牛新孢子蟲病檢測與防控

王晴

摘要：牛新孢子蟲病是一種在全球范圍內(nèi)廣泛存在的牛寄生蟲疾病，其病原為全新孢子蟲?；疾∨Ｖ饕憩F(xiàn)為運動障礙，有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，懷孕母牛流產(chǎn)或娩出死胎，對養(yǎng)牛業(yè)的危害較大。該文介紹了牛新泡子蟲病的病原學、臨床癥狀、診斷及檢測方法及綜合防治措施，意在幫助廣大飼養(yǎng)管理人員正確認識這一疾病并加以預防，從根本上降低牛新孢子蟲病的發(fā)病率。

關鍵詞：牛;新孢子蟲;檢測;防控

中圖分類號：S858.23文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.24.069

Detection and Prevention of Bovine Neospora

WANG Qing

（Animal Disease Prevention and Control Center of Haiyang City，Haiyang Shandong 265100，China）

Abstract：Neosporabovis is a worldwide widespread bovine parasitic disease caused by Neospora. The affected bovine are mainly manifested as movement disorders，neurological symptoms，abortion or stillbirth of pregnant cows，which is more harmful to the cattle industry. This article introduces the etiology，clinical symptoms，diagnosis and detection methods，as well as comprehensive prevention and control measures of bovine neosporosis，which is intended to help the majority of feeding and management personnel to correctly understand the disease and prevent it，and fundamentally reduce the incidence of bovine

neosporosis morbidity.

Keywords：bovine，neospora，detection，prevention

0引言

據(jù)統(tǒng)計，全球范圍內(nèi)奶牛血液中的新孢子蟲抗體陽性概率為16.1%，而肉牛的血液內(nèi)新孢子蟲抗體陽性率為11.5%[1]，該病在多個國家和地區(qū)均有發(fā)生，我國的大部分地區(qū)也均報道過本病。隨著近年我國畜牧業(yè)發(fā)展的逐漸加快，奶牛和肉牛的飼養(yǎng)量均有一定程度的增加。母牛流產(chǎn)的問題一直困擾養(yǎng)殖戶，新孢子蟲也成為了造成母牛流產(chǎn)的重要因素之一。

1病原學

新孢子蟲為原生動物門、頂復亞門、孢子蟲綱、抱子蟲亞綱、新孢子蟲屬的成員之一，它可以感染多種動物，屬于多宿主寄生蟲，已知犬為該寄生蟲的終末宿主，同時也可以作為中間宿主。有研究人員在奶牛的腦組織中分離得到了組織包囊，又在奶牛的陰道分泌物和唾液內(nèi)找到了新孢子蟲的卵囊[2]，這證明牛也是新孢子蟲的宿主之一。此外，新孢子蟲還可以感染水牛、駱駝、紅狐、貓、豬、猴等其他動物。

新孢子蟲的發(fā)育階段分為速殖子、組織包囊、卵囊、裂殖體、裂殖子5個階段，速殖子階段的新孢子蟲呈卵圓形或新月形，能夠寄生在易感動物的神經(jīng)細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、腎小管上皮細胞、肌細胞、肝細胞等內(nèi)。組織包囊外觀呈卵圓形，主要寄生在脊椎、神經(jīng)和腦中。卵囊主要存在于犬的糞便中，卵囊經(jīng)24 h可形成孢子化的卵囊，孢子化后的卵囊有感染性。

該病的主要傳播形式為消化道傳播。當易感動物誤食了含有新孢子蟲或其卵囊的飼料、飲水后就會被感染。當哺乳母牛患病時，犢牛因采食母牛的乳汁也可被感染。懷孕母牛還可以經(jīng)過胎盤將新孢子蟲傳播給胎兒，當母?；加性摬r，可能會一連幾胎都會將新孢子蟲病傳播給胎兒。目前尚沒有明確的證據(jù)證明新孢子蟲病與交配行為有關。

2臨床癥狀

患病牛主要表現(xiàn)為四肢無力、運動失調(diào)、后肢麻痹，有較為明顯的頭部震顫，眼瞼反射遲緩，角膜有一定程度的渾濁。妊娠母牛容易發(fā)生流產(chǎn)和娩出死胎，且多發(fā)生于妊娠5～6個月時，也有少數(shù)病例在妊娠3個月就發(fā)生流產(chǎn)。未娩出的胎兒常常在子宮內(nèi)死亡后被母體吸收，變?yōu)槟灸艘翣睿灿械脑绠a(chǎn)或正常分娩出患有新孢子蟲病的患病犢牛。先天患病的犢牛出生后往往不能自主站立，四肢虛弱、僵直，在1～2周齡時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。

剖檢可見，中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、肝臟及內(nèi)臟組織中有多處顆粒結節(jié)，肌肉呈現(xiàn)黃白色條紋，皮膚有化膿性皮炎變化。大腦至腰部的脊髓區(qū)有膠性病變，脊髓灰質(zhì)明顯減少，有局灶性空洞。小腦發(fā)育通常不完全，在病變部位可以看到新孢子蟲的組織包囊。各個肌肉中均可能發(fā)生肌炎，尤其是集中在骨骼肌、咬肌等處。肝門靜脈有單核細胞浸潤，肝臟、腎臟、肺臟有壞死。懷孕母牛的胎盤絨毛壞死，壞死處可見蟲體病灶。

3診斷及檢測方法

根據(jù)患病牛的臨床癥狀和剖檢特征可以進行初步的診斷。但由于患有新孢子蟲病的懷孕母牛多表現(xiàn)為流產(chǎn)或死胎，且流產(chǎn)時間集中在妊娠5～6個月，這一癥狀與布魯氏菌病的臨床癥狀較為相似，而光學顯微鏡下新抱子蟲和弓形蟲的速殖子形態(tài)非常相近，需要進行鑒別診斷。如需確診，應當利用實驗室診斷和檢測方法。

3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

Pare等人首次使用ELISA法來檢測牛的新孢子蟲抗體，結果顯示，ELISA法檢測血清中抗體的敏感性可達89%，特異性為96.5%[3]，是比較理想的檢測牛新孢子蟲的方法之一。這一方法是以免疫學反應為基礎，利用抗原抗體的特異性反應實現(xiàn)的一種實驗技術。實踐中常應用的有ELISA雙抗體夾心法和ELISA間接法，2種方法的檢出率均可達到92%以上。

3.2間接熒光抗體試驗

間接熒光抗體試驗是將對生物活性沒有影響的熒光色素標記在抗原或抗體中，當其與對應的抗原或抗體結合后，就可通過熒光顯微鏡觀察特異性的熒光來得到檢測結果。該方法與ELISA法相比更為便捷、快速，但截至目前，仍沒有商品化的試劑盒可以應用于臨床。

3.3蛋白質(zhì)印跡試驗（Western blot）

該方法是通過特異性的抗體凝膠電泳對組織或細胞進行處理，經(jīng)過電泳后可以顯色得到蛋白條帶，這些特異性的條帶能夠幫助我們了解到特定蛋白的表達情況，從而進行診斷，這一方法與ELISA法的符合率約為97.89%。

3.4聚合酶鏈式反應試驗

有學者針對新孢子蟲Nc-5基因序列設計出特異性的引物，以DNA為模板建立了PCR檢測方法。這一方法的特異性強，敏感度高，檢測快速，可以廣泛應用于多種動物新孢子蟲病的快速診斷及流行病學調(diào)查[4]。

3.5其他方法

除4種方法外，環(huán)介導等溫擴散試驗、免疫組織化學法、親和素-生物素-過氧化物酶染色法、乳膠凝集試驗等多種方法均能作為診斷牛新孢子蟲病的診斷依據(jù)。新孢子蟲感染后的患病牛免疫機能會受到抑制，有研究認為懷孕母牛中后期流產(chǎn)也是由于免疫力低下所導致的胎盤損傷，胎盤中有大量CD3+、CD4+T淋巴細胞浸潤，同時有細胞抗原受體的大量表達，所以也可以通過觀察CD3+、CD4+T淋巴細胞的含量進行判斷。

4防控

對于患有新孢子蟲病的牛，沒有特效藥物可使用，僅能采用抗生素療法和對癥治療緩解癥狀。常用于治療新孢子蟲病的藥物有復方新諾明、西環(huán)素、羥基乙磺胺戊烷瞇、磷酸克林霉素、球蟲類離子載體抗生素等。但治療效果與患病牛的體況有一定關系。

目前，國內(nèi)外對于牛新孢子蟲病的防治仍處于研發(fā)階段，部分國家進入到動物實驗階段.已知獲得美國農(nóng)業(yè)部批準上市的疫苗僅有一種名為Neo-Guard的滅活疫苗，但具體的保護力沒有得到證實。1999年Andrianarivo的研究表明，新孢子蟲速殖子滅活后與4種不同的佐劑混合接種于奶牛，可以誘導奶牛產(chǎn)生一定的抗體，但是這一疫苗不能阻止奶牛經(jīng)胎盤將新孢子蟲傳播給胎兒，具有較大的危險。2010年我國的學者通過提取新孢子蟲的DNA而后進行擴增其表面蛋白基因，再將表達后的蛋白與佐劑混合制成亞單位疫苗，這一疫苗僅在實驗過程中應用于小鼠，結果顯示，小鼠在完成免疫后的第3天，抗體能夠達到保護水平，這證明這一亞單位疫苗很好地激活了小鼠的體液免疫和細胞免疫，為新孢子蟲病腺病毒載體疫苗的進一步研發(fā)奠定了基礎。

5結束語

目前沒有效果確實的疫苗和藥物可以對牛新孢子蟲病進行治療，所以需要養(yǎng)殖場的管理人員注重飼養(yǎng)管理。堅持自繁自養(yǎng)、全進全出，盡量減少從場外引入牛的數(shù)量，當需要引進牛，特別是進口種牛時，應當做好檢疫工作。在口岸進行隔離檢疫，進場后需要先隔離觀察，確定牛健康后方可混群飼養(yǎng)。另外，應對牛群進行細致的觀察，當發(fā)現(xiàn)有牛出現(xiàn)運動障礙、神經(jīng)癥狀或懷孕母牛出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎現(xiàn)象時，應當加以重視，及時地對患病牛進行隔離、診斷，確定為新孢子蟲感染的患病牛應當淘汰。只有不斷地將患病牛淘汰，才能將牛群凈化，減少發(fā)生新孢子蟲的概率。

參考文獻

[1]趙丹瑩，趙冠姝，于龍政，等.牛新泡子蟲病的臨床表現(xiàn)與流行概況[J].吉林農(nóng)業(yè)，2017（14）：66.

[2]劉文韜，穆永才，王麗坤，等.奶牛新泡子蟲病及其防制進展[J].養(yǎng)殖技術顧問，2007（11）：108-109.

[3]張濱麗，楊麗麗，于爾松，等.奶牛新泡子蟲病的診斷[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2004（12）：49-50.