卵巢癌患者血清NDRG4、CD147的水平變化及其意義

周姝，王中芹，周延?xùn)|，黃愛華

泰州市人民醫(yī)院婦科，江蘇泰州225300

卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率占所有女性惡性腫瘤的2.5%，但病死率占5%［1］。由于卵巢組織結(jié)構(gòu)和內(nèi)分泌功能復(fù)雜，早期臨床癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，雖然手術(shù)、新輔助放化療、靶向治療技術(shù)不斷提高，但是療效有限，術(shù)后復(fù)發(fā)率較高［2］。因此，術(shù)前預(yù)測(cè)卵巢癌復(fù)發(fā)尤為重要，可優(yōu)化個(gè)性化治療，改善患者預(yù)后。抑癌基因N-myc下游調(diào)節(jié)因子4（NDRG4）是與細(xì)胞分化和腫瘤形成密切相關(guān)的基因家族成員［3］，參與細(xì)胞存活、腫瘤侵襲和血管生成，與腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［4］。CD147又稱細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，是一種多功能跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族的成員，可介導(dǎo)細(xì)胞間黏附，刺激成纖維細(xì)胞合成和基質(zhì)金屬蛋白酶類產(chǎn)生，降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移［5］。目前血清CD147、NDRG4與卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系尚不確定。因此，我們觀察了卵巢癌患者血清中CD147、NDRG4的水平變化，并探討了血清CD147、NDRG4與患者臨床病理特征、術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系及對(duì)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)效能，以期為臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2015年8月—2017年8月泰州市人民醫(yī)院婦科住院部收治的卵巢癌患者263例（卵巢癌組），年齡51～72（62.35±4.35）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：均行卵巢癌切除手術(shù)，經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)證實(shí)為卵巢癌；術(shù)前未接受任何形式的治療；臨床資料和病理結(jié)果完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤；發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；不具備手術(shù)指征；隨訪失聯(lián)。另選擇同期于本院婦產(chǎn)科門診體檢健康的217例女性為對(duì)照組，年齡50～71（61.91±4.47）歲，卵巢癌組和對(duì)照組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。本研究已經(jīng)獲得本院倫理會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均知情同意簽署同意書。

1.2 血清NDRG4、CD147檢測(cè)卵巢癌組術(shù)前采集肘靜脈血3 mL（對(duì)照組體檢當(dāng)日）。采用FLUO star Omega全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀（德國(guó)BMG LABTECH公司）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)CD147，試劑盒購(gòu)自艾美捷科技有限公司。采用羅氏Elec?sys2010全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)NDRG4，試劑盒購(gòu)自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司。

1.3 隨訪方法所有卵巢癌患者出院后采用電話或者門診復(fù)查等方式定期隨訪3年，統(tǒng)計(jì)復(fù)發(fā)例數(shù)；影像學(xué)和病理學(xué)檢查提示新發(fā)病灶或轉(zhuǎn)移灶者為復(fù)發(fā)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料先采用Kolmogorov-Smirnov法進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以±s表示，比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征曲線（ROC）分析血清NDRG4、CD147預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的效能。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組、對(duì)照組血清NDRG4、CD147水平比較卵巢癌組血清NDRG4、CD147水平分別為（81.03±26.35）、（6.98±2.33）ng/L，對(duì)照組分別為（169.41±82.08）、（3.02±1.47）ng/L；卵巢癌組血清NDRG4水平低于對(duì)照組（P＜0.01），CD147水平高于對(duì)照組（P＜0.01）。

2.2 血清NDRG4、CD147水平與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系與高度分化和FIGO分期Ⅰ期的卵巢癌患者比較，低中度分化、FIGO分期Ⅱ期卵巢癌患者血清NDRG4水平低、CD147水平高（P＜0.01），不同年齡和不同腫瘤直徑的卵巢癌患者血清NDRG4、CD147水平比較，P均＞0.05，見表1。

表1 不同臨床病理特征的卵巢癌患者血清NDRG4、CD147水平（ng/L，±s）

表1 不同臨床病理特征的卵巢癌患者血清NDRG4、CD147水平（ng/L，±s）

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2.3 血清NDRG4、CD147水平與卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系本次隨訪期間無失訪患者，隨訪期間復(fù)發(fā)110例。根據(jù)NDRG4、CD147水平均值將患者分為NDRG4高水平組（NDRG4≥81.03 ng/mL，129例）和NDRG4低水平組（NDRG4＜81.03 ng/mL，134例），CD147高 水 平 組（CD147≥6.98 ng/L，139例）和CD147低 水 平 組（CD147＜6.98 ng/L，124例）。NDRG4高 水 平 組 復(fù) 發(fā) 率 為36.43%（47/129），NDRG4低水平組復(fù)發(fā)率為47.01%（63/134），兩組比較，P＜0.05；CD147高水平組復(fù)發(fā)率為51.08%（71/139），CD147低水平組為31.45%（39/124），兩組比較，P＜0.05。

復(fù)發(fā)患者血清NDRG4、CD147水平分別為（70.51±8.32）、（7.95±0.73）ng/L，未復(fù)發(fā)患者血清NDRG4、CD147水平分別為（88.59±12.03）、（6.28±1.65）ng/L。復(fù)發(fā)患者血清NDRG4水平低于未復(fù)發(fā)患者，CD147水平高于未復(fù)發(fā)患者（P均＜0.01）。

2.4 血清NDRG4、CD147檢測(cè)預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的效能血清NDRG4、CD147水平最佳截?cái)嘀捣謩e為78.13、7.26 ng/L時(shí)，單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)曲線下面積（AUC）分別為0.732（95%CI：0.648～0.816，P＜0.01）、0.801（95%CI：0.739～0.863，P＜0.01）、0.930（95%CI：0.880～0.980，P＜0.01），靈敏度分別為71.43%、66.67%、90.48%，特異度分別為72.85%、74.66%、92.76%。血清NDRG4、CD147聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC大于單獨(dú)檢測(cè)（P均＜0.05）。見圖1。

圖1 血清NDRG4、CD147及二者聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC

3 討論

卵巢癌是婦科癌癥死亡的第二大最常見原因［6］，5年生存率為26%～42%［7］。復(fù)發(fā)是導(dǎo)致卵巢癌患者死亡的主要原因，盡管接受了手術(shù)治療和一線化療，但仍有70%～80%的上皮性卵巢癌患者會(huì)復(fù)發(fā)［8］。大部分卵巢癌晚期患者容易復(fù)發(fā)并產(chǎn)生化療耐藥性，復(fù)發(fā)卵巢癌患者較首發(fā)患者惡性程度高，且多伴隨著轉(zhuǎn)移［9-10］。

NDRG4是最后一個(gè)發(fā)現(xiàn)的人類N-myc下游調(diào)控基因成員，主要通過靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控細(xì)胞增殖和分化作用［11］。NDRG4在腫瘤的作用機(jī)制尚存有爭(zhēng)議，現(xiàn)有報(bào)道顯示NDRG4在食管腺癌中表達(dá)下調(diào)，其通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Cyclin D1、CDK4和CDK6，抑制腫瘤細(xì)胞增殖［12］。NDRG4在大腸癌中表達(dá)降低，其通過抑制PI3K-AKT活性發(fā)揮抑癌作用［13］。但NDRG4在侵襲性腦膜瘤中發(fā)揮致癌基因作用，沉默NDRG4可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，降低腦膜瘤細(xì)胞株的侵襲能力［14］。本研究結(jié)果表明，卵巢癌患者血清NDRG4水平降低，卵巢癌分化程度越低，F(xiàn)IGO分期越高，NDRG4水平越低，提示NDRG4可能在卵巢癌中發(fā)揮抑癌基因作用。李委佳等［15］通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NDRG4通過抑制Wnt/β-catenin細(xì)胞信號(hào)通路及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的表達(dá)，降低卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。劉巍等［16］通過轉(zhuǎn)染特異性小分子干擾RNA-NDRG4下調(diào)NDRG4表達(dá)，凋亡相關(guān)蛋白B淋巴細(xì)胞瘤-2（BCL-2）表達(dá)增高，Bax、p-P38/絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）表達(dá)降低，NDRG4表達(dá)下調(diào)可增加卵巢癌細(xì)胞增殖能力。本研究結(jié)果顯示，NDRG4低水平組患者復(fù)發(fā)率高于NDRG4高水平組，復(fù)發(fā)患者血清NDRG4水平低于無復(fù)發(fā)患者，說明NDRG4表達(dá)缺失與卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。馬歡等［17］也指出，高水平NDRG4卵巢癌患者具有較低的復(fù)發(fā)率。分析原因?yàn)镹DRG4表達(dá)缺失，其抑制癌細(xì)胞增殖和分化能力下降，導(dǎo)致癌細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，更容易發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)。

CD147是高度糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，可通過參與糖酵解代謝途徑促使癌細(xì)胞快速分裂增殖，誘導(dǎo)免疫逃逸［18］。CD147作為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑，通過誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解，在腫瘤侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用［19］。有報(bào)道顯示，CD147在膀胱癌中表達(dá)上調(diào)，CD147高表達(dá)可通過上調(diào)胃泌素D表達(dá)，促使癌細(xì)胞增殖和腫瘤擴(kuò)散［20］。高表達(dá)CD147通過上調(diào)脂肪形成基因脂肪酸合成酶和乙酰輔酶A羧化酶1促使新生血管和淋巴管形成，誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲，CD147表達(dá)下調(diào)則抑制宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲［21］。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者血清CD147水平明顯增高，卵巢癌分化程度越低，F(xiàn)IGO分期越高，CD147水平越高，提示CD147可能在卵巢癌中發(fā)揮致癌基因作用。CHU等［22］指出，CD147表達(dá)與胃癌患者的無病生存期和總體生存率有關(guān)，CD147陽性患者無病生存率和總體生存率較低，CD147是胃癌腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后不良的潛在指標(biāo)。CD147高水平組患者復(fù)發(fā)率高于CD147低水平組，復(fù)發(fā)患者血清CD147水平高于無復(fù)發(fā)患者，說明CD147過表達(dá)與術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)，考慮其機(jī)制為：CD147過表達(dá)可介導(dǎo)細(xì)胞黏附和基質(zhì)金屬蛋白酶2的表達(dá)，促使細(xì)胞外基質(zhì)降解和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促使癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致癌癥復(fù)發(fā)［23］；通過提高卵巢癌自噬活性，抑制自噬細(xì)胞凋亡，促使癌細(xì)胞增殖和惡性進(jìn)展［24-25］。本研究中ROC分析結(jié)果顯示，NDRG4、CD147預(yù)測(cè)卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC為0.732、0.801，提示NDRG4、CD147均可作為卵巢癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的生物學(xué)指標(biāo)，而聯(lián)合NDRG4和CD147明顯提高了復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)效能，提示臨床上可以聯(lián)合檢測(cè)血清NDRG4、CD147預(yù)測(cè)卵巢癌患者術(shù)后是否復(fù)發(fā)。

綜上，卵巢癌患者血清NDRG4水平降低，CD147水平升高，血清NDRG4、CD147水平與卵巢癌患者臨床病理特征、術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)，二者可作為卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)效能更好。卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)的因素有很多，本研究未排除其他因素進(jìn)行回歸分析，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。