冠心病患者血漿微小核糖核酸表達(dá)與血小板活化水平及其相關(guān)性分析

賀俊波,劉峰（廣東省深圳市人民醫(yī)院（暨南大學(xué)第二附屬臨床醫(yī)學(xué)院）,廣東 深圳 518020）

微小核糖核酸是人體內(nèi)的小分子核糖核酸，有研究指出，部分微小核糖核酸在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化血管壁炎癥中發(fā)揮促進(jìn)作用，其中miR-34a、miR-96、miR-146a在冠心病患者病情加重評(píng)估中具有可靠性[1]。血小板激活是血管粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一，而冠心病發(fā)病也與血小板激活密切相關(guān)。臨床研究[2]表明血小板聚集率與血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白（CD62p）可作為血小板激活的主要監(jiān)測(cè)指標(biāo)，也能用于診斷和評(píng)估冠脈血管粥樣硬化。近年來(lái)，許多研究[3]證實(shí)血漿微小核糖核酸、血小板活化指標(biāo)是心血管疾病的檢測(cè)標(biāo)志物，但關(guān)于血小板活化和微小核糖核酸關(guān)聯(lián)性的相關(guān)研究報(bào)道較少。鑒于此，本研究回顧性分析96例冠心病患者臨床資料，探討冠心病患者血小板活化與血漿微小核糖核酸表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選擇我院2018年6月-2020年12月收治的96例冠心病患者作為研究對(duì)象，其中急性冠狀綜合征45例（ACS組），穩(wěn)定性心絞痛患者51例（SAP組）。同期選擇健康體檢者50例作為對(duì)照組。ACS組男25例，女20例；年齡58-81歲，平均（68.74±3.62）歲。SAP組男29例，女22例；年齡57-85歲，平均（68.67±7.34）歲。對(duì)照組男25例，女25例；年齡58-81歲，平均（68.74±3.62）歲。三組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 冠心病患者入院后每日清晨空腹服用阿司匹林腸溶片和氯吡格雷治療。分別于受檢者入院第1d給藥前和給藥第7d抽取空腹血液3ml，對(duì)照組全部在清晨空腹抽取血液樣本。待檢血液樣本共3份，其中1份置于乙二胺四乙酸二鈉抗凝管，測(cè)定血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白（CD62p）表達(dá)水平；剩余2份樣本采用3.2%枸櫞酸鈉真空抗凝管采集，檢測(cè)血漿微小核糖核酸、血小板聚集率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料與計(jì)量資料分別以百分比（%）、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，并分別行χ2、t檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析評(píng)價(jià)冠心病患者血漿微小核糖核酸與血小板活化指標(biāo)的相關(guān)性。以P＜0.05表示各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿微小核糖核酸水平的比較 治療前，兩組患者血漿微小核糖核酸表達(dá)水平均高于對(duì)照組，ACS組血漿微小核糖核酸表達(dá)水平均高于SAP組（P＜0.05）。治療后，兩組血漿微小核糖核酸表達(dá)水平低于治療前，但仍高于對(duì)照組，ACS組仍高于SAP組（P＜0.05）。見表1。

表1 各組血漿微小核糖核酸水平的比較（±s）

表1 各組血漿微小核糖核酸水平的比較（±s）

組別 例數(shù) miR-34a miR-96 miR-146a給藥前 給藥后 t P 給藥前 給藥后 t P 給藥前 給藥后 t P對(duì)照組 50 50.82±10.65 60.37±12.47 91.67±13.33 SAP組 51 93.55±12.63 78.32±8.12 5.07 ＜0.05 143.69±20.25 115.66±6.82 5.67 ＜0.05 164.57±16.28 135.66±5.82 12.62 ＜0.05 ACS組 45 153.88±18.32 102.36±5.87 13.39 ＜0.05 233.24±23.74 182.16±12.47 6.88 ＜0.05 281.45±23.74 192.16±15.36 15.79 ＜0.05 F 6.34 12.00 5.79 8.13 6.34 17.20 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 各組血小板活化指標(biāo)的比較 治療前，兩組患者血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平均高于對(duì)照組，ACS組血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平均高于SAP組（P＜0.05）。治療后，兩組各指標(biāo)水平低于治療前，但仍高于對(duì)照組，ACS組仍高于SAP組（P＜0.05）。見表2。

表2 各組血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平的比較（±s）

表2 各組血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平的比較（±s）

CD62p表達(dá)水平（%）給藥前 給藥后 t P 給藥前 給藥后 t P對(duì)照組 50 28.62±6.31 1.66±0.32 SAP組 51 52.55±3.84 43.65±3.10 5.98 ＜0.05 3.43±0.15 2.89±0.12 14.06 ＜0.05 ACS組 45 72.34±2.66 56.32±5.12 13.88 ＜0.05 5.77±0.33 4.62±0.24 14.09 ＜0.05 F 6.32 5.58 12.58 15.35 P＜0.05 ＜0.05＜0.05 ＜0.05組別 例數(shù) 血小板聚集率（%）

2.3 冠心病患者血漿微小核糖核酸與血小板活化的相關(guān)性分析 冠心病患者的miR-34a（r=0.914，P=0.007）、miR-146a（r=0.869，P=0.004）、miR-96（r=0.844，P=0.002）的表達(dá)量均與血小板聚集率呈正相關(guān)；miR-34a（r=0.913，P=0.006）、miR-146a（r=0.854，P=0.003）、miR-96（r=0.802，P=0.001）的相對(duì)表達(dá)量均與CD62p呈正相關(guān)。

3 討論

冠心病是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致心肌缺血缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死的一種綜合征，患者主要表現(xiàn)為心絞痛、胸悶等癥狀，還可引發(fā)腦血管疾病，嚴(yán)重危及生命。微小核糖核酸是一類堿基的單鏈非編碼小分子RNA，其在多種疾病發(fā)展或診治中具有重要作用，如預(yù)測(cè)急性冠狀動(dòng)脈綜合征心血管事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，或監(jiān)測(cè)冠心病病情進(jìn)展情況，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白編碼基因改善心血管病變[4]。隨著臨床深入研究，微小核糖核酸在心血管疾病生理或病理反應(yīng)中的參與作用不斷被揭示。血小板活化指標(biāo)在冠心病預(yù)測(cè)、診斷和病情監(jiān)測(cè)中的作用早已被臨床研究證實(shí)，但血小板活化與微小核糖核酸是否有關(guān)聯(lián)尚未可知。

CD62p主要依賴血小板，且存在于血小板顆粒中，當(dāng)血小板被激活時(shí)，α顆粒與血小板細(xì)胞膜融合，使CD62p表達(dá)水平迅速提升；血小板聚集率則是表達(dá)血小板聚集數(shù)。這均是血小板活化的重要檢測(cè)指標(biāo)[5]。本研究結(jié)果顯示，治療前，兩組患者血漿微小核糖核酸表達(dá)水平、血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平均高于對(duì)照組，ACS組血漿微小核糖核酸表達(dá)水平、血小板聚集率、CD62p表達(dá)水平均高于SAP組（P＜0.05）。治療后，兩組各指標(biāo)水平低于治療前，但仍高于對(duì)照組，ACS組仍高于SAP組（P＜0.05）。這提示血漿微小核糖核酸、血小板活化指標(biāo)表達(dá)水平與冠心病病情進(jìn)展情況密切相關(guān)，血漿微小核糖核酸可作為冠心病診斷和病情評(píng)估的標(biāo)記物。究其原因，在血小板激活或聚集過(guò)程中，大多數(shù)受粘附蛋白大量釋放，并參與血小板活化，而微小核糖核酸可作用于粘附蛋白的核糖核苷酸，使血小板聚集，并起到調(diào)節(jié)血小板活化的作用。有研究[6]指出，大量的miR-96存在于血小板內(nèi)，當(dāng)miR-96表達(dá)水平發(fā)生改變時(shí)，血小板活化也隨之作出相應(yīng)改變。miR-34a表達(dá)可以增強(qiáng)對(duì)巨核細(xì)胞分化負(fù)向調(diào)節(jié)基因的抑制作用，進(jìn)而增加巨核細(xì)胞集落數(shù)；miR-146a則負(fù)責(zé)誘導(dǎo)巨核細(xì)胞分化增殖，進(jìn)而促進(jìn)血小板形成和血小板功能增強(qiáng)[7]。因此，血小板活化與微小核糖核酸有密切聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，冠心病患者的miR-34a（r=0.914，P=0.007）、miR-146a（r=0.869，P=0.004）、miR-96（r=0.844，P=0.002）的表達(dá)量均與血小板聚集率呈正相關(guān)；miR-34a（r=0.913，P=0.006）、miR-146a（r=0.854，P=0.003）、miR-96（r=0.802，P=0.001）的相對(duì)表達(dá)量均與CD62p呈正相關(guān)。提示冠心病患者微小核糖核酸參與血小板活化反應(yīng)，其表達(dá)水平與血小板活化指標(biāo)水平的相關(guān)性呈正比，對(duì)冠心病發(fā)生與惡化具有促進(jìn)作用。究其原因，冠心病主要發(fā)病機(jī)制是血管粥樣硬化或血栓形成，微小核糖核酸參與血管疾病生成和發(fā)展，而血小板活化也是血管性疾病發(fā)生的主要因素之一，同時(shí)血小板活化、微小核糖核酸表達(dá)水平也促進(jìn)冠心病的進(jìn)展，故微小核糖核酸與血小板活化呈正比關(guān)系。

綜上所述，不同類型冠心病患者血小板活化指標(biāo)與血漿微小核糖核酸表達(dá)水平存在明顯差異，微小核糖核酸可參與血小板激活導(dǎo)致冠心病誘發(fā)或發(fā)展，二者在監(jiān)測(cè)冠心病發(fā)生發(fā)展中具有較好的警示作用。