毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定復(fù)方鮮竹瀝液中α-松油醇的含量

吳旻昱，鄔秋萍，付志文，付輝政，周志強(qiáng)，肖小武

1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心,國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330029；2.江西康恩貝中藥股份有限公司，江西 上饒 334400

復(fù)方鮮竹瀝液由鮮竹瀝、魚(yú)腥草、枇杷葉、桔梗、生半夏、生姜、薄荷素油七味中藥組成，方中為君藥的鮮竹瀝具有性寒滑利，清肺降火，化痰止咳等功效，魚(yú)腥草和枇杷葉均具有清熱降氣，化痰止咳等功效，二者共為臣藥［1］。魚(yú)腥草為三白草科植物載菜Houttuynia cordataThunb.的新鮮全草或干燥地上部分，均具有止咳化痰、清肺止咳等功效［2］?，F(xiàn)行的復(fù)方鮮竹瀝液處方制法規(guī)定要求魚(yú)腥草為蒸餾液入藥［3］，而魚(yú)腥草蒸餾液主要含α-松油醇，甲基正壬酮等魚(yú)腥草揮發(fā)性特征成分，現(xiàn)代研究表明α-松油醇，甲基正壬酮等為魚(yú)腥草的功效成分［4-6］。現(xiàn)行復(fù)方鮮竹瀝液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只是采用對(duì)照藥材水煎處理法對(duì)魚(yú)腥草進(jìn)行了薄層色譜的定性控制［3］，此方法未能對(duì)魚(yú)腥草蒸餾液的揮發(fā)性成分進(jìn)行有效的控制。但《中國(guó)藥典》2020 版一部［3］收錄的以蒸餾液入藥的“魚(yú)腥草滴眼液”，《中國(guó)獸藥典》2015 年版［7］收錄的“魚(yú)腥草注射液”也以α-松油醇、甲基正壬酮、4-萜品醇和乙酸龍腦酯進(jìn)行定量控制?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，而相關(guān)質(zhì)量控制研究文獻(xiàn)也較少［8-12］。故本研究參照相關(guān)研究［13］采用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定復(fù)方鮮竹瀝液中α-松油醇的含量，以期為復(fù)方鮮竹瀝液質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試劑

8890 型氣相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司），配置氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、7693 型液體自動(dòng)進(jìn)樣器，Openlab 色譜工作站，BT25S 型十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士賽多利斯公司）。α-松油醇（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111859-201804），甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。復(fù)方鮮竹瀝液樣品共計(jì)18 批次，共涉及6個(gè)生產(chǎn)企業(yè)，均來(lái)自國(guó)家藥品評(píng)價(jià)性抽檢市場(chǎng)抽樣。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品貯備液的制備

取α-松油醇對(duì)照品適量，精密稱定，用乙酸乙酯∶無(wú)水乙醇（8∶2）制成質(zhì)量濃度約為0.7 mg/mL 的對(duì)照貯備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取鮮竹瀝40 mL,通過(guò)C18 固相萃取小柱（600 mg∶6 mL，使用前用12 mL 的甲醇活化，活化后用50 mL 水沖洗干凈），用乙酸乙酯∶無(wú)水乙醇（8∶2）的混合溶液洗脫，收集洗脫液約2 mL，置5 mL 量瓶中，加上述混合溶液至刻度，搖勻，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：DB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）,以N2為載氣，柱流速：3.5 mL/min,進(jìn)樣1 μL，分流比10∶1；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；程序升溫：初始溫度65 ℃，保留0.5 min，3 ℃/min 升至120 ℃保留0.5 min，10 ℃/min 升至210 ℃；280 ℃后運(yùn)行5 min，F(xiàn)ID 檢測(cè)器溫度300 ℃。結(jié)果色譜圖中其他成分對(duì)α-松油醇色譜峰無(wú)干擾，分離度良好，對(duì)照品和供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品和供試品溶液的色譜圖：A.對(duì)照品；B.供試品

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液，依次用乙酸乙酯∶無(wú)水乙醇（8∶2）的混合溶液稀釋成5 個(gè)所需的質(zhì)量濃度，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，α-松油醇的回歸方程為Y=2.341 6X+3.102 7，R2=0.999 8，α-松油醇在7.524 0～752.400 0 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)目下的對(duì)照品貯備液，用乙酸乙酯∶無(wú)水乙醇（8∶2）的混合溶液稀釋5 倍，按“2.3”項(xiàng)條件下連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積。結(jié)果α-松油醇峰面積的RSD（n=6）為0.87%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取A 公司復(fù)方鮮竹瀝（批號(hào)：1909013），按“2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6 份，在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果表明α-松油醇平均含量為14.05 μg/mL、RSD（n=6）為1.62%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取A 公司復(fù)方鮮竹瀝液（批號(hào)：1909013），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述“2.3”條件下分別于0、6、12、18、24 h 進(jìn)行分析測(cè)定峰面積，結(jié)果α-松油醇的峰面積的RSD（n=5）為0.71%，表明α-松油醇在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取A 公司復(fù)方鮮竹瀝液（批號(hào)：1909013）6 份，每份20 mL，分別精密加入相對(duì)應(yīng)量α-松油醇對(duì)照品溶液（0.150 48 mg/mL）20 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液，在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明樣品按本標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，回收率良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.9 樣品的測(cè)定

取6 家生產(chǎn)企業(yè)18 批次的復(fù)方鮮竹瀝液樣品（每家企業(yè)3 批次），按“2.2”項(xiàng)下方法制備，每批平行處理兩份，每份進(jìn)兩針。在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測(cè)定，以平均峰面積計(jì)算α-松油醇含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品的測(cè)定結(jié)果（μg/mL）

3 討論

3.1 前處理方式的選擇

復(fù)方鮮竹瀝液成分復(fù)雜，試驗(yàn)首先考察了頂空加熱直接進(jìn)樣以及溶劑萃取濃縮兩種處理方式測(cè)定復(fù)方鮮竹瀝液中的α-松油醇，但供試品中的α-松油醇含量較小且供試品液中薄荷油等成分存在較大干擾，故采取了固相萃取進(jìn)行凈化的方法進(jìn)行前處理。

3.2 目標(biāo)成分的確定

考慮到魚(yú)腥草蒸餾液中含有α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯等多個(gè)揮發(fā)性特征成分，試驗(yàn)最開(kāi)始測(cè)定復(fù)方鮮竹瀝液中α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯4 個(gè)組分的含量，但對(duì)6 家生產(chǎn)企業(yè)的樣品測(cè)定發(fā)現(xiàn)僅檢出α-松油醇，均未檢出4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯三個(gè)成分，故本研究只測(cè)定了α-松油醇。

3.3 測(cè)定結(jié)果分析

從樣品測(cè)定結(jié)果分析，生產(chǎn)企業(yè)的批間差異較小，但一家生產(chǎn)企業(yè)3 批次樣品均未檢出α-松油醇，且4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯也未檢出，認(rèn)為可以考慮該企業(yè)的生產(chǎn)工藝或投料存在問(wèn)題。