘皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度分別為62.70、57.68、51.28、56.01、57.77、55.17 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.5 供試品溶液制備

取本品粉末約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(250 W，40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。各供試品生藥濃度見表2。

表2 各品種出膏率與生藥濃度表Table 2 Rate of extract and crude drug concentration of different varieties

2.6 特征圖譜方法學(xué)研究

2.6.1 精密度

取同一批化橘紅(批號(hào)：H3)和枳殼(批號(hào)：ZQ7)，分別按“2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液和“2.2”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。分別以柚皮苷及橙皮苷為參照峰，計(jì)算各自共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積，結(jié)果各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2%，表明儀器精密度良好。

2.6.2 穩(wěn)定性

取同一批化橘紅(批號(hào)：H3)和枳殼(批號(hào)：ZQ7)，按“2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h 按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。分別以柚皮苷及橙皮苷為參照峰，計(jì)算共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積，結(jié)果各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.3 重復(fù)性

分別取同一批化橘紅(批號(hào)：H3)和枳殼(批號(hào)：ZQ7)樣品粉末6份，按“2.5”項(xiàng)下方法，平行制備6份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。分別以柚皮苷及橙皮苷為參照峰，計(jì)算共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積，結(jié)果各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 特征圖譜分析及評(píng)價(jià)

2.7.1 特征圖譜的建立及共有峰歸屬

采用國家藥典委員會(huì)“中藥色譜特征圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.0版本)”對(duì)蕓香科柑橘屬常用飲片的75批標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品UPLC特征圖譜進(jìn)行結(jié)果分析：個(gè)青皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑共確定8個(gè)共有峰(圖1)，四花青皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定8個(gè)共有峰(圖2)，陳皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定7個(gè)共有峰(圖3)，枳殼飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定10個(gè)共有峰(圖4)，化橘紅飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定6個(gè)共有峰(圖5)，佛手飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定5個(gè)共有峰(圖6)。除化橘紅飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑外，其余5個(gè)飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑均有4號(hào)峰(橙皮苷)，其分離度較好，為藥材中抗炎、抗氧化、抗菌、保護(hù)心血管系統(tǒng)的主要成分之一[8-9]，故以4號(hào)峰(橙皮苷)為參照峰(即為S峰)；化橘紅飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑則以2號(hào)峰(柚皮苷)為參照峰。通過對(duì)照品對(duì)照，共指認(rèn)7個(gè)特征峰，分別為1號(hào)峰蕓香柚皮苷、2號(hào)峰柚皮苷、4號(hào)峰橙皮苷、5號(hào)峰新橙皮苷、6號(hào)峰水合橙皮內(nèi)酯、16號(hào)峰川陳皮素、17號(hào)峰橘皮素(圖7)，蕓香科柑橘屬常用飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中含有色譜峰詳細(xì)信息如下(見表3)。

表3 蕓香科標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC色譜峰信息比較結(jié)果Table 3 Comparison of UPLC chromatographic peak information of standard decoction of Rutaceae

圖1 9批個(gè)青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.1 Common UPLC peak mode of 9 batches of Citri Reticulatae Pericarpium Viride standard decoction

圖2 15批四花青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.2 Common UPLC peak mode of 15 batches of Citri Reticulatae Pericarpium Viride standard decoction

圖3 9批陳皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.3 Common UPLC peak mode of 9 batches of Citri Reticulatae Pericarpium standard decoction

圖4 17批枳殼標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.4 Common UPLC peak mode of 17 batches of Aurantii Fructus standard decoction

圖5 12批化橘紅標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.5 Common UPLC peak mode of 12 batches of Citri Grandis Exocarpium standard decoction

圖6 13批佛手標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC共有峰模式Fig.6 Common UPLC peak mode of 13 batches of Citri Sarcodactylis Fructus standard decoction

圖7 蕓香科標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品共有峰對(duì)照品歸屬圖

2.7.2 特征峰質(zhì)譜指認(rèn)

采用高分辨質(zhì)譜采集6個(gè)樣品的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，通過Compound Discoverer 3.0軟件對(duì)所有特征峰進(jìn)行指認(rèn)，共指認(rèn)出其中的16個(gè)色譜峰，其中野漆樹苷、佛手酚、7-羥基香豆素、5,7-二甲基香豆素、異橙黃酮、異橙皮內(nèi)酯、甜橙黃酮、6-去甲氧基橘皮素、去甲基川陳皮為新確認(rèn)成分，結(jié)果見圖8、表4。

圖8 6種蕓香科標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)譜TIC圖Fig.8 TIC of Six standard decoction samples

表4 質(zhì)譜指認(rèn)結(jié)果表Table 4 LC-MS identification results

續(xù)表4(Continued Tab.4)

2.7.3 相似度評(píng)價(jià)結(jié)果

采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012.0版本)”分別對(duì)G1～G9、SH1～SH15、C1～C9、ZQ1～ZQ17、H1～H12、FS1～FS13共75批飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品UPLC特征圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分別以個(gè)青皮、四花青皮、陳皮、枳殼、化橘紅、佛手共有模式作為對(duì)照特征圖譜，計(jì)算相似度系數(shù)，9批個(gè)青皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度均在0.791～0.998之間，15批飲片四花青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度均在0.784～0.999之間，9批陳皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度均在0.996～0.999之間，17批枳殼飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度均在0.986～0.999之間，12批化橘紅飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度均在0.962～1.000以上，13批佛手飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度均在0.909～0.999以上，相似度結(jié)果說明蕓香科同一基原的柑橘屬藥材不同批次間的化學(xué)成分具有較好的一致性，結(jié)果見表5。

表5 蕓香科標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度評(píng)價(jià)結(jié)果Table 5 Results of similarity evaluation

續(xù)表5 (Continued Tab.5)

2.7.4 聚類分析

運(yùn)用SPSS 20.0軟件對(duì)75批飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品中18個(gè)共有峰的峰面積為數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)聚類，采用組內(nèi)平均聯(lián)接法，以余弦距離作為樣品相似度的距離公式，結(jié)果顯示75批飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑被分為4類，結(jié)果見圖9?；偌tH1～H12聚為一類，枳殼ZQ1～ZQ15聚為一類，佛手FS1～FS13聚為一類，個(gè)青皮G1～G9、四花青皮SH1～SH15及陳皮C1～C9聚為一類。結(jié)果顯示不同品種的枳殼、化橘紅、佛手能各單獨(dú)的聚為一類，而同一品種(橘)不同成熟期的個(gè)青皮、四花青皮、陳皮無法通過聚類分析進(jìn)行劃分，說明不同品種間飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品具有明顯差異，同一品種間不同成熟期飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品無明顯差異。

圖9 75批標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品聚類分析結(jié)果Fig.9 Cluster analysis results of 75 batches of standard decoction

2.7.5 主成分分析

將不同蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品的共有峰峰面積導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件進(jìn)行主成分分析。由主成分分析結(jié)果可知，前3個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率為84.48%，前3個(gè)成分載荷值分別為8.98、3.95、2.35，說明前3個(gè)主成分基本能反映標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品的主要特征(見表6、圖10)。以前3個(gè)主成分建立坐標(biāo)系，構(gòu)建樣品的主成分分析得分圖(見圖11)。由得分圖可知，化橘紅、佛手及枳殼各聚為一類，個(gè)青皮、四花青皮及陳皮聚為一類，結(jié)果與聚類分析一致。

圖10 主成分方差貢獻(xiàn)率Fig.1 Variance contribution rate of principal components

圖11 主成分分析得分Fig.11 Principal components analysis score

表6 主成分方差貢獻(xiàn)率Table 6 Variance contribution rate of principal components

2.7.6 偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)

為了進(jìn)一步比較同一品種(橘)不同成熟期(個(gè)青皮、四花青皮及陳皮)化學(xué)成分的差異和尋找三者之前的差異性化合物，將個(gè)青皮、四花青皮及陳皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的峰面積為變量進(jìn)行了OPLS-DA建模分析。OPLS-DA模型中，R2X為0.830，Q2為0.839，均大于0.5，說明建立的模型穩(wěn)定可靠。由OPLS-DA得分圖可知(見圖12)，個(gè)青皮、四花青皮及陳皮飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑明顯分為三類。通過變量重要性投影值(variable importance for the projection，VIP)篩選出三者間化學(xué)成分差異的主要標(biāo)志性成分(見圖13)。以VIP值大于1作為標(biāo)準(zhǔn)篩選，貢獻(xiàn)依次由大到小的4個(gè)變量為：峰4、峰5、峰1、峰7。通過對(duì)照品對(duì)照，指認(rèn)出3個(gè)成分，分別為峰4橙皮苷，峰5新橙皮苷，峰1蕓香柚皮苷。

圖12 不同成熟期橘OPLS-DA得分Fig.12 OPLS-DA score of different stages of C.reticulata

圖13 不同成熟期橘VIP值Fig.13 VIP value of different stages of C.reticulata

2.8 含量測(cè)定研究

基于上述特征圖譜分析結(jié)果，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)蕓香科柑橘屬常用飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量，對(duì)已歸屬的7個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行定量分析，以期區(qū)分不同蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑之間的差異。

2.8.1 精密度考察

取“2.4”項(xiàng)下混合對(duì)照品，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內(nèi)酯、川陳皮素、橘紅素7個(gè)成分峰面積RSD分別為0.52%、1.03%、1.04%、0.68%、0.44%、0.55%、0.33%，表明精密度良好。

2.8.2 穩(wěn)定性考察

取枳殼樣品(ZQ7)粉末約0.1 g，按“2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內(nèi)酯、川陳皮素、橘紅素7個(gè)成分峰面積RSD分別為1.58%、1.64%、1.43%、1.25%、1.63%、1.05%、1.66%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8.3 線性關(guān)系

取蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內(nèi)酯、川陳皮素、橘皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度分別為336.63、2 059.28、221.61、528.81、69.19、219.72、256.44 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，加甲醇稀釋成6個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表7。

表7 回歸方程及線性范圍Table 7 Regression equation and linear range

2.8.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取枳殼樣品(ZQ7)粉末約0.1 g，平行6份，按“2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下的的色譜條件測(cè)定，計(jì)算蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內(nèi)酯、川陳皮素、橘紅素7個(gè)成分含量RSD分別為1.58%、0.82%、0.66%、1.09%、1.32%、1.05%、1.66%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的枳殼樣品(ZQ7)粉末約0.05 g，精密稱定，平行6份，按1∶1加入對(duì)照品，按“2.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各成分的加樣回收率。測(cè)得蕓香柚皮苷平均回收率為103.83%，RSD為0.71%；柚皮苷平均回收率為101.72%，RSD為1.27%；橙皮苷平均回收率為103.98%，RSD為1.77%；新橙皮苷平均回收率為99.87%，RSD為2.55%；水合橙皮內(nèi)酯平均回收率為100.91%，RSD為3.22%；川陳皮素平均回收率為100.84%，RSD為1.30%；橘紅素平均回收率為102.94%，RSD為0.89%；結(jié)果表明7個(gè)成分回收率良好。結(jié)果見表8。

表8 加樣回收率考察結(jié)果Table 8 Accuracy inspection results

續(xù)表8(Continued Tab.8)

2.8.6 樣品測(cè)定結(jié)果

精密吸取對(duì)照品溶液和75批供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，含量結(jié)果見表9。結(jié)果顯示，不同蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品的7個(gè)成分含量差異明顯，RSD在38.97%～91.81%。通過多批次樣品測(cè)定可知，蕓香柚皮苷在個(gè)青皮和枳殼飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中能檢出，且兩者含量均值無明顯區(qū)別；柚皮苷在枳殼和化橘紅中能檢出，化橘紅含量均值高于枳殼；橙皮苷除化橘紅外其余飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑均能檢出，含量均值由大到小為：四花青皮>陳皮>個(gè)青皮>枳殼；新橙皮苷在個(gè)青皮、四花青皮及枳殼中均能檢出，含量均值由大到小為：枳殼>個(gè)青皮>四花青皮>枳殼；水合橙皮內(nèi)酯在枳殼和、化橘紅及佛手中檢出，含量均值由大到小為：枳殼>化橘紅>佛手；川陳皮素和橘紅素除化橘紅及佛手外，其余各飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑均能檢出，含量均值由大到小為：陳皮>四花青皮>個(gè)青皮>枳殼(見圖14)。

表9 含量測(cè)定結(jié)果Table 9 Content determination results(mg/g)

續(xù)表9(Continued Tab.9)

續(xù)表9(Continued Tab.9)

圖14 含量均值對(duì)比Fig.14 Comparison of the average content

3 討論與結(jié)論

中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)，經(jīng)過煎煮、固液分離、濃縮和冷凍干燥制備而成，為中藥質(zhì)量標(biāo)志物研究的關(guān)鍵物質(zhì)，是衡量中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的物質(zhì)基礎(chǔ)[10-13]。蕓香科柑橘屬飲片在臨床使用上各有側(cè)重，如青皮長于疏肝破氣，消積化滯，而成熟度更高的陳皮則善于理氣健脾，燥濕化痰，但兩者藥材的化學(xué)成分較為接近，因此，本研究基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑對(duì)對(duì)不同蕓香科柑橘屬飲片進(jìn)行分析，為臨床用藥提供參考依據(jù)。

本研究建立了蕓香科柑橘屬飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC特征圖譜及多指標(biāo)含量測(cè)定方法，并對(duì)不同來源的蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品進(jìn)行分析。特征圖譜分析結(jié)果顯示，不同來源蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品特征圖譜的色譜峰數(shù)目存在差異，可通過特征圖譜可直觀區(qū)分6種蕓香科柑橘屬。聚類分析及主成分分析顯示，化橘紅、枳殼、佛手可單獨(dú)的聚為一類，不同成熟期的橘(個(gè)青皮、四花青皮、陳皮)存在交叉交集的情況，不同種間差異較大，同種樣品間差異較小。為了進(jìn)一步區(qū)分不同成熟期的橘(個(gè)青皮、四花青皮、陳皮)間的差異，采用偏最小二乘法-判別分析進(jìn)行分析，能對(duì)三者進(jìn)行識(shí)別與聚類，并確認(rèn)了橙皮苷、新橙皮苷、蕓香柚皮苷和峰7是質(zhì)量差異的主要物質(zhì)，推測(cè)上述成分含量與成熟期可能存在關(guān)聯(lián)。

本研究在特征圖譜基礎(chǔ)上，對(duì)不同蕓香科柑橘屬標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品中7個(gè)主要指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示，不同樣品間的7個(gè)成分含量差異明顯，RSD在38.97%～91.81%?；偌t柚皮苷含量均值高于枳殼；橙皮苷除化橘紅外的樣品均能檢出，含量均值大小為：四花青皮>陳皮>個(gè)青皮>枳殼；新橙皮苷在個(gè)青皮、四花青皮及枳殼中能檢出，含量均值大小為：枳殼>個(gè)青皮>四花青皮；水合橙皮內(nèi)酯在枳殼、化橘紅及佛手中能檢出，含量均值大小為：枳殼>化橘紅>佛手；川陳皮素和橘紅素在除化橘紅及佛手外，其余樣品均能檢出，含量均值大小為：陳皮>四花青皮>個(gè)青皮>枳殼。含量測(cè)定結(jié)果與特征圖譜結(jié)果一致，不同品種間的樣品既存在成分上的差異，亦存在含量上的差異，可能是導(dǎo)致其臨床上功效各有側(cè)重的原因之一。

本研究建立的UPLC特征圖譜方法較全面地反映了蕓香科柑橘屬飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的化學(xué)成分，并同法測(cè)定了已歸屬的7個(gè)特征性成分，分析方法迅速簡(jiǎn)便，利用化學(xué)計(jì)量分析有效區(qū)分蕓香科柑橘屬常用飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，可為蕓香科柑橘屬飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑及其相關(guān)制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。