不同鹽度對(duì)四指馬鲅幼魚存活及鰓組織形態(tài)變化的影響

?，撛? 羅志平 區(qū)又君 藍(lán)軍南 溫久福 李加兒 周慧

摘要：【目的】探究不同鹽度對(duì)四指馬鲅（Eleutheronema tetradactylum）幼魚存活與鰓組織結(jié)構(gòu)變化的影響，為四指馬鲅苗種生產(chǎn)提供有效的技術(shù)支持和理論參考。【方法】試驗(yàn)設(shè)0、5‰、10‰（對(duì)照）、15‰和20‰等5個(gè)鹽度組，將暫養(yǎng)于鹽度為10‰水體中的四指馬鲅幼魚直接放入其他鹽度水體中，試驗(yàn)第15 d時(shí)進(jìn)行活體鰓組織取樣，采用組織學(xué)方法對(duì)不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚的鰓組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究?！窘Y(jié)果】鹽度為0時(shí)，四指馬鲅幼魚在12 h之內(nèi)全部死亡，5‰鹽度組幼魚死亡率成為6.6%，10‰對(duì)照組幼魚無死亡，15‰和20‰鹽度組幼魚死亡率分別為33.3%和60.0%，表明與高鹽環(huán)境相比，四指馬鲅幼魚更能適應(yīng)低鹽環(huán)境，但不能在急性淡水脅迫條件下存活。顯微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果顯示，10‰鹽度條件下，四指馬鲅幼魚的鰓小片排列緊密，線粒體豐富細(xì)胞主要分布在鰓小片基部。隨著鹽度增加，鰓小片的長(zhǎng)度和間距減小，而鰓小片寬度增加。其中，5‰鹽度條件下鰓小片的長(zhǎng)度、寬度和間距分別為45.19±3.18 ?m、5.32±1.02 ?m和17.65±1.43 ?m，20‰鹽度條件下鰓小片的長(zhǎng)度、寬度和間距分別為36.67±3.81 ?m、8.78±2.22 ?m和11.56±3.81 ?m，差異均達(dá)顯著水平（P<0.05）。20‰鹽度條件下，鰓小片的遠(yuǎn)端可觀察到線粒體豐富細(xì)胞，扁平上皮細(xì)胞出現(xiàn)一定程度的脫落或分離現(xiàn)象。掃描電鏡觀察結(jié)果顯示，線粒體豐富細(xì)胞的頂膜結(jié)構(gòu)分為Ⅰ型（頂膜向內(nèi)凹陷）和Ⅱ型（頂膜向外凸起）2種類型。5‰鹽度條件下，線粒體豐富細(xì)胞出現(xiàn)2種類型，主要以Ⅱ型為主，頂膜開口較大，表面有大量微絨毛，扁平上皮細(xì)胞表面有隆起的微嵴，形成指紋樣回路;10‰鹽度條件下，出現(xiàn)Ⅰ型線粒體豐富細(xì)胞，扁平上皮細(xì)胞表面微嵴形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞間的界限不明顯;15‰和20‰鹽度條件下，均以Ⅰ型結(jié)構(gòu)為主，且隨著鹽度增加，頂膜加深，線粒體豐富細(xì)胞數(shù)量增多，扁平上皮細(xì)胞表面微嵴隆起幅度小，指紋樣的回路不明顯。【結(jié)論】當(dāng)水體滲透壓改變時(shí)，四指馬鲅幼魚存活率及鰓小片上細(xì)胞的數(shù)量分布和形態(tài)均發(fā)生顯著變化，鰓組織結(jié)構(gòu)的變化與其所處的環(huán)境鹽度條件有關(guān)。

關(guān)鍵詞： 四指馬鲅;鹽度;幼魚;死亡率;鰓;組織結(jié)構(gòu)

Abstract：【Objective】In order to explore the characteristics of the survival and gill histological structure of Eleutheronema tetradactylum juveniles cultured at different salinities，to provide effective technical support and theoretical reference for the production of E. tetradactylum. 【Method】Five salinity groups of 0，5‰，10‰ （control），15‰ and 20‰ were set up in the experiment. The juvenile E. tetradactylum temporarily raised in 10‰ salinity water was directly put into other salinity water bodies. The living gill tissue was sampled on the 15th day of the experiment. The histological structure of gill of E. tetradactylum juveniles under different salinities were observed by using the histological methods. 【Result】Under 0 salinity condition，E. tetradactylum juveniles all died within 12 h，at 5‰ salinity condition，the mortality rate was 6.6%，no death in the control group，the mortality rates of 15‰ and 20‰ salinity were 33.3% and 60.0% respectively. Compared with the high salt environment，E. tetradactylum juveniles was more adaptable to low-salt environment and could not survive in freshwater environment. The microstructure observation results showed that，at 10‰ salinity condition，the gill lamella of E. tetradactylum juveniles closely arranged closely，mitochondria-rich cells were distributed at the base of the gill patch. With the increase of salinity，the length and spacing of gill lamellae decreased，while the width of gill lamellae increased. At 5‰ salinity condition，the length，width and the intervals of gill lamella were 45.19±3.18 ?m，5.32±1.02 ?m and 17.65±1.43 ?m respectively. At 20‰ salinity condition，the length，width and the intervals of gill lamella were 36.67±3.81 ?m，8.78±2.22 ?m and 11.56±3.81 ?m respectively，the differences were all significant（P<0.05）. At 20‰ salinity condition，mitochondrial rich cells could be seen at the distal end of the gill patch and the pavement epithelial cells appeared to be detached or separated. The surface scanning of the gills showed the mitochondrial rich cells could be divided into two subtypes：subtype Ⅰ（embolic apical crypts） and subtype Ⅱ（shallow apical crypts）. Under 5‰ salinity condition，there were two types of mitochondria-rich cells. Most of which were type Ⅱ，the apical membrane had a large opening and there were a large number of microvilli on the surface. The surface of pavement epithelial cells was uplifted by the microridge，forming a fingerprint-like circuit. Under 10‰ salinity condition，mitochondria-rich cells showed typeⅠ structure，the microridge on the surface of pavement epithelial cells was irregular and the intercellular boundary distribution was not obvious. Under 15‰ and 20‰ salinity conditions，mitochondrial rich cells were dominated by type Ⅰ，with the change of salinity，the apical crypts gradually deepened，and the number of mitochondria-rich cells increased. The surface of the pavement epithelial cells had small ridges and the fingerprint-like circuit was not obvious. 【Conclusion】When the water osmotic pressure changes，the survival rate and the number distribution and morphology of the cells on the gills of juvenile E. tetradactylum，the histological structure of gill are affected by environment salinity.

Key words： Eleutheronema tetradactylum; salinity; juvenile fish; death rate; gills; histological structure

0 引言

【研究意義】四指馬鲅（Eleutheronema tetradactylum）俗稱馬友、牛筍或午魚等，隸屬于鯔形目（Mngiliformes）馬鲅科（Polynemidae）四指馬鲅屬（Eleutheronema）。四指馬鲅主要分布在印度洋至西太平洋，尤其在波斯灣至巴布亞新幾內(nèi)亞、澳大利亞北部和東亞（日本、中國和越南）沿海多有分布（Ballagh et al.，2012;Wang et al.，2014），因其肉質(zhì)鮮美、生長(zhǎng)迅速、抗病性強(qiáng)而受到廣大消費(fèi)者青睞，已發(fā)展成為近年來水產(chǎn)養(yǎng)殖的新品種（區(qū)又君等，2018）。水體鹽度是魚類生存的重要環(huán)境影響因子之一。魚類通過自身調(diào)節(jié)來維持體內(nèi)外滲透濃度的平衡，對(duì)水環(huán)境變化的適應(yīng)能力取決于其自身的滲透調(diào)節(jié)能力（于娜等，2012）。四指馬鲅適應(yīng)鹽度范圍廣，當(dāng)水體滲透壓發(fā)生改變時(shí)，機(jī)體自身會(huì)產(chǎn)生一系列應(yīng)激反應(yīng)以適應(yīng)環(huán)境變化，當(dāng)鹽度超出其耐受能力時(shí)會(huì)引起機(jī)體死亡，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)力下降。魚類的鰓組織不僅是主要的呼吸器官，還參與滲透壓調(diào)節(jié)、離子平衡及體液pH調(diào)節(jié)等，在鹽度適應(yīng)過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用（侯俊利等，2006;陳世喜等，2017;龔仕玲等，2019）。因此，加強(qiáng)四指馬鲅幼魚鰓組織對(duì)鹽度適應(yīng)性的研究，了解其組織結(jié)構(gòu)的變化機(jī)制，對(duì)促進(jìn)四指馬鲅養(yǎng)殖業(yè)的健康高效發(fā)展具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】近年來，國內(nèi)外從諸多方面對(duì)四指馬鲅進(jìn)行了研究，主要包括胚胎發(fā)育觀察（謝木嬌等，2016）、親魚初次性成熟和苗種規(guī)?；庇夹g(shù)（區(qū)又君等，2017）、DNA條形碼分析及SCAR分子標(biāo)記開發(fā)（楊翌聰?shù)龋?019）、光周期對(duì)其視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和視蛋白表達(dá)的影響（周慧等，2019）、群體遺傳及其多樣性（Ismail et al.，2019）、精巢發(fā)育及精子發(fā)生（藍(lán)軍南等，2020）及室內(nèi)循環(huán)水和池塘養(yǎng)殖體質(zhì)量與形態(tài)性狀的相關(guān)性（李俊偉等，2020）。關(guān)于四指馬鲅鰓組織的研究也有少許報(bào)道，羅海忠等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，水體鹽度高于等滲點(diǎn)時(shí)，隨著水體鹽度增加，四指馬鲅幼魚鰓絲Na+/K+-ATP酶活性也逐漸增加，表明四指馬鲅幼魚在高鹽度水體中需消耗較多的能量以維持滲透壓平衡;區(qū)又君等（2018）在研究急性低溫脅迫對(duì)鰓組織結(jié)構(gòu)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著低溫處理時(shí)間的延長(zhǎng)，線粒體豐富細(xì)胞數(shù)目增多，鰓小片末端輕微膨大至鰓小片整體水腫且嚴(yán)重彎曲，表明鰓細(xì)胞的損傷程度均隨水溫降低而增強(qiáng)。關(guān)于運(yùn)輸脅迫對(duì)鰓組織結(jié)構(gòu)的影響，劉奇奇等（2017）研究表明，未加入抗應(yīng)激劑的幼魚鰓小片腫脹，部分鰓小片脹破，線粒體豐富細(xì)胞體積變大且數(shù)量增多，表明運(yùn)輸脅迫破壞了四指馬鲅鰓的滲透壓調(diào)節(jié)功能。上述研究結(jié)果為本研究的順利開展提供了前期基礎(chǔ)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】對(duì)于水體鹽度變化，不同魚類均有其特定的適應(yīng)機(jī)制，在一定鹽度變化范圍內(nèi)魚類能正常生存，當(dāng)鹽度變化超過魚類的適應(yīng)能力，便會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激脅迫，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡（林先智等，2015a;施永海等，2015;王雯等，2016a）。此外，當(dāng)水體滲透壓發(fā)生改變時(shí)，魚類為適應(yīng)鹽度變化，其鰓組織結(jié)構(gòu)及鰓小片上細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)均發(fā)生顯著變化（區(qū)又君等，2013;劉娟娟等，2015）。目前，關(guān)于鹽度對(duì)四指馬鲅鰓組織形態(tài)變化影響的研究相對(duì)較少（羅海忠等，2015）?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過組織石蠟切片及掃描電鏡技術(shù)，觀察不同鹽度下四指馬鲅幼魚鰓組織適應(yīng)性的變化特征，為四指馬鲅苗種生產(chǎn)提供有效的技術(shù)支持和理論參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用四指馬鲅幼魚為本課題組在珠海試驗(yàn)基地培育獲得，平均全長(zhǎng)3.11±0.53 cm，平均體重0.224±0.014 g。試驗(yàn)開始前在室內(nèi)暫養(yǎng)7 d，暫養(yǎng)鹽度（10.0±0.5）‰，水溫（27±2）℃，期間每天換水1次，每次換水量1/3，24 h連續(xù)充氣增氧。暫養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)挑選體色正常、體格均勻健壯、活力強(qiáng)的個(gè)體共300尾魚進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)共設(shè)0、5‰、10‰（對(duì)照）、15‰和20‰等5個(gè)鹽度組，每個(gè)鹽度組設(shè)3個(gè)平行。以曝氣自來水或海水晶調(diào)節(jié)鹽度，將暫養(yǎng)于鹽度為10‰水體中的四指馬鲅幼魚直接放入鹽度為0、5‰、15‰和20‰的水體中，每個(gè)平行組20尾魚。試驗(yàn)期間水溫控制在26～28 ℃，連續(xù)24 h充氧，每天換水1次，每次換1/3，調(diào)節(jié)鹽度，誤差不超過0.5‰。每天9：00和17：00各投喂1次，喂食1 h后將殘餌及糞便用虹吸法吸出。試驗(yàn)時(shí)間持續(xù)15 d。

1. 2. 2 樣品采集與處理 在試驗(yàn)第15 d時(shí)，從各鹽度組中隨機(jī)選取3尾魚，活體取魚鰓組織，將鰓組織剪成小塊分別置于4%多聚甲醛溶液和電鏡固定液（Servicebio G1102）中固定備用。

鰓組織切片制作：將固定好的樣品以流水沖洗12 h，用50%～100%梯度的乙醇進(jìn)行脫水（50%乙醇2 h、70%乙醇4 h、80%乙醇2 h、85%乙醇2 h、95%乙醇45 min×2次、100%乙醇45 min×2次），用二甲苯進(jìn)行透明（1/2無水乙醇+1/2二甲苯的混合液1 h、二甲苯15 min×2次），浸蠟（石蠟2 h×2次），用石蠟進(jìn)行包埋，切片，采用蘇木精—伊紅（HE）進(jìn)行染色，中性樹脂封片。

掃描電鏡樣品制備：將固定好的樣品用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.4）漂洗3次（每次15 min）。1%鋨酸·0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.4）室溫（20 ℃）固定1～2 h。0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.4）漂洗3次，每次15 min。依次放入50%→70%→80%→90%→95%→100%→100%酒精進(jìn)行脫水，每次15 min。將樣本緊貼于導(dǎo)電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺(tái)上噴金30 s左右進(jìn)行樣本導(dǎo)電處理。將樣本放入臨界點(diǎn)干燥儀（QUORUM K850）內(nèi)進(jìn)行干燥。干燥完畢后在掃描電子顯微鏡（HITACHI SU8010）下觀察，采集圖像分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚的死亡率

將暫養(yǎng)于10‰鹽度條件下的四指馬鲅幼魚直接放入鹽度為0、5‰、15‰和20‰的水體中。5‰、15‰和20‰組幼魚剛開始集中于水底，靜止不動(dòng)，5 min后開始沿著水箱壁游動(dòng)，之后行為逐漸恢復(fù)正常。鹽度為0時(shí)，幼魚剛開始集群伏于水底，之后在水箱中無方向竄動(dòng)，出現(xiàn)狂游現(xiàn)象，且游動(dòng)時(shí)身體側(cè)翻，無法維持平衡，隨后幼魚的游泳速度逐漸變得緩慢，活動(dòng)減弱，對(duì)外界刺激的反應(yīng)減弱，12 h內(nèi)全部死亡。試驗(yàn)期間，0鹽度組幼魚死亡率為100.0%，5‰組幼魚死亡率為6.6%，對(duì)照組幼魚均無死亡，15‰和20‰組幼魚死亡率分別為33.3%和60.0%（表1）。

2. 2 不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚鰓組織顯微結(jié)構(gòu)的變化

圖1和表2分別為不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚鰓組織顯微結(jié)構(gòu)及鰓小片的變化。5‰鹽度條件下，鰓絲上的鰓小片為扁平囊狀，排列緊密，幾乎平行;與10‰對(duì)照組相比，鰓小片變窄變長(zhǎng)且間距增寬;鰓小片外側(cè)有扁平上皮細(xì)胞，呈長(zhǎng)條狀分布，鰓小片上的柱細(xì)胞呈X形或長(zhǎng)梭形;線粒體豐富細(xì)胞主要分布在鰓小片基部，呈橢圓狀，著色較淺，呈淡紅色且數(shù)量少（圖1-a）。10‰鹽度條件下，鰓絲發(fā)達(dá)，排列緊密;鰓小片平行緊密排列，鰓小片上細(xì)胞飽滿，細(xì)胞間無明顯間隙;鰓組織結(jié)構(gòu)無明顯變化，柱細(xì)胞主要為X形或圓柱形;線粒體豐富細(xì)胞的分布、結(jié)構(gòu)及數(shù)量變化均不明顯，主要位于鰓小片基部，體積較小，細(xì)胞飽滿，排列緊密，細(xì)胞核為藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)著色淺（圖1-b）。15‰鹽度條件下，鰓小片寬而短，且彼此的間隔較對(duì)照組窄，排列在鰓絲兩側(cè);鰓小片上皮增厚，扁平上皮細(xì)胞呈鱗片狀，與線粒體豐富細(xì)胞相鄰，扁平細(xì)胞體積變大，呈長(zhǎng)梭形，柱細(xì)胞為圓柱形;鰓小片基部的線粒體豐富細(xì)胞數(shù)量增加，但不明顯;鰓小片上出現(xiàn)一些線粒體豐富細(xì)胞，胞體變大，主要呈長(zhǎng)柱形或卵圓形，且著色深（圖1-c）。20‰鹽度條件下，鰓小片明顯縮短，且彼此間隔變窄，甚至出現(xiàn)萎縮，尖端略膨大;柱細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形和橢圓形;幼魚的鰓絲和鰓小片上線粒體豐富細(xì)胞數(shù)量顯著增加，細(xì)胞明顯增大，并逐漸向相鄰的鰓小片擴(kuò)散，兩鰓小片間幾乎全部被線粒體豐富細(xì)胞占據(jù);此外，與鰓小片基部與線粒體豐富細(xì)胞緊密相鄰的扁平上皮細(xì)胞呈三角形，并呈現(xiàn)出不同程度的脫落或分離現(xiàn)象（圖1-d）。

2. 3 不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚鰓組織微細(xì)的結(jié)構(gòu)變化

圖2為不同鹽度條件下四指馬鲅幼魚鰓細(xì)微結(jié)構(gòu)的變化。5‰鹽度條件下，扁平上皮細(xì)胞呈多邊形，排列緊密，表面密布微嵴，形成指紋狀回路（圖2-a）;鰓線粒體豐富細(xì)胞通過頂膜表面與外界環(huán)境相連，位于扁平上皮細(xì)胞邊緣;線粒體豐富細(xì)胞出現(xiàn)2種類型，即頂膜稍向外凸、開口較大且表面有大量微絨毛和頂膜向內(nèi)凹陷、開口較小且表面沒有微絨毛;根據(jù)其頂模結(jié)構(gòu)可將其分為Ⅰ型（頂膜向內(nèi)凹陷）（圖2-b）和Ⅱ型（頂膜向外凸起）（圖2-c），其中Ⅱ型線粒體豐富細(xì)胞數(shù)量較多。10‰鹽度條件下，扁平上皮細(xì)胞表面的環(huán)狀微嵴形態(tài)不規(guī)則，且細(xì)胞間的界限分布不明顯（圖2-d）;相鄰扁平上皮細(xì)胞間的開孔為線粒體豐富細(xì)胞的頂膜結(jié)構(gòu)，僅分布在鰓絲鰓小片的基部，鰓小片上未發(fā)現(xiàn)有線粒體豐富細(xì)胞分布，對(duì)照組鰓線粒體豐富細(xì)胞的頂膜開口以Ⅰ型為主（圖2-e）。15‰鹽度條件下，扁平上皮細(xì)胞表面環(huán)狀微嵴變少，邊緣微嵴隆起幅度小，指紋狀回路不明顯（圖2-f）;鰓線粒體豐富細(xì)胞的頂膜向內(nèi)深陷形成頂隱窩，開口較小，且其表面無微絨毛;此鹽度組僅出現(xiàn)線粒體豐富細(xì)胞Ⅰ型頂膜開口，未觀察到線粒體豐富細(xì)胞Ⅱ型頂膜開口（圖2-g）。20‰鹽度條件下，扁平上皮細(xì)胞排列密集，形態(tài)與15‰鹽度組相似，且其表面微嵴隆起幅度逐漸變小（圖2-h）;與15‰鹽度組相同，20‰鹽度組也未發(fā)現(xiàn)粒體豐富細(xì)胞頂膜Ⅱ型開口，而Ⅰ型鰓線粒體豐富細(xì)胞的頂隱窩較15‰鹽度組加深，數(shù)量增多（圖2-i）。

3 討論

3. 1 鹽度對(duì)四指馬鲅幼魚存活率的影響

廣鹽性魚類雖然對(duì)鹽度有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，但在面對(duì)鹽度脅迫時(shí)，仍需消耗大量能量以維持體內(nèi)的滲透壓平衡，鹽度變化一旦超過其耐受能力范圍，體內(nèi)滲透壓則無法恒定，最終導(dǎo)致組織器官受損及功能喪失，而影響其存活（林先智等，2015b;王雯等，2016a）。四指馬鲅為典型的廣鹽性魚類，本研究中將對(duì)照組10‰鹽度條件下的四指馬鲅幼魚直接放入不同鹽度環(huán)境中，試驗(yàn)開始階段因鹽度的急劇變化，造成各鹽度組幼魚不同程度的死亡，其中0鹽度組幼魚全部死亡，其余各組存活的試驗(yàn)魚通過調(diào)節(jié)自身滲透壓，逐漸適應(yīng)鹽度變化，進(jìn)而存活率趨于穩(wěn)定。結(jié)果顯示，5‰和10‰鹽度組四指馬鲅幼魚的存活率高于15‰和20‰鹽度組，表明與高鹽環(huán)境相比，四指馬鲅幼魚更能適應(yīng)低鹽環(huán)境，且不能在急性淡水脅迫條件下存活，與羅海忠等（2015）的研究結(jié)果一致。

3. 2 鹽度對(duì)四指馬鲅幼魚鰓組織結(jié)構(gòu)的影響

對(duì)大多數(shù)水生動(dòng)物來說，鰓組織不僅是主要的呼吸器官，還在維持機(jī)體內(nèi)外的滲透壓平衡中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。當(dāng)水體鹽度發(fā)生變化時(shí)，魚類的鰓組織結(jié)構(gòu)為適應(yīng)環(huán)境也會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化（楊建等，2014）。本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組10‰相比，生活在5‰低鹽度水體中的幼魚，其鰓小片變細(xì)變長(zhǎng)，向外延伸，且間距增寬，與水體的接觸面加大，通過攝取水環(huán)境中的無機(jī)離子以便于能在低滲環(huán)境中生存;15‰和20‰鹽度組的試驗(yàn)魚，其鰓小片變寬變短，間距變窄，鰓小片上有線粒體豐富細(xì)胞，線粒體豐富細(xì)胞通過主動(dòng)運(yùn)輸來加強(qiáng)水氧的交換量，使其能更好地適應(yīng)高鹽環(huán)境。扁平上皮細(xì)胞是鰓組織結(jié)構(gòu)的主要組成部分，主要以被動(dòng)運(yùn)輸方式參與鰓的生理功能，其表面的微脊能進(jìn)一步增加鰓組織與水體的接觸面，起增強(qiáng)氣體交換的作用（于娜等，2012;區(qū)又君等，2013）。本研究中，各鹽度組幼魚鰓小片遠(yuǎn)端的扁平上皮細(xì)胞變化差異相對(duì)較小，扁平上皮細(xì)胞主要呈鱗片狀，細(xì)胞核變長(zhǎng);而在鰓小片基部的扁平上皮細(xì)胞的形態(tài)變化差異相對(duì)明顯，隨著水體鹽度的增加，與線粒體豐富細(xì)胞相鄰的扁平上皮細(xì)胞體積變大，形似長(zhǎng)梭形或三角形，同時(shí)出現(xiàn)不同程度的脫落或分離現(xiàn)象（于娜等，2012;區(qū)又君等，2013）。這與前人對(duì)鯔（Mugil cephalus）及中華鱘（Acipenser sinensis）子二代幼魚的研究結(jié)果相似（于娜等，2012;劉娟娟等，2015），表明在不同鹽度脅迫條件下，四指馬鲅幼魚鰓組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了適應(yīng)性變化。

3. 3 鹽度對(duì)四指馬鲅幼魚線粒體豐富細(xì)胞的影響

魚類鰓組織的線粒體豐富細(xì)胞主要負(fù)責(zé)離子的攝取和分泌（Inokuchi and Kaneko，2012;Yada et al.，2012;Kang et al.，2013;Kokou et al.，2019）。線粒體豐富細(xì)胞不僅能在低滲環(huán)境中吸收Cl-進(jìn)行調(diào)節(jié)，還能在高滲環(huán)境中通過分泌Na+和Cl-完成自身調(diào)節(jié)（莊青青等，2012）。線粒體豐富細(xì)胞主要分布在鰓小葉的基部，其頂端小窩開口于鰓的表面，與外界環(huán)境直接接觸。線粒體豐富細(xì)胞在鰓上皮中所占比例雖然不高，但在進(jìn)行物質(zhì)交換的過程中發(fā)揮著主動(dòng)運(yùn)輸功能（于娜等，2012）。本研究結(jié)果顯示，四指馬鲅幼魚存在2種線粒體豐富細(xì)胞，根據(jù)頂膜結(jié)構(gòu)將其分為Ⅰ型（頂膜向內(nèi)凹陷）和Ⅱ型（頂膜向外凸起）;低鹽條件下的四指馬鲅幼魚，其鰓線粒體豐富細(xì)胞主要為Ⅱ型，細(xì)胞數(shù)量少，胞體小;高鹽條件下四指馬鲅幼魚Ⅰ型線粒體豐富細(xì)胞分布在鰓小片基部的數(shù)量增加，并逐漸向相鄰的鰓小片中間不斷擴(kuò)散。這與區(qū)又君等（2014）對(duì)遮目魚（Chanos chanos）、王雯等（2016b）對(duì)斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）的研究結(jié)果相似。區(qū)又君等（2013）在對(duì)卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）的研究中發(fā)現(xiàn)，低鹽條件下卵形鯧鲹鰓組織上的線粒體豐富細(xì)胞主要為Ⅱ型，無明顯的泌氯功能，且代謝水平低，其主要通過離子交換來吸收水體中的無機(jī)鹽及進(jìn)行自身pH調(diào)節(jié)以維持體內(nèi)外滲透壓平衡。隨著鹽度增加，鰓上線粒體豐富細(xì)胞呈現(xiàn)出Ⅰ型結(jié)構(gòu)，集中分布于鰓小片的基部，且向相鄰的鰓小片擴(kuò)散，其泌氯功能與代謝水平均較高，表明線粒豐富細(xì)胞在滲透壓調(diào)節(jié)上發(fā)揮著非常重要的作用。線粒體豐富細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的適應(yīng)性變化規(guī)律，是大多數(shù)廣鹽性魚類能適應(yīng)復(fù)雜多變的水體鹽度的主要原因之一。

4 結(jié)論

當(dāng)水體滲透壓改變時(shí)，四指馬鲅幼魚存活率及鰓小片上細(xì)胞的數(shù)量分布和形態(tài)均發(fā)生顯著變化，鰓組織的結(jié)構(gòu)變化特征與其所處的環(huán)境鹽度有關(guān)。

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（責(zé)任編輯 王 暉）