孫叢萌
(梅州市婦女兒童醫(yī)院,廣東 梅州 514021)
隨著男性年齡的顯著增長,會顯著提高后代發(fā)生染色體出現(xiàn)缺陷的可能性。研究顯示男性年齡的增長與自然流產(chǎn)之間也存在著密切的聯(lián)系,但臨床男性年齡對生育產(chǎn)生的影響機(jī)制還不夠明確。此外,隨著男性年齡的顯著增長,也會提高男性精子DNA碎片率進(jìn)而影響男性的生育能力[1-2]。本研究中采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測精液中的精子DNA碎片率,探討精子DNA碎片率與男性年齡以及精液質(zhì)量之間的關(guān)系。
1.1 一般資料。選取435例于2017年1月1日至2019年6月30日在梅州市婦女兒童醫(yī)院輔助生殖接受夫精人工授精(AIH)的男性不育患者作為研究對象,年齡21~49歲,平均(32.32±5.54)歲,所有患者禁欲2~7 d,手淫法收集完整精液標(biāo)本,37℃完全液化后待檢。
1.2 方法
(1)精液質(zhì)量分析:精子濃度及精子前向運(yùn)動精子數(shù)(PR)采用以色列的MAKLER精子計(jì)數(shù)板手工法進(jìn)行精子計(jì)數(shù)。精子形態(tài)學(xué)分析洗滌精子,將0.5 mL精液加10 mL生理鹽水中稀釋,800 g離心10 min,使用拉薄技術(shù),將5~10 uL精子混懸液均勻涂在載玻片上。采用巴氏染色法進(jìn)行精子形態(tài)學(xué)的分類,通過光學(xué)顯微鏡觀察精子包括頭、頸、中段、主段和末段,每張涂片至少評估200個精子。
(2)精子DNA碎片檢測:精子DNA碎片檢測采用深圳博銳德生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒的檢測方法,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。
(3)按照精子DNA碎片率正常參考值(≤25%)進(jìn)行對比分析:對精子DNA碎片率>25%為高度碎片化,≤25%中度碎片化,≤15%為正常進(jìn)行劃分;按年齡組將435例患者劃分為≤30歲,>30-≤40歲及>40歲,進(jìn)行相關(guān)性分析。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用SPSS 20.0軟件對比較數(shù)據(jù)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以(±s)表示,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料表示方式為[n(%)],采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。對比其精子濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),PR、正常精子形態(tài)率、TZI對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。
表1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析(±s)
表1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析(±s)
≤25 345 74.26±57.02 48.62±15.20 3.56±2.63 1.35±0.16>25 90 68.13±61.65 34.20±14.93 2.29±2.29 1.47±0.21 t - 0.8929 8.0442 4.1851 5.9126 P - >0.05 <0.05 <0.05 <0.05
2.2 不同年齡組精子DNA碎片率結(jié)果對比分析。>40歲年齡組患者精子碎片率顯著上升,其他兩個年齡組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。精子DNA碎片率與男性不育患者年齡呈正相關(guān),見表2。
表2 不同年齡組DNA碎片率結(jié)果對比分析(±s)
表2 不同年齡組DNA碎片率結(jié)果對比分析(±s)
年齡組 ≤30歲(n=198) >30~≤40歲(n=192) >40歲(n=45)DNA碎片率(%) 17.45±10.52 17.61±12.70 24.70±16.25
2.3 圓細(xì)胞>1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。圓細(xì)胞>1.0×106/mL的精子DNA碎片率明顯上升(P<0.05);兩組精子濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),PR、精子正常形態(tài)率、TZI顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見表3。
表3 圓細(xì)胞>1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析(±s)
表3 圓細(xì)胞>1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析(±s)
組別 例數(shù) DNA碎片率(%) 濃度×106/mL PR(%) 正常形態(tài)率(%) TZI>1.0×106/mL 96 20.24±12.74 70.81±49.59 40.49±14.81 2.68±2.26 1.42±0.17<1.0×106/mL 339 17.71±12.21 73.61±60.21 47.1±16.32 3.47±2.68 1.36±0.17 t-1.7750 0.4172 3.5731 2.6345 3.0528 P->0.05 >0.05 <0.05 <0.05 <0.05
2.4 碎片率分組與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。三組的精子濃度對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);PR、正常形態(tài)率TZI對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4。
表4 碎片率分組與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析
2.5 碎片率分組與精液參數(shù)的相關(guān)性分析。精子DNA碎片率與男性不育患者精子濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與前向運(yùn)動精子百分率、精子正常形態(tài)率、TZI呈顯著性負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見表5。
表5 碎片率分組與精液參數(shù)的相關(guān)性
我國不孕不育癥的發(fā)病率約12.5%,且發(fā)病率呈逐年上升,男性不育是由精子和精漿的質(zhì)量決定的,精子的質(zhì)量影響了受精能力,在不育癥患者中,精子濃度、活力和形態(tài)的分析是評價(jià)精子質(zhì)量的診斷依據(jù),而這些精子質(zhì)量的傳統(tǒng)指標(biāo)只能評價(jià)部分功能[3-4]。精子DNA碎片率被認(rèn)為是一個新的評價(jià)精子質(zhì)量和預(yù)測男性生育能力的指標(biāo),精子DNA碎片率程度反映精子遺傳物質(zhì)的完整性,精子DNA碎片增加會造成不育和反復(fù)流產(chǎn)[5-6]。
本研究發(fā)現(xiàn)隨著精子DNA碎片率上升,精子濃度有下降趨向,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,PR、精子形態(tài)學(xué)、TZI呈顯著性負(fù)相關(guān)。通過3個不同年齡段的精子DNA碎片率分析,>40歲年齡組精子DNA碎片率明顯高于其他年齡組,可能與男性年齡增長、自由基增加造成染色質(zhì)異常、睪丸生精過程DNA 修復(fù)能力降低有關(guān)。本研究認(rèn)為精液圓細(xì)胞增多,可能與精子質(zhì)量下降呈正相關(guān)。因此,精子DNA碎片率檢測作為精液常規(guī)分析的重要補(bǔ)充,能夠更全面地評估男性精液質(zhì)量水平。
綜上所述,精子DNA碎片率與男性不育患者年齡呈正相關(guān),與精子濃度無顯著性差異,與前向運(yùn)動精子百分率 、精子正常形態(tài)率、TZI呈顯著性負(fù)相關(guān)。精子DNA碎片率可以獨(dú)立作為精子質(zhì)量評價(jià)指標(biāo).也可以結(jié)合其他精子質(zhì)量作為評價(jià)指標(biāo),為評估男性不育癥提供更全面的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。