廣東省養(yǎng)禽場腸球菌耐藥性及毒力因子流行分布特征

章 婧，蔡 萍，賀奕卓，陳偉濤，黃宇晨，蔣紅霞

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 國家獸醫(yī)微生物耐藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，廣東省獸藥研制與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642)

腸球菌(Enterococcus)為革蘭陽性菌，廣泛分布于自然環(huán)境(如土壤、水和植物)中，也是人和動(dòng)物胃腸道內(nèi)常見的共生菌[1]。由于其參與宿主多項(xiàng)生理功能，因此被認(rèn)為是對(duì)人類無害的共棲菌。但當(dāng)機(jī)體的免疫環(huán)境遭到抑制或破壞時(shí)，腸球菌則會(huì)引起感染，主要包括傷口、尿道、腹腔、血流和外科手術(shù)感染[2-3]。而腸球菌中的糞腸球菌和屎腸球菌是引發(fā)外科術(shù)后和尿道感染的主要因素，是導(dǎo)致菌血癥的第3大因素。目前腸球菌是院內(nèi)感染的重要病原菌。由于腸球菌具有固有耐藥特征，并且具有獲得耐藥性和毒力因子及形成生物被膜的能力和傾向[4-5]，因此給臨床治療帶來困難和挑戰(zhàn)。在2019年的關(guān)于我國臨床細(xì)菌耐藥檢測的調(diào)查中，屎腸球菌的分離率為53.7%(10 413/19 403)，糞腸球菌的分離率為39.6%(7 676/19 403)。在動(dòng)物源性腸球菌中，糞腸球菌和屎腸球菌同樣是分離率最高的兩種腸球菌。隨著抗生素在養(yǎng)殖業(yè)的大量、長期使用，尤其動(dòng)物養(yǎng)殖過程中抗生素作為促生長劑的應(yīng)用，導(dǎo)致動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性快速增長。而抗生素耐藥性可隨動(dòng)物腸道細(xì)菌傳播給人類的潛在風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)成為全球關(guān)注的食品安全和公共衛(wèi)生問題。腸球菌具有天然的將耐藥性及毒力因子以水平轉(zhuǎn)移方式傳播給其他細(xì)菌的能力，因此養(yǎng)殖場長期使用抗生素選擇出的耐藥腸球菌，可成為人類耐藥條件致病菌的儲(chǔ)庫。通常認(rèn)為腸球菌的致病能力比較復(fù)雜。有研究表明，腸球菌自身分泌的毒力因子與其致病力有關(guān)，毒力因子主要包括膠原蛋白黏附素(ace)、溶血素(cly)、心內(nèi)膜炎抗原(efaA)、表面蛋白(esp)、明膠酶E(gelE)、聚集物質(zhì)(asal)、透明質(zhì)酸(hyl)等[6-7]。

加強(qiáng)養(yǎng)殖場動(dòng)物腸道共生菌抗生素耐藥監(jiān)測對(duì)遏制耐藥菌/耐藥基因傳播具有重要意義。泛歐盟一項(xiàng)長期(2004—2014年)的食品動(dòng)物中抗生素敏感性監(jiān)測項(xiàng)目(EASSA)，監(jiān)測從屠宰的健康食品動(dòng)物(肉雞、屠宰豬和肉牛)中分離的人畜共患病原菌(沙門菌和彎曲桿菌)和共生菌(大腸桿菌和腸球菌)的抗生素敏感性表明，健康食品動(dòng)物中腸球菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)較低，對(duì)醫(yī)學(xué)臨床上至關(guān)重要的抗生素仍然敏感或者低水平耐藥[8]。食品動(dòng)物與人類有密不可分的聯(lián)系，耐藥細(xì)菌可通過人與動(dòng)物直接接觸或食物鏈完成耐藥基因從動(dòng)物到人類轉(zhuǎn)移，從而對(duì)公共衛(wèi)生產(chǎn)生威脅[9]。目前我國食品動(dòng)物源腸球菌抗生素耐藥性相關(guān)研究報(bào)道較少，尤其對(duì)醫(yī)學(xué)臨床重要抗生素的耐藥水平、傳播擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)尚不清楚。廣東地區(qū)是養(yǎng)殖大省，隨著該地養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，濫用抗生素的現(xiàn)象不斷出現(xiàn)，有關(guān)腸球菌耐藥菌株的報(bào)道也屢見不鮮，給養(yǎng)殖行業(yè)和公共衛(wèi)生帶來潛在風(fēng)險(xiǎn)。本研究采集了廣東省養(yǎng)殖場雞和鴨的腸道樣品，以分離率較高且具有重要公共衛(wèi)生意義的腸球菌(尤其屎腸球菌和糞腸球菌)為對(duì)象，分析其耐藥現(xiàn)狀、耐藥基因和毒力基因的流行分布，研究結(jié)果為動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)控提供數(shù)據(jù)，也為評(píng)估由此帶來的食品安全和公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株

2018年8—10月,從廣東省4個(gè)不同養(yǎng)禽場雞和鴨的腸道樣品中分離的125株腸球菌，質(zhì)控菌ATCC29212保存于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理教研室。

1.2 主要試劑和儀器

MH固體培養(yǎng)基、MH液體培養(yǎng)基、BHI固體培養(yǎng)基、BHI液體培養(yǎng)基、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷固體培養(yǎng)基均購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；2×Hieff-PCR Master Mix購自翌圣生物科技(上海)有限公司；微生物質(zhì)譜鑒定儀MALDI-TOF-MS(基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀)購自島津公司。

1.3 菌株的分離鑒定

2018年8—10月間，采集了廣東省4個(gè)不同養(yǎng)禽場雞和鴨的腸道糞便樣品493份，樣品置于冰盒，于24 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行腸球菌的分離和鑒定：腸道樣品在6.5% NaCl高鹽BHI肉湯中，37 ℃過夜增菌，劃線接種于疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂平板。37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，觀察其菌落形態(tài)及培養(yǎng)基顏色，在培養(yǎng)基上大小中等、表面光滑，且能使周圍培養(yǎng)基變黑的典型菌落，可初步判斷為腸球菌。采用PCR方法對(duì)菌株進(jìn)行分子鑒定：擴(kuò)增糞腸球菌、屎腸球菌特異性持家基因[10-11]。引物由北京擎科生物科技有限公司合成。采用微生物質(zhì)譜鑒定儀MALDI-TOF-MS(基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀)對(duì)PCR擴(kuò)增陽性的糞腸球菌和屎腸球菌進(jìn)行鑒定。

1.4 藥物敏感性試驗(yàn)

按照2018年美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(CLSI)推薦的抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)[12]，對(duì)分離出的糞腸球菌和屎腸球菌進(jìn)行氨芐西林、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、替加環(huán)素、萬古霉素、利奈唑胺、利福平、紅霉素、氯霉素、氟苯尼考等8大類12種藥物的MIC測定。同時(shí)由于腸球菌對(duì)氨基糖苷類藥物低水平固有耐藥，但氨基糖苷類藥物與青霉素、糖肽類合用對(duì)腸球菌有協(xié)同治療作用，在臨床治療上有應(yīng)用價(jià)值[13]。本研究也對(duì)分離株進(jìn)行了高水平氨基糖苷類藥物耐藥(high-level aminoglycoside resistant，HLAR)、高水平鏈霉素耐藥(high-level streptomycin resistant，HLSR)檢測?？股孛舾行越Y(jié)果依據(jù)CLSI的耐藥折點(diǎn)來判斷。

1.5 耐藥基因的檢測

采用PCR的方法檢測噁唑烷酮類(poxtA、optrA和cfr)、四環(huán)素類[tet(M)和tet(L)]氯霉素類(fexA、fexB和floR)、大環(huán)內(nèi)酯類(ermB)、喹諾酮類(qnrA、qnrB、qnrS)、糖肽類(vanA和vanB)等抗生素耐藥基因，引物設(shè)計(jì)與退火溫度參照文獻(xiàn)[14]。擴(kuò)增后的產(chǎn)物通過凝膠電泳進(jìn)行檢測，陽性產(chǎn)物送北京擎科生物科技有限公司測序，測序結(jié)果通過NCBI網(wǎng)站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行Blast分析。

1.6 毒力基因的檢測

本研究對(duì)攜帶重要抗生素耐藥基因poxtA、optrA、cfr的腸球菌株，依照相關(guān)參考文獻(xiàn)[15-16]，采用PCR的方法，對(duì)ace、cylA、cylB、cylM、efaA、esp、gelE、asal、hyl和agg等10種常見的毒力基因進(jìn)行篩查。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中0.05≤P≤0.01為差異顯著，P≤0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)菌的分離鑒定

從采集的493份腸道樣品中，共分離鑒定出125株腸球菌，其中糞腸球菌84株，66株來自雞腸道樣本，18株來自鴨腸道樣本；屎腸球菌41株，均來自雞腸道樣本。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

125株糞腸球菌、屎腸球菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有菌株對(duì)替加環(huán)素均敏感，對(duì)萬古霉素、氨芐西林也很敏感，而對(duì)四環(huán)素、多西環(huán)素和紅霉素幾乎全部耐藥；對(duì)氟苯尼考和氯霉素的耐藥率高達(dá)89.60%和74.40%。此外，對(duì)利奈唑胺、利福平、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星的耐藥率為25%～33%(表1)。

2.2.1 不同動(dòng)物來源耐藥性比較 如表1所示，分離自鴨的腸球菌的耐藥情況比雞腸球菌嚴(yán)重，鴨源分離株對(duì)氯霉素和氟苯尼考全耐藥。鴨源腸球菌對(duì)利奈唑胺的耐藥率也高達(dá)94%，顯著高于雞源分離株(P<0.01)；對(duì)左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、利福平的耐藥率也顯著高于(P<0.05)雞源分離株。從雞分離的1株糞腸球菌對(duì)萬古霉素耐藥(GA22)。兩種動(dòng)物來源的腸球菌幾乎均對(duì)四環(huán)素、多西環(huán)素、紅霉素耐藥。

表1 125株腸球菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率

2.2.2 不同亞型腸球菌耐藥性比較 屎腸球菌的耐藥率普遍高于糞腸球菌。屎腸球菌對(duì)AMP、LVX、CIP、HLGR、HLSR的耐藥率顯著高于糞腸球菌(P<0.05)。但糞腸球菌對(duì)利奈唑胺和利福平的耐藥率卻極顯著的高于(P<0.01)屎腸球菌。

2.2.3 不同來源、不同亞型腸球菌多重耐藥性比較 以對(duì)3種或3種以上的抗菌藥物種類出現(xiàn)耐藥的情況判斷為多重耐藥，絕大多數(shù)菌株(98.40%；123/125)呈現(xiàn)多重耐藥表型。來源于鴨的腸球菌的多重耐藥情況比雞的嚴(yán)重，鴨源腸球菌大多都表現(xiàn)為同時(shí)耐4種以上抗菌藥的多重耐藥表型，而且耐7～9種藥物的菌株明顯多于雞源腸球菌相比糞腸球菌，屎腸球菌多重耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重，尤其對(duì)4種以上藥物耐藥的菌株比例大于糞腸球菌(圖1)。

圖1 不同來源、不同亞型腸球菌多重耐藥統(tǒng)計(jì)

2.3 耐藥基因檢測結(jié)果

耐藥基因檢測結(jié)果顯示，tetL、fexA、ermB最流行，檢出率均高于90%。有92株腸球菌檢測出optrA耐藥基因，檢出率為73.60%。tetL的檢出率為96.00%，且其中46.67%的菌株同時(shí)攜帶有tetM基因。poxtA和fexB的檢出率均低于20%。floR、qnrA、qnrB、qnrS、vanA、vanB等基因均未檢出。大多數(shù)菌株同時(shí)攜帶多種耐藥基因。值得注意的是，有3株鴨源糞腸球菌(JDS2、JDS15、JDS18)中檢測出cfr基因。

比較不同動(dòng)物來源腸球菌中耐藥基因的流行分布發(fā)現(xiàn)(圖2)，來自鴨源腸球菌的耐藥基因更復(fù)雜，檢測到的8種耐藥基因的檢出率均高于雞源腸球菌，甚至有3株檢測出cfr(16.67%)。

*.0.01≤P≤0.05；**.P≤0.01，下同

比較各耐藥基因在不同亞型腸球菌之間的差異特點(diǎn)(圖3)，耐藥基因optrA的檢出率在兩種菌種之間的差異不明顯(P>0.05)；tetL、ermB、fexA在兩種菌種中的流行率均為最高，且都呈現(xiàn)出屎腸球菌中的檢出率高于糞腸球菌的特點(diǎn)；屎腸球菌中poxtA的檢出率明顯高于糞腸球菌；多重耐藥基因cfr僅在糞腸球菌中被檢測到。

圖3 不同亞型腸球菌菌株中耐藥基因檢出情況

2.4 毒力基因檢測結(jié)果分析

對(duì)92株optrA陽性菌株進(jìn)行毒力基因篩查，被檢的10種毒力基因中檢測出7種，其中efaA的檢出率最高，達(dá)到63.04%(58/92)；其他依次為gelE(54.35%，50/92)、aggA(50.00%,56/92)、ace(47.83%,44/92)、asa1(44.57%,41/92)、cylM(4.35%,4/92)。毒力基esp僅在1株鴨源糞腸球菌中檢出。檢測的腸球菌往往攜帶多種毒力基因，42.39%(39/92)菌株攜帶1～2種毒力基因，23.91%(22/92)的菌株攜帶3～4種毒力基因，有1株 鴨源糞腸球菌(JDS1)同時(shí)攜帶6種毒力基因(cylM、efaA、gelE、esp、ace、asal)。菌株攜帶的多個(gè)毒力基因以efaA-gelE-ace組合最為常見。未檢測到cylA、cylB、hyl3種毒力基因。

不同來源的腸球菌攜帶的毒力基因也有差異。由圖4可以看出，毒力基因ace在鴨源分離株中的檢出率(88.89%)明顯高于雞源分離株(37.84%)(P<0.01)。雞源分離株的gelE的檢出率(59.46%)顯著高于鴨源(33.33%)(P<0.05)。鴨源分離株中檢測到的毒力基因的種類也多于雞源。鴨源中以5種的毒力基因組合最多，雞源中攜帶4種毒力基因的較多。同種基因，不同亞型腸球菌，攜帶的毒力基因也存在差異。糞腸球菌的毒力基因檢出率除cylM外，其余均高于屎腸球菌，且efaA、gelE、ace、asal的檢出率顯著高于屎腸球菌(圖5)。糞腸球菌攜帶毒力基因的種類多于屎腸球菌，糞腸球菌攜帶3～4種毒力基因的最常見，而屎腸球菌中只攜帶1種毒力基因的最普遍，糞腸球菌中攜帶至少1種毒力基因的菌株數(shù)明顯高于屎腸球菌。

同種基因，如兩組之間標(biāo)記字母相同，說明兩組之間不存在差異；兩組之間標(biāo)記字母不同，則說明兩組之間存在差異

圖5 不同亞型腸球菌菌株中毒力基因檢出情況

比較抗菌藥物敏感性和毒力基因之間的關(guān)系，攜帶毒力基因數(shù)≤3種的腸球菌對(duì)CIP及HLAR的耐藥率高于攜帶毒力基因數(shù)≥4種的腸球菌見表2。對(duì)CIP及HLAR耐藥的菌株大多數(shù)攜帶aggA、ace或asal。對(duì)萬古霉素耐藥的菌株(GA22)僅檢出1種毒力基因(gelE)，3株攜帶cfr基因的分離株(JDS2、JDS15、JDS18)，有1株不攜帶毒力基因，其他兩株分別攜帶ace-asal、aggA-ace-asal毒力基因。

表2 攜帶不同毒力基因數(shù)目的腸球菌對(duì)抗菌藥物耐藥率

3 討 論

由于臨床和畜牧養(yǎng)殖過程中大量使用抗菌藥物，使耐藥菌和耐藥基因普遍存在于人、動(dòng)物及整個(gè)生態(tài)環(huán)境微生物中?；凇皁ne health”理念下，人、動(dòng)物和環(huán)境形成緊密關(guān)聯(lián)的整體，耐藥細(xì)菌及耐藥基因能在這個(gè)整體環(huán)境中不斷轉(zhuǎn)移、進(jìn)化和傳播。

本研究結(jié)果顯示，從養(yǎng)禽場分離的腸球菌的耐藥水平較高。幾乎所有菌株對(duì)四環(huán)素、紅霉素耐藥，均高于侯書寶等[17]、Barlow等[18]報(bào)道的耐藥率。本研究中廣東養(yǎng)禽場糞腸球菌的HLAR和HLSR為38.1%和61.9%，而屎腸球菌高達(dá)85.3%和82.9%，高于醫(yī)院臨床株[19]，也比其他國家食品源腸球菌耐藥率高[20-21]。出現(xiàn)這些差異的原因可能是因?yàn)椴煌貐^(qū)的用藥水平不同，在廣東養(yǎng)殖場中經(jīng)常使用該類藥物，導(dǎo)致細(xì)菌選擇壓力增大，因此耐藥率較高。而本研究鴨源分離株耐藥水平高于雞源，這可能是因?yàn)椴煌瑒?dòng)物的養(yǎng)殖環(huán)境、用藥習(xí)慣不同，鴨的飼養(yǎng)環(huán)境更為復(fù)雜、用藥相對(duì)較多導(dǎo)致的。與醫(yī)院臨床分離的腸球菌結(jié)果相似[19]，本研究從養(yǎng)禽場分離的屎腸球菌的耐藥率和耐藥水平均高于糞腸球菌，而且還從雞糞便中分離到1株耐萬古霉素的糞腸球菌。雖然目前糞腸球菌的分離率高于屎腸球菌，但由于屎腸球菌天然更容易獲得耐藥基因、表現(xiàn)出高水平耐藥等特點(diǎn)，其分離率逐漸增高[22-23]，這也與本試驗(yàn)結(jié)果一致。動(dòng)物養(yǎng)殖過程中不合理使用抗菌藥物，導(dǎo)致動(dòng)物源和環(huán)境細(xì)菌耐藥性日趨嚴(yán)重。腸球菌“作為抗生素耐藥基因儲(chǔ)庫”可以將耐藥基因轉(zhuǎn)移至其他腸球菌和其他革蘭陽性細(xì)菌。而食源性耐藥腸球菌可能在消費(fèi)者的腸道中定殖并將耐藥基因轉(zhuǎn)移到腸道微生物群中。因此加強(qiáng)雞場腸球菌耐藥性監(jiān)測對(duì)控制耐藥性傳播、保障公共衛(wèi)生和人類健康具有重要意義。

萬古霉素用于治療對(duì)青霉素和高水平氨基糖苷類耐藥的腸球菌所引起的感染，曾被稱為“抗感染的最后一道防線”[24]。目前利奈唑胺是臨床多重耐藥革蘭陽性菌，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MASA)及耐萬古霉素腸球菌(VRE)感染的有效治療藥物[25]。耐利奈唑胺腸球菌(LRE)和VRE是目前最受人們關(guān)注的兩類耐藥腸球菌。利奈唑胺的獲得性耐藥機(jī)制主要由cfr和optrtA、poxtA這幾種基因介導(dǎo)。本研究中，73.60%(92/125)的菌株分離到optrA基因，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于先前報(bào)道中的檢出率[26-27]，而且鴨源糞腸球菌對(duì)利奈唑胺耐藥率遠(yuǎn)高于雞源糞腸球菌。與之前研究報(bào)道相似[27-28]，腸球菌菌株攜帶optrA基因，但對(duì)利奈唑胺仍然敏感。目前poxtA基因主要分離自動(dòng)物源細(xì)菌。本研究中17.6%(22/125)菌株檢測到poxtA，而且屎腸球菌的分離率(42.5%)明顯高于糞腸球菌(4.6%)，也高于Lei等[29]2017年分離自食品動(dòng)物源的檢出率。LEADER(The Linezolid Experience and Accurate Determination of Resistance)項(xiàng)目表明，對(duì)從2004—2011年醫(yī)院病人中分離的革蘭陽性菌，cfr陽性檢出率不足0.03%[30]。但是，我國從養(yǎng)殖場豬分離的葡萄球菌和腸球菌的檢出率達(dá)到5%[31-32]。本研究從鴨分離的腸球菌中也檢出3株cfr陽性菌株(2.4%；3/125)。畜禽專用藥物氟苯尼考被證明與在動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)耐利奈唑胺腸球菌，有著密切的關(guān)系[27,33]，本研究中與利奈唑胺耐藥相關(guān)的耐藥基因檢出率較高的原因，可能與飼養(yǎng)過程中氟苯尼考的使用情況有關(guān)。因此，在本地區(qū)飼養(yǎng)過程選擇用藥時(shí)，應(yīng)謹(jǐn)慎選擇。

腸球菌致病是由多種毒力基因和多重耐藥性協(xié)同作用的結(jié)果[16]。2019年，朱宏等[34]對(duì)尿路感染腸球菌進(jìn)行毒力基因的篩查后發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌中的毒力基因攜帶量要顯著高于屎腸球菌，這與本研究結(jié)果一致。毒力基因esp在腸球菌尿道感染中它能使腸球菌定植在宿主細(xì)胞上，并且延長腸球菌細(xì)菌在膀胱內(nèi)停留的時(shí)間。有研究認(rèn)為esp基因更能在臨床分離屎腸球菌中檢測到，在非臨床株以及動(dòng)物分離株中并未檢測到esp基因[35]，這也與本試驗(yàn)結(jié)果相符。由gelE基因編碼的明膠酶是一種含鋅的蛋白酶，可以引起細(xì)菌感染并在組織和器官間擴(kuò)散，參與感染和炎癥的進(jìn)程[7]。efaA基因編碼一種脂蛋白，在一定條件下幫助腸球菌黏附在宿主非寄居器官，從而導(dǎo)致宿主的感染；Low等[36]研究證明，efaA是糞腸球菌感染性心內(nèi)膜炎的優(yōu)勢抗原之一。ace(膠原蛋白黏附素)是腸球菌表面的黏附素，在宿主細(xì)胞受損傷時(shí)，黏附蛋白暴露出來后，會(huì)促進(jìn)細(xì)菌黏附到宿主細(xì)胞上，有研究證明攜帶ace基因的腸球菌黏附能力更強(qiáng)，有更強(qiáng)形成生物膜的能力[37]。本研究腸球菌中毒力基因普遍存在，不同動(dòng)物攜帶的毒力基因種類存在差異。禽源腸球菌攜帶的毒力基因主要是efaA、gelE、ace，與豬源腸球菌毒力基因檢測結(jié)果[6-7]相似，而且鴨源分離株攜帶的毒力基因的檢出率大多高于雞源菌株。此外，本研究發(fā)現(xiàn)在對(duì)環(huán)丙沙星、高濃度氨基糖苷類耐藥的菌株及攜帶cfr基因的菌株中，大多攜帶了aggA、asal、ace或gelE基因，推測這幾個(gè)基因與耐藥菌的致病力有關(guān)。而在此前祝進(jìn)[38]、黃雯奕等[7]的研究中，腸球菌對(duì)環(huán)丙沙星、紅霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、青霉素和氟苯尼考等的耐藥率與毒力基因數(shù)無相關(guān)聯(lián)。因此，腸球菌的耐藥性與攜帶的毒力基因之間的關(guān)系仍需進(jìn)一步研究確定。

4 結(jié) 論

廣東地區(qū)禽類養(yǎng)殖場中屎腸球菌耐藥率較糞腸球菌嚴(yán)重，而糞腸球菌對(duì)環(huán)丙沙星和利奈唑胺的耐藥率高于屎腸球菌。鴨源糞腸球菌對(duì)利奈唑胺耐藥率顯著高于雞源。腸球菌中檢測出對(duì)人醫(yī)臨床重要抗生素耐藥基因optrA、poxtA、cfr。對(duì)環(huán)丙沙星及高濃度氨基糖苷類耐藥的菌株，及攜帶cfr基因的菌株，大多攜帶agg、asal、gelE或ace。養(yǎng)殖場用藥可能篩選出利奈唑胺耐藥腸球菌，這些腸球菌可能在人、動(dòng)物甚至是環(huán)境之間進(jìn)行相互傳播，導(dǎo)致optrA、poxtA、cfr等進(jìn)一步擴(kuò)散，對(duì)公共衛(wèi)生帶來潛在危險(xiǎn)，因此需要加強(qiáng)養(yǎng)禽場，尤其養(yǎng)鴨場腸球菌耐藥性監(jiān)測。